巖藻黃素抗D-gal誘導SH-SY5Y細胞衰老作用及機制研究*

朱敏敏，李云鵬，張 淼，李曉雙，成 敏，周珍瓊，劉順梅，4**

(1.濰坊醫學院生命科學與技術學院，山東濰坊 261053；2.濰坊醫學院科研處，山東濰坊 261053；3.濰坊醫學院基礎醫學院，山東濰坊 261053；4.濰坊醫學院醫學研究實驗中心，山東濰坊 261053)

0 引言

自噬(Autophagy)是一種自降解過程，通過清除體內衰老和受損的細胞器以實現細胞的自我更新。適度的自噬通過消化、降解胞內受損的DNA、功能失調的線粒體等降低氧化應激，可延緩細胞的衰老[1,2]，但自噬過度也會加速細胞的衰老。在衰老進程中，細胞自噬作用呈下調趨勢。然而，自噬可被機體內外的多種因素誘導而發生，自噬能調整細胞在應激條件下的存活能力，不同因素誘導的自噬作用增強是多種真核生物壽命延長所必需的[3,4]。研究表明自噬與細胞衰老具有非常密切的關系，是極其重要的衰老相關的調節機制[5,6]。自噬與阿爾茨海默病、帕金森病等神經退行性疾病的發生密切相關，自噬相關通路的缺陷可能會導致上述疾病的發生[7,8]。由此看來，能調控神經細胞自噬的物質可能會對神經退行性疾病的預防具有重要意義，對這類物質的研究有可能為神經退行性疾病的防治提供新思路和新藥物。

巖藻黃素(Fucoxanthin，FUCO)是廣泛存在于褐藻和硅藻中的類胡蘿卜素，具有抗癌[9,10]、抗氧化[11,12]、降血糖[13,14]等多種生物活性。Lashmanova等[15]和 Moskalev等[16]用果蠅和線蟲研究發現FUCO具有延緩衰老的作用，本課題組也發現FUCO可抑制H2O2引起的人WI-38細胞早衰[17]，Zhang等[18]發現FUCO能通過調控自噬途徑減輕外傷對神經細胞的損傷作用。

鑒于神經自噬與個體衰老、神經退行性疾病的發生都具有非常密切的關系，本研究利用D-gal誘導建立神經細胞衰老模型，研究FUCO抗神經細胞衰老的作用，并探討自噬是否參與其抗衰老作用過程，以期為FUCO的藥用活性研究提供理論基礎，為我國豐富的海藻資源的高值化利用及衰老相關神經退行性疾病的預防治療提供理論指導與參考。

1 材料與方法

1.1 材料

CO2細胞培養箱(Thermo Scientific，150i)；酶標儀(Thermo Scientific，Multiskan Go)；透射電子顯微鏡(日立，HT-7700)；化學發光凝膠成像系統(ProteinSimple，FluorChem Q)。

人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y細胞，上海酶研生物科技有限公司)；FUCO(Sigma，純度為≥95%)；D-半乳糖(D-Galactal，D-gal，索萊寶生物科技有限公司，純度為99.0%)；噻唑藍(MTT)、丙二醛(MDA)及SA-β-半乳糖苷酶染色試劑盒(碧云天生物技術有限公司)；雷帕霉素(Med Chem Express)；β-actin小鼠單克隆抗體及辣根過氧化物酶標記的山羊抗小鼠二抗(中杉金橋生物技術有限公司)；mTOR、LC3及ATG5兔單克隆抗體及辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔二抗(Cell Signaling Technology)。

FUCO的配制：將50 mg FUCO用10 mL二甲基亞砜(Dimethyl Sulfoxide，DMSO)溶解，渦旋振蕩促進FUCO充分溶解，FUCO終濃度為7 588 μmol/L，分裝后置于冰箱-80℃保存備用。

D-gal的配制：稱取適宜質量的D-gal，用DMEM高糖培養基溶解，配成濃度為300 mg/mL的母液，在超凈工作臺用0.22 μm一次性無菌過濾器過濾，分裝后置于冰箱-20℃保存備用。

1.2 方法

1.2.1 D-gal對SH-SY5Y細胞活力的影響

實驗分組：設空白對照組(僅用DMEM培養基培養)和不同濃度D-gal組(DMEM培養基中分別含5，10，20，30，40，50 mg/mL D-gal)，每組6個復孔，實驗重復3次。

