結核分枝桿菌γ-干擾素釋放試驗在結核感染診斷中的價值分析

楊歆 劉瓊

【摘要】目的：測評結核分枝桿菌（MTB）γ-干擾素（γ-IFN）釋放試驗（IGRAs）用于結核感染疾病診斷中的價值。方法：選擇2018年10月至2019年12月期間在我院就診的88例MTB感染患者，其中痰涂陽性肺結核32例（甲組）、痰涂陰性肺結核38例（乙組）與單純結核性胸膜炎18例（丙組），取同期健康體檢志愿者45例（空白組），以受試者均進行IGRAs與TB-DNA檢測，統計試驗檢測情況。結果：甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性率分別為87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，差異存在統計學意義（P<0.05）；對比不同分型結核菌感染內痰涂片與TB-DNA檢出陽性率，未見顯著性差異（P>0.05）；IGRAs的敏感性、特異性分別為90.91%、77.27%，和PPD皮試76.14%、52.27%相比較，存在顯著性差異（P<0.05）。結論：結核感染臨床檢查診斷中配合使用IGRAs，表現出較高的診斷價值，值得普及推廣。

【關鍵詞】結核感染；γ-干擾素；釋放試驗；診斷價值

[中圖分類號]R52；R446.5 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）13-0153-02

MTB能以呼吸道、消化道與破損皮膚等為載體感染機體，可能還會導致多種臟器組織的結核病。結核病診斷始終是本病防治領域中的一大難題，結核培養與涂片抗酸染色為診斷結核的“金標準”，但暴露出培養周期長、靈敏度偏低、假陰性率偏高的不足[1]。肺外結核因完整標本獲得困難或載菌量偏低等，構建病原學診斷的概率偏少，進一步增加結核感染診斷及鑒別診斷的難度，增加漏診、誤診率，很可能使患者錯過最佳治療時機。IGRAs能激活CD4+、CD8+T細胞產生的MTB，進而定性判斷其是否存在著MTB感染，為結核病臨床診治提供較可靠的支持[2]。為明確IGRAs診斷MTB感染的價值，本課題研究納入了88例MTB感染患者與45例健康體檢志愿者資料，均進行了IGRAs檢測，針對具體情況作出如下報告分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年10月至2019年12月期間在我院就診的88例MTB感染患者，45例健康體檢者資料進行分析，參照結核類型把88例患者分為三組：甲組32例中男女比17： 15，年齡22～74歲，平均年齡（54.1±5.6）歲；乙組38例內男女比1： 1，年齡21～75歲，平均年齡（55.7±5.0）歲；丙組18例中男女比11： 7，年齡20～77歲，平均年齡（56.7±5.9）歲。空白組45例中男女比8： 7，年齡19～77歲，平均年齡（55.8±6.0）歲。以上受試者基線資料兩兩比較后，均無顯著性差異（P>0.05）。MTB感染者均有確診診斷[3]，均有進行IGRAs的指征，排除HIV感染、并發糖尿病、免疫抑制劑用藥史、孕期婦女。肺部有典型結核病灶，且痰涂片找抗酸桿菌陽性即為痰涂陽性患者；肺部有典型結核病灶，但痰涂片找抗酸桿菌陰性即為痰涂陰性患者；肺部無典型結核病灶，僅一側或雙側胸腔積液，抽取胸水完善檢查明確胸水性質為結核性者為單純結核性胸膜炎患者。

1.2方法 ①IGRAs：MTB感染者于次日晨起空腹狀態下抽取4 mL肘靜脈血，空白組于體檢當日抽取4 mL靜脈血，分別安放于兩支抗凝管內，P、T、N管內分別添加植物血凝素、培養濾過蛋白10（CFP-10）、生理鹽水，以上三管依次作為陽性對照、試驗刺激管、空白對照管。把三管均安放于37℃恒溫水浴箱內，連續培養24h，分離后予以12 min的離心處理，4800r/min，分離血清后提取上層血清，采用ELISA試驗檢測MTB。②痰結核分枝桿菌核酸（TB-DNA）： 采集受試者血清（EDTA抗凝管，室溫條件下3000r/min離心10 min， 取上層清液），嚴格依照磁珠法核酸提取說明書提取DNA，針對提取的DNA樣本量安放于-20℃冰箱內保存，備用。利用MTB DAN熒光定量PCR完成擴增，配合使用PE7500分析軟件設定基線和閾值，建設標準曲線，每個標準店均要重復兩次，觀察曲線的斜率與相關系數，通過斜率計算出擴增效率。

1.3觀察指標 痰涂陽性結核：結核痰涂片陽性結果，結核相關臨床癥狀與影像學表現，而后對結核病作出診斷。痰涂陰性結核：符合如下≥3項時就預示著臨床診斷成立：①出現經典的肺結核臨床癥狀與肺CT表征；②能剔除他類非結核性肺疾病；③PPD或抗結核抗體顯陽性；④確診經抗結核方案醫治有效。檢測效能；分別記錄兩組檢測方法對肺結核病診斷的敏感性、特異性、準確性。

