血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平對乳腺癌化療療效的預測價值分析

張 琦

(河南省安陽市人民醫院放療科 安陽 455000)

當前臨床對于乳腺癌主要采用手術聯合化療藥物治療或生物治療方式進行干預，從而避免腫瘤復發和轉移，一定程度上延長病患生存時間[1～2]。但由于少數病患在實施化療藥物治療時會出現化療藥物耐藥性等問題，從而降低化療效果。隨著臨床對化療藥物耐藥性問題的研究不斷深入，有研究指出[3]乳腺癌耐藥蛋白水平同化療藥物耐藥性之間存在緊密關聯性。但目前臨床對這一說法尚未形成統一結論，一定程度上限制化療藥物治療效果的提升。因此，本次研究通過分別觀察乳腺癌化療病患與健康體檢者血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平，對乳腺癌病患化療前后血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2019年5月～2020年5月期間接收的42例新輔助化療乳腺癌病患為實驗組，另選擇同時期在本院開展健康體檢的42例女性為對照組。對照組平均年齡(48.69±5.34)歲，平均體質指數(22.96±1.05)kg/m2；實驗組平均年齡(48.78±5.46)歲，平均體質指數(23.08±1.10)kg/m2。將每組一般數據輸入統計學軟件實施分析，具有可比性(P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1材料和儀器

(1)RNA提取試劑盒采購至北京索萊寶科技有限公司；(2)PCR檢測儀采購至青島聚創時代環保技術有限公司。

1.2.2檢驗方式

(1)血漿微泡采集方式：全部研究樣本均采集空腹上臂靜脈血4ml，將其放置在乙二胺四乙酸抗凝管內，置于3000轉/min的離心機中實施3min離心處理；隨后將血漿和磷酸鹽緩沖液以1∶2的比例實施稀釋，并選擇500g稀釋后液體開展10min離心處理，除去細胞碎片；選擇2000g稀釋后液體開展30min離心處理，除去血小板；選擇10000g稀釋后液體開展70min離心處理，最后經沉淀獲得血漿微泡。選擇20ul磷酸鹽緩沖液，將其溶解后放置在-80℃冰箱中保存。(2)采用Max Vision TM一步法實施免疫組化分析，將已知陽性切片作為陽性對照，將PBS液代替一抗作為陰性對照。(3)mRNA檢測方式：使用Trizol裂解液對病理組織和微泡實施總RNA提出，cDNA標本主要是采用MMLV試劑盒進行反轉錄，擴增則是進行實時定量PCR法。

1.3 觀察項目

(1)比較每組研究樣本血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量。(2)比較實驗組病患化療前后療效：將化療效果分成疾病進展(PD)、疾病穩定(SD)、部分緩解(PR)以及完全緩解(CR)，其中PD以及SD屬于無效，PR以及CR屬于有效。血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白染色結果以陽性細胞數目以及著色程度作為反應強弱的判斷標準。陽性細胞在觀察細胞中占比積分標準：陽性細胞≤10%記作1分，在10%～50%之間記作2分，在51%～75%之間記作3分，>75%記作4分。染色強度計分標準：未染色記作0分，淡黃色記作1分，棕黃色記作2分，棕褐色記作3分。依據上述兩項指標乘積對結果實施分級，其中0～3分屬于陰性，4分屬于(+)，6分屬于(++)，≥8分屬于(+++)，≥6分屬于血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性。依據MP分級對癌組織切片實施病理分析，其中1～2級屬于組織學非顯著反應(NMHR)，3～5級屬于組織學顯著反應(MHR)。

1.4 數據處理

2 研究結果

2.1 比較兩組血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量

對照組血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量低于實驗組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量對比

2.2 分析實驗組病患化療療效

42例乳腺癌病患開展新輔助化療后，1例(2.38%)為PD，7例(16.67%)為SD，27例(64.29%)為PR，7例(16.67%)為CR，化療總有效率是80.96%。