細胞以5×103個/孔接種于96孔細胞培養板中，培養24 h后，空白對照組吸棄孔內原有培養基，加入新的DMEM培養基，其余各組吸棄孔內原有培養基，加入含不同濃度D-gal的DMEM培養基，置于細胞培養箱中繼續培養12 h。12 h后按照MTT試劑盒說明書檢測各組的細胞活力。

1.2.2 D-gal對SH-SY5Y細胞SA-β-半乳糖苷酶活性的影響

根據MTT實驗結果，5 mg/mL的D-gal處理組細胞活力與空白對照組相差很小，故本實驗中D-gal最低濃度選擇10 mg/mL。實驗設空白對照組(僅用DMEM培養基培養)和不同濃度D-gal組(培養基中含10，20，30，40，50 mg/mL D-gal)，每組3個復孔。

將細胞接種于12孔板中，藥物處理方法同1.2.1節。依據SA-β-半乳糖苷酶染色試劑盒說明書的方法步驟檢測各組細胞SA-β-半乳糖苷酶的活性。在光學顯微鏡下觀察各組細胞藍染情況，每個復孔隨機選取3個視野(每組共選取9個視野)計數細胞總數及藍染陽性細胞數，計算各組SA-β-半乳糖苷酶陽性細胞率(藍染陽性細胞數/細胞總數×100%)。

1.2.3 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞活力的影響

實驗分組：實驗設空白對照組(Con)、D-gal模型組(Mod，30 mg/mL D-gal)、維生素E對照組(VE，30 mg/mL D-gal +50 μmol/L VE)和3個FUCO組。FUCO組分別用F5 (30 mg/mL D-gal + 5 μmol/L FUCO)、F10 (30 mg/mL D-gal +10 μmol/L FUCO)和F20 (30 mg/mL D-gal+20 μmol/L FUCO)表示，每組設6個復孔，實驗重復3次。

細胞懸液以5×103個/孔接種于96孔細胞培養板中，24 h后，空白對照組和模型組吸棄孔內原有培養基，更換新的DMEM培養基，其余各組吸棄孔內原有培養基，換為含不同濃度藥物的培養基。各組置于培養箱中預培養2 h后，除空白對照組外，其余各組均加入D-gal溶液，使其終濃度為30 mg/mL，在培養箱中培養12 h后，用MTT法檢測各組細胞活力。

1.2.4 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞SA-β-半乳糖苷酶活性的影響

實驗分組和藥物處理同1.2.3節。將細胞接種于12孔板中，每組3個復孔。細胞培養結束后按照SA-β-半乳糖苷酶染色試劑盒說明書的檢測方法，檢測各組細胞的SA-β-半乳糖苷酶活性。顯微鏡下每個復孔隨機選取3個視野計數SA-β-半乳糖苷酶陽性細胞率(同1.2.2節)。

1.2.5 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞脂質過氧化物(MDA)含量的影響

將細胞接種于含有DMEM培養基的無菌培養皿中培養，實驗分組和藥物處理同1.2.3節，藥物處理結束后，將各組細胞吸棄原有培養基，PBS清洗兩次，每皿各加入150 μL裂解液(磷酸酶抑制劑∶蛋白酶抑制劑∶RIPA裂解液=1∶1∶100，體積比)，冰上裂解20 min。裂解結束后用細胞刮刮下細胞，收集裂解液于1.5 mL離心管中，4℃、12 000 r/min離心10 min，取上清液，按照MDA檢測試劑盒說明書檢測各組細胞的MDA含量。MDA含量=樣品MDA含量/單位重量的蛋白含量。

1.2.6 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬體的影響

實驗分組同1.2.3節，另設自噬陽性對照雷帕霉素組(Rapamycin，RAP，DMEM培養基中含有20 μmol/L的RAP)和自噬陰性對照3-甲基腺嘌呤組(3-methyladenine，3-MA，DMEM培養基中含有5 μmol/L的3-MA)。細胞以1×107個/皿接種于無菌平皿中，24 h后，空白對照組和模型組吸棄孔內原有培養基，更換新的DMEM培養基，其余各組吸棄孔內原有培養基，換為含不同濃度藥物的培養基。培養2 h后，空白對照組吸棄原有培養基，更換新的DMEM培養基，其余各組均加入D-gal溶液至其終濃度為30 mg/mL，繼續在培養箱中培養12 h。12 h后收集各組細胞用3%戊二醛固定過夜，梯度酒精脫水后用環氧樹脂包被，超薄切片后固定于銅網中，用乙酸雙氧鈾和檸檬酸鉛分別固定15-30 min，在透射電子顯微鏡下觀察自噬體的形成情況。

