基于高效液相色譜法的伊和·古日古木-13 丸蒙藥制劑中梔子苷含量測定

2021-09-18 09:40:40宋超段羚趙艷霞寶山巴乙拉

世界最新醫學信息文摘 2021年65期

宋超，段羚，趙艷霞，寶山，巴乙拉

（1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內蒙古包頭；2 內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古，呼和浩特）

0 引言

伊和·古日古木-13 丸為內蒙古國際蒙醫醫院提供[1]，由西紅花、丁香、大托葉云實、麥冬、木香、訶子、川楝子、梔子、紫檀香、麝香、熊膽粉等13 味藥材組成。主要用于清肝熱、解毒、殺黏。主治肝腫大、肝衰、配制毒、肝硬化、肝中毒、腎損傷、尿閉、熱性亞瑪癥[2]。本研究對本制劑的梔子中梔子苷進行了高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）含量測定方法研究[3]。對方法進行試驗研究后顯示，該測定方法具有很好的重現性，同時具有較強的專屬性，且組方中的其他成分對于梔子苷的測定不會產生任何的干擾。本研究對具體的試驗情況進行了詳細的研究。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器

日本島津LC-2010AHT 高效液相色譜儀，LC-10ADVP 輸液泵，SPD-10AVP 型檢測器；色譜柱為Alltima C18柱(250mm×4.6 mm，5μm) 色譜柱。Precisa 92SM-202A 型電子分析天平。

1.2 試劑與試藥

試劑：梔子苷對照品（批號：110749-201919），純度97.1%，提供方為中國食品藥品檢定研究院；供試品三批（批號：20 200226；20 200305；20200308），由內蒙古國際蒙醫醫院提供，自制樣品一批，由包頭市食品藥品檢驗檢測中心自制；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純[4]。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性實驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（15 ∶85)為流動相；檢測波長為238nm。理論板數按梔子苷峰計算應不低于 3000[5]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取適量的梔子苷對照品進行精密的稱定，在其中加入一定量的甲醇，制取成每1ml 含有30μg 的溶液，所得溶液即為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品適量，研細，取約1g，精密稱定后將其放置于有塞蓋的錐形瓶中，并加入50ml 甲醇后稱取重量進行超聲處理，時間為40min，將其冷卻處理后再次稱取重量，將失去的重量以甲醇補足，將所得溶液搖勻后進行濾過處理，稱取出10ml 濾液并將其放置于25ml 的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得[6]。

2.3 測定法

在精密吸取的條件下分別取出分別10μl 的對照品溶液及10μl 的供試品溶液，將液相色譜儀注入后進行測定，即可獲得。

2.4 提取方法的選擇及提取時間的考察

參考《中國藥典》2015 年版一部[7]“梔子”項下，以甲醇作為提取溶劑進行超聲處理，試驗中考察了超聲20min、30min、40min、60min 等不同提取時間對提取效率的影響。通過分析得出，超聲處理40min 時得到含量最高的供試品中的梔子苷，因此將超聲提取時間定為40min。

2.5 專屬性

陰性對照試驗：分別取供試品溶液和對照品溶液，另外取出相同工藝制備條件下的陰性對照（缺梔子），以供試品溶液的制備方法制取陰性對照溶液。在相同的色譜條件下分別吸取10μl 的對照品溶液、10μl 的陰性對照溶液和10μl 的供試品溶液，將其分別注入液相色譜儀，測得的結果顯示在相應的保留時間下陰性對照色譜中沒有出現色譜峰，這就提示組方中的其他成分不會干擾到梔子苷的測定。

2.6 線性關系考察

取測定項下的對照品溶液，搖勻(梔子苷實際濃度為29.92μg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對梔子苷的進樣量進行回歸分析，結果梔子苷在進樣體積在1-20μl 范圍內呈良好的線性關系。回歸方程為Y=0.5045X+0.0699，R2=0.9996。

2.7 穩定性試驗

取同一份供試品（批號：20200226）溶液，分別于0h、3h、6h、9h、12h、24h 進樣測定，從數據可見，梔子苷在24h內的峰面積積分值基本穩定不變RSD 為0.18%（n=6）。

2.8 精密度試驗

取同一份供試品（批號：20200226），連續進樣6 次，將梔子苷峰面積積分值進行測定。RSD 為0.43%(n=6)，表明精密度良好。

2.9 重復性試驗

按測定項下的方法，對同一批樣品（批號20200226)進行供試品溶液的制備，共制備6 份，將峰面積分值進行測定后計算出含量。平均含量為3.56mg/g，RSD 為0.34%。表明該方法重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取已知梔子苷含量的樣品（批號 20200226 含量3.43mg/g）9 份，對其進行精密的稱取后放置在具有塞蓋的錐形瓶中，并在其中的3 份中加入梔子苷對照品甲醇溶液，濃度為1.0052mg/ml，量為1ml，另外的3 份中加入對照品溶液2ml，按照測定方法進行制備，對每份的含量進行有效的測定，將回收率進行計算后得出，平均回收率為98.81%，RSD 為0.81%。