食品中金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法分析

賀學俊

摘要：在所有食物中毒型病毒中，金黃色葡萄球菌腸毒素在其中最為常見。由于其在社會環境中無處不在，因此也深深影響著人們的飲食安全。基于此，本文簡要分析金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測方法，以期為相應工作者有所啟發。

關鍵詞：金黃色葡萄球菌;腸毒素;檢測方法

【中圖分類號】R512.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2020）01-149-02

食品中金黃色葡萄球菌腸毒素主要是食物被某些物質污染后，經過腐敗變質而產生的。從一些資料文獻可以看出，引起金黃色葡萄球菌食物中毒，僅需18ug的腸毒素（SE），并且當前已被確認的SE已經有10類，其分別為a、b、c、d、e、g、h、i、j、k。而在這之中c類因電點差異，有又可以分為三類（c，、c：，c），容易引發食物中毒的主要為a、d兩個類型[1]。基于此，若在食物檢測時，沒有合理運用相應的檢測手法，會嚴重危害人們的飲食安全，甚至還有可能帶來嚴重的影響。因此，深入研究食品中金黃色葡萄球菌腸毒素檢測方法具有一定的現實意義。

一、金黃色葡萄球菌菌腸毒素檢測方法

從檢測原理的角度出發，可以將金葡菌腸毒素檢測方式細分成五個角度：超抗原技術、生物傳感器技術、聚合酶鏈反應技術、免疫血清學方法、生物學檢測方法。其具體檢測方式如下：

（一）超抗原技術

當前一些研究機構經實驗分析認為，可以利用SE中的超抗原（SAg），來進行該類病原體的檢測。其主要是因為SAg的刺激能力較強，其能與MHc1分子結合，并且不需對其進行加工，就能與T細胞抗原體上的TCRVβ，較好的結合在一起。因為在TCRVβ中，含有的基因有限，且擁有保守的核苷酸序列。所以，僅需在較低（甚至更低）的濃度下，大量的T細胞既可被SAg激活[2]。基于此，一些研究機構依據SE中的SAg分子，運用流式細胞分析技術，觀測T細胞的實際情況，進而將其中的SE篩選出來。固然此類方式能較好的檢查出食物中的SE，然而卻沒有相應的特異性，無法對SAg類型作出精準的判斷。所以，只能將其作為一個預選處理的手段。

（二）生物傳感技術

自進入90年代以后，毒素檢測技術在生物技術持續發展的支撐下，得到了較好的發展——生物傳感技術。當前，運用生物傳感技術主要有三類用于食品毒素檢測：壓電晶體免疫傳感器、光學生物傳感器、電化學免疫傳感器。壓電晶體免疫傳感器，其主要將特異免疫反應和壓電質量傳感器（高靈敏度）兩者有機結合在一起，其在石英晶體阻尼的理論基礎上，能將要檢測的SEB在檢測液直接檢測出來，并且不用進行任何的步驟分離和標記，操作方便、簡單，但是其靈敏度較低;光學生活傳感器，其主要在換能器中運用光敏元件，并依據光的相位、頻率、強度等在相應界面中的變化原理，進而檢測毒素在介質中的含有量。該方式的有點為：較高的靈敏度;電化學免疫傳感器，其主要是將電化學技術和生活技術有機的結合在一起，其既能進行化學放大（酶電極），又具備良好的識別功能（識別抗原體間分子）。

（三）聚合酶鏈反應技術

聚合酶鏈反應技（PCR）術主要是指利用其的特異性和高敏性，檢測食物中的毒素基因，并且運用該種方式能夠進行直接檢測。一些研究學者運用PCR檢測方式，在四小時內完成對TST、SECL以及SEB等基因的檢測，甚至有些研究人員發現，運用該種方式甚至能對細菌的克隆進行測量。同事，一些科學家在依據PCR的特性，延伸出多重PCR檢測方式，其能將金葡菌腸毒腸毒素中的SEA，SEB，SEC，SED，SEE六對引物基因較好的檢測出來[3]。此類方式較單一引物而言，更加有效、可靠、更具特具性。通過PCR檢測方式，進行相應的檢測，不僅擁有較好的重復性、較強的特異性、較高的敏感性，還能及時的診斷出相應的病原，但就目前而言，其無法進行定量分析。此處應注意的是，有些盡管有些菌株擁有產毒基因，但是其卻不會生產毒素，其有可能是該基因沒有被激活，無法進行基因表達。所以，在運用PCR檢測方式時，應充分考慮各類因素，還未檢測到毒素的情況下，還應運用其它的檢測方式，進而防止遺漏檢測的情況發生。