1.2.7 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬相關基因蛋白表達的影響

實驗分組和藥物處理同1.2.6節。經D-gal處理12 h后，各組細胞在冰上進行裂解，收集細胞裂解液于離心管中，4℃、12 000 r/min離心，取上清用聚氰基丙烯酸正丁酯法(BCA法)檢測蛋白濃度。每組各取20 μg總蛋白至加樣孔中進行SDS-PAGE電泳，經轉膜、封閉、洗滌后，目的蛋白分別與β-actin小鼠單克隆抗體溶液、mTOR、LC3及ATG5兔單克隆抗體溶液在4℃孵育過夜;次日，洗掉一抗后，上述目的蛋白再分別用辣根過氧化物酶標記的山羊抗小鼠二抗和山羊抗兔二抗溶液在室溫孵育2 h，然后用化學發光凝膠成像系統進行顯影，用ImageJ軟件進行灰度分析。

1.2.8 統計學方法

2 結果與分析

2.1 SH-SY5Y細胞衰老模型的建立

2.1.1 D-gal對SH-SY5Y細胞活力的影響

不同濃度D-gal處理SH-SY5Y細胞12 h后各組細胞活力見圖1。設空白對照組細胞活力為100%，與對照組相比，5，10，20，30，40，50 mg/mL D-gal組細胞活力分別降至(94.24±9.03)%、(93.68±7.83)%、(88.10±11.07)%、(80.78±6.91)%、( 49.66±7.87)%、(37.92±4.41)%，細胞活力隨D-gal的濃度增加明顯下降。顯微鏡下觀察可見空白對照組細胞生長良好，細胞邊緣清晰，而高濃度D-gal處理的細胞邊緣模糊，細胞變圓且數量減少。實驗結果表明D-gal濃度超過30 mg/mL時會對細胞產生較大毒性作用。

*:P<0.05 D-gal組 vs 空白對照組

2.1.2 D-gal對SH-SY5Y細胞SA-β-半乳糖苷酶活性的影響

如圖2所示，與空白對照組相比，經D-gal處理的SH-SY5Y細胞均有不同程度的藍染，10，20 mg/mL D-gal組細胞藍染程度較淺，30，40，50 mg/mL D-gal組細胞藍染程度加深，且部分細胞變圓，體積增大，細胞數量減少。不同濃度D-gal組的SA-β-半乳糖苷酶陽性細胞率均較空白對照組明顯增高(P<0.05)。上述結果表明D-gal可誘導SH-SY5Y細胞早衰，可用于建立細胞衰老模型。

*:P<0.05 D-gal組 vs 空白對照組

2.2 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞活力的影響

如圖3所示，設空白對照組細胞活力為100%，與空白組相比，模型組細胞活力下降明顯，為(73.56±5.98)%，且兩者之間差異有統計學意義(P<0.05)。與模型組相比，VE組的細胞活力增加(P<0.05)。5,10 μmol/L FUCO處理組的細胞活力分別為(90.11±7.17)%、(84.71±6.33)%，均比模型組細胞活力明顯增高(P<0.05)，20 μmol/L FUCO組細胞活力與模型組相比無明顯差異(P>0.05)。實驗結果說明FUCO可抑制D-gal引起的細胞活力下降，具有較好的抗細胞衰老作用。

#:P<0.05 Mod vs Con，*:P<0.05 藥物組 vs Con

2.3 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞SA-β-半乳糖苷酶活性的影響

如圖4所示，與空白對照組相比，模型組的細胞藍染程度加深，藍染細胞陽性率增高。與模型組相比，VE組的藍染細胞陽性率降低(P<0.05)，且藍染程度變淺；5,10 μmol/L FUCO組藍染細胞陽性率較模型組明顯減少(P<0.05)，且藍染程度下降；與模型組相比，20 μmol/L FUCO組藍染細胞陽性率減少，但與模型組之間無明顯差異(P>0.05)。SA-β-半乳糖苷酶活性增加是細胞衰老的重要標志物，也是檢測衰老的金標準。本實驗結果充分說明FUCO可以逆轉D-gal引發的細胞衰老，具有較強的抗衰老活性。