1.4統計學處理 用SPSS16.0軟件包處理數據，x±s表示計量資料；率（%）表示計數資料，c2檢驗。檢驗水準為c2=0.05。

2 結果

2.1IGRAs檢測情況 四組受試者都完成了IGRAs檢測，甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性檢出分別有28例、26例、9例、2例，占比依次為87.50%（28/32）、68.42%（26/38）、50.00%（9/18）、4.44%（2/45），比較不同分組受試者IGRAs陽性率，差異存在著統計學意義（P<0.05）。比較兩組肺結核患者血IGRAs與痰TB-DNA陽性檢出率后，確認其無顯著性差異，詳見表1。

2.2兩種不同方法的檢測情況 IGRAs與PPD皮試方法的陽性檢出率分別為90.91%（80/88）、89.77%（79/88）。兩種方法對結核病的診斷準確率差異不顯著，IGRAs檢測的敏感度、特異性更高于PPD皮試法，有統計學意義（P>0.05）。詳見表2。

3 討論

結核病是由MTB感染引起的，呼吸道傳播是人群傳播的主要途徑，解除排菌的肺結核患者是主要的傳染源。MTB可以侵犯機體周身各個器官，以肺臟為主，腦膜、腹膜、骨骼等也有繼發感染的可能。在環境污染、個體免疫機能降低等諸多因素作用下，近些年結核病致死人員有增加趨勢，WHO預算[4]，2017年全球結核病潛伏感染17億人，結核病發病率為133/10萬，結核病致死157萬人。除了少數是急性起病之外，臨床上結核病發病通常是慢性進展性的，患者經常有低熱、乏力等全身性癥狀與咳嗽、咯血等呼吸系統表現，一些結核病也可能沒有癥狀。藥物療法是當下治療結核病的重要手段之一，本病治療周期相對較漫長，針對活動性結核患者，通常需要連續用藥6～9月。

盡早對結核病作出正確診斷，進而采用規范化對癥治療，能盡早減輕或消除疾病癥狀體征，促進病情康復，改善患者生命健康質量。現如今，臨床可供選擇診斷結核感染的方法手段較多，其中細菌性培養為診斷本病的“金標準”，但其敏感性較低并且會耗用較長時間，在診斷肺外結核病方面不占優勢，影像學、MTB抗體檢查、分子診斷等方法在應用過程中均有一定局限性[5]。故而，臨床繼續探尋一種靈敏度高、特異性強的方法，盡早在結核感染發病早期作出準確診斷。

IGRAs是最近幾年中開發出的一種新型免疫學方法，其能對MTB感染快速作出診斷。原理可以做出如下闡述：人體在感染MTB以后，體內就存在了特異的記憶T淋巴細胞，其于體外再次受到CFP-10等 MTB特異抗原刺激作用時，便會快速分泌于釋放出γ-IFN，這樣我們便可以通過檢測γ-IFN水平，進而感知機體對MTB表現出的免疫應答狀態，進而對機體是否出現MTB感染作出科學判斷[6]。在本次研究中，甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性率分別為87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，數據差異較為顯著，存在統計學意義。而比較兩組肺結核患者血IGRAs與痰TB-DNA陽性檢出率后，確認其無顯著性差異。另外，本次課題研究中IGRAs檢測時采用了國產TB-IGRA是新鮮外周全血直接刺激培養，對實驗室設備沒有提出特別要求，CFP-10試劑為致病性特有但卡介疫苗沒有的片段，其能較準確的辨識真性結核感染，解除BCG接種等方法形成的干擾。統計研究結果，IGRAs的敏感性、特異性分別為90.91%、77.27%，均高于PPD方法下的76.14%、52.27%，均形成較明顯的差異，這間接的提示IGRAs是結核病診斷“金標準”之外的一個十分有效的輔助診斷方法[7]。并且TB-IGRA試劑在成本方面占據優勢，能為我國基層醫院診斷MTB感染提供一個有力、可靠工具。試劑有操作流程簡單、迅速特征，24h便可出報告，為早發現、診治結核病提供較科學依據[8]。

綜合全文論述內容，IGRAs用于診斷MTB感染表現出較高的敏感度與特異性，能幫助臨床醫生盡早發現結核病，為診療方案制定工作提供較科學依據，可見其有較高的普及與推廣價值。

參考文獻

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基金項目：衡陽市科技計劃項目“肺部高分辨率CT、IFN-γ釋放試驗、痰TB-DNA在肺結核中的診斷價值比較”（編號：S2018F9031021259）

作者簡介：楊歆（1984.08-）， 女， 研究生， 主治醫師， 研究方向：常見傳染病的臨床診治；

*通信作者：劉瓊（1986.08-），女，碩士，主治醫師，研究方向：病毒性肝炎、結核病的診治。E_mail：drliuqiong@163.com