（四）免疫血清學方法

從一些資料文獻可以看出，檢測腸毒素的有六類：既酶聯免疫吸附實驗（ELISA）、免疫印跡技術（Immur～obloting）、固相放射兔疫技術（SPRLA）、反向乳膠凝集試驗（RPLA）、反向間接血凝法（RPHA）以及免疫雙擴法（DD）。當前由于ELISA具有較高的的靈敏度，相對較為簡單的操作方式，據實驗室大量數據表明，運用ELISA進行SE檢測，其靈敏度高達2.5ng/mL，所以這幾年該檢測方式為主流方式。在2002年，我國相關研究人員（李紅云），通過以SEB單抗1D2為包被抗體、生物素標記的另一種SEB單抗2D1為標記抗體，采用生物素一鏈親素系統放大的雙抗體夾心酶聯免疫吸附方法進行測定血漿及組織中金黃色葡萄球菌腸毒素B，在0.078～10.00～g/L的濃度范圍內，SEB標準品濃度與吸光度值線性關系良好，相關系數為r=0.9906，經實驗室反復驗證，發現該方式快速、簡單，具備較強的穩定性，能定量測定動物組織和其血漿中微量SEB，具有一定的推廣價值。此外，該方式相對現有檢測方式而言，其靈敏度最高，但在腸毒素型與型之間易發生交叉反應，多用于直接從食品中檢出腸毒素，在腸毒素分型上應用較少。其它的檢測方式，如免疫印跡和SPRIA等，盡管有較高的靈敏性，但是要么是儀器成本過高，具有一定的放射性污染，要么是操作過程過于復雜，特別是體重的DD檢測法，盡管其是最早檢測腸毒素的手段，但是由于其操作流程繁瑣，需要大量的標本，并且靈敏度也不高，所以沒有被推廣。

（五）生物檢測技術

生物檢測技術，其主要是將分離的SA菌株培養液、染毒食品或患者的嘔吐物，注射到敏感動物的皮膚中或對其進行喂飼實驗，最后看實驗動物的狀態反應，進而判斷SE是否存在于檢測物中。但是此類檢測手段沒有不是特別的理想，因為與人在中毒后（腸毒素）反應類似的動物，只有豚鼠和猴兩類。并且此類方式的靈敏度不高，要經過非常繁瑣的操作流程，較難將實驗中午配備齊全，較難推廣[4]。此后，在1997年，某個研究機構，發現運用兔血T—細胞可以較好的彌補之前生物檢測技術中的缺陷問題。

二、結語

從上述的內容中可以看出，當前在SE的檢測方式上，既有利也有弊。從當前對金黃葡萄球菌腸毒素在食物中的檢測，主要采用的是血清學檢測方式，而上述的其它類型檢測方式，在醫學檢測中運用的較多。但是，就當前的檢測方式而言，還存在一定的不足，因此，相應的部門機構還應加深對SE檢測方式的研究，進而推出更高靈敏度，更便捷的檢測方式，更高效的檢測流程等。

參考文獻：

[1]鄭玉玲，歐陽譞，黃文華，劉鵬，孔德聰，姜永強，韓雪蓮，律清宇，江華.金黃色葡萄球菌腸毒素陣列ELISA檢測方法的建立及評價[J].細胞與分子免疫學雜志，2019，35（08）：695-701.

[2]陳鏡如，梁惠，陳欣林，石明，黎誠耀，張玉明.金黃色葡萄球菌腸毒素C促進異基因骨髓移植小鼠早期T細胞重建[J].實用醫學雜志，2019，35（15）：2365-2369.

[3]張彥斌，范鑫，朱葉青，張宏博.食品中金黃色葡萄球菌腸毒素分子檢測方法探索[J].臨床醫藥文獻電子雜志，2019，6（54）：174.

[4]楊丹茹，趙燕英，唐俊妮.金黃色葡萄球菌腸毒素SEK的純化及DAS-ELISA檢測方法的建立與應用[J].現代食品科技，2019，35（03）：225-233.

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