2.3 分析化療前后血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白表達情況

化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白表達陰性以及(+)共19例，表達(++)者有13例、表達(+++)者有10例，陽性表達率是54.76%(23/42)。在實施化療后，PR組有9例轉變為陽性表達，1例轉為陰性，SD組有2例轉為陽性表達。CR+PR組化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性表達率是47.06%(16/34)，SD+PR組化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性表達率是87.50%(7/8)。化療前兩組血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性表達率、病理反應以及淋巴結轉移方面比較存在明顯差異(P<0.05)，見表2。

表2 化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白表達同化療療效的關系分析(例)

2.4 化療前后患者血漿微泡中BCRPmRNA相對含量與化療療效的對比

化療前，各組BCRPmRNA相對含量差異無統計學意義(P>0.05);化療后,SD+PR組血漿微泡中BCRPmRNA相對含量明顯低于CR+PR組患者,差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 化療前后患者血漿微泡中BCRPmRNA相對含量與化療療效的對比

3 討論

針對存在手術治療可能的晚期局部乳腺癌病患而言，手術前采用化療藥物干預，可一定程度上降低原發腫瘤病灶以及轉移淋巴結體積，進而將其腫瘤TNM分期，提升手術切除完全性[4]。針對實施乳腺癌根治性手術的病患而言，在手術后采取輔助化療以及生物靶向治療，可有效預防疾病復發，控制微小病灶，增加病患生存時間[5]。但在臨床應用過程中發現，仍然有少數病患在實施綜合干預措施后無法達到預期目標，進而發生轉移以及復發情況，通過分析發現導致該種情況發生的主要原因是因腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性，從而降低治療效果[6]。因此，臨床將探尋引起腫瘤細胞出現耐藥性的原因作為研究重點。

當前乳腺癌病患化療多藥耐藥性已經受到臨床高度重視，其中乳腺癌耐藥蛋白屬于耐藥相關分子，其主要分布在細胞膜表層，其通過介導細胞膜外與細胞膜內的藥物轉運，利用三磷酸腺苷水解時產生的能量促使細胞內藥物轉運至細胞膜外，進而實現轉運過程[7]。通過轉運過程可降低細胞內藥物濃度，如果癌細胞細胞膜上存在大量乳腺癌耐藥蛋白，則會導致癌細胞中化療藥物濃度下降，無法發揮殺滅癌細胞的作用[8]。本次研究中，在血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量方面，實驗組高于對照組(P<0.05)。42例乳腺癌病患開展新輔助化療后，化療總有效率是80.96%。化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性表達率是54.76%。化療前血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性表達率、病理反應以及淋巴結轉移方面比較存在明顯差異(P<0.05)；而化療后,SD+PR組血漿微泡中血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA相對含量明顯低于CR+PR組患者,差異有統計學意義(P<0.05)。微泡通常是細胞處于病理或生理狀態下才會分泌的一種微小囊泡，直徑通常在30～1000nm之間，包含微粒、脫落小泡和外泌體，同時其也是一種重要的細胞間通訊間質，存在細胞間遺傳物質水平轉移介導作用，另外也可使鄰近細胞共同享有遺傳物質，最終達到組織內不同細胞與鄰近細胞功能相關協調的目的[9]。但是對于出現耐藥性的乳腺癌病患而言，由于血漿微泡水平較高，從而使得化療藥物抑制癌細胞功能降低，因此化療效果不佳，提示血漿微泡中乳腺癌耐藥蛋白mRNA的含量可能與化療的療效有關。監測血漿微泡中乳腺癌耐藥蛋白mRNA水平對新輔助化療對乳腺癌的療效具有預測作用，這與既往的一些研究結果基本一致。另外，通過觀察不同病理指標病患血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白陽性率，可知對于能夠實施手術治療的局部晚期乳腺癌病患而言，選擇合適的治療措施尤為重要。

綜上所述，乳腺癌化療耐藥性同血漿微泡乳腺癌耐藥蛋白mRNA含量有關，可通過觀察該指標水平來對疾病預后進行判斷。