#:P<0.05 Mod vs Con，*:P<0.05 藥物組 vs Con

2.4 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞MDA含量的影響

從圖5可以看出，模型組細胞的MDA含量明顯高于空白對照組，為空白組MDA含量的5倍多。VE組及5,10 μmol/L FUCO組的MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)，20 μmol/L FUCO組的MDA含量低于模型組，但二者之間無明顯差別(P>0.05)。

#:P<0.05 Mod vs Con，*:P<0.05 藥物組 vs Con

2.5 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬體的影響

如圖6所示，空白對照組細胞結構正常，線粒體數目較多，細胞偶爾出現自噬體(箭頭)。Mod組部分細胞出現體積變大、核仁變小甚至消失、線粒體腫脹等不良狀態，狀態好的細胞內自噬體數量較少，但狀態不好的細胞內可見大量自噬體。與模型組比，VE組的細胞邊界清晰，核仁清楚，自噬體數目有增多趨勢；F5組細胞狀態好，線粒體數目較多，胞質內自噬體數量也較模型組中狀態良好的細胞內自噬體數量有所增多；F10和F20組自噬體明顯增多，且隨FUCO濃度增大而增多，高倍鏡下可清楚地觀察到自噬體中包含著多種細胞內容物。自噬陽性對照RAP組的自噬體數目最多，自噬陰性對照3-MA組細胞內自噬體數目比RAP組明顯減少。透射電子顯微鏡下觀察自噬體形成情況可以直觀反映細胞內自噬作用大小，本實驗結果說明FUCO可以增強細胞內的自噬活性。

圖6 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬體的影響

2.6 巖藻黃素對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬相關蛋白的影響

圖7所示為自噬相關蛋白檢測結果。與空白組相比，模型組ATG5蛋白表達和p-mTOR/mTOR蛋白表達比值均上調(P<0.05)，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達比值下調(P<0.05)。與模型組相比，VE組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達比值輕度上調，p-mTOR/mTOR比值下調(P<0.05)。F5組ATG5、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和p-mTOR/mTOR比值均較模型組有所下調，F10、F20及自噬陽性對照RAP組細胞的ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明顯較模型組上調(P<0.05)，p-mTOR/mTOR比值明顯下調(P<0.05)。自噬陰性對照3-MA組ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值較RAP組下調，p-mTOR/mTOR比值較RAP組上調。

#：P<0.05 Mod vs Con，*：P<0.05 藥物組 vs Con

3 討論

3.1 D-gal誘導SH-SY5Y細胞建立細胞衰老模型

D-gal是建立衰老模型的常用誘導劑[19]。Li等[20]的研究表明濃度高于30 mg/mL的D-gal可明顯引起SH-SY5Y細胞活力下降，Shen等[21]用55 mmol/L D-gal誘導星形膠質細胞一周成功建立細胞衰老模型。本實驗發現，D-gal濃度過大，會導致細胞大量死亡，結合細胞活力和SA-β-半乳糖苷酶活性實驗結果，最終選用30 mg/mL的D-gal處理細胞12 h成功建立SH-SY5Y細胞衰老模型，該結果與Li等[20]實驗結果相似。

3.2 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞的抗衰老作用

細胞衰老時會出現細胞活力下降、SA-β-半乳糖苷酶活性增加、MDA含量升高等狀況。本研究通過檢測上述3個指標探討FUCO對D-gal誘導細胞衰老的干預作用。研究發現，5，10 μmol/L的FUCO能明顯抑制D-gal引起的細胞活力下降(P<0.05)，20 μmol/L的FUCO作用不明顯(P>0.05)，且隨著FUCO濃度的增大，細胞活力表現出一定下降趨勢。FUCO對D-gal引發的衰老標志物SA-β-半乳糖苷酶的活性增高也具有較好的抑制效應，表現為5，10 μmol/L FUCO組比D-gal模型組的SA-β-半乳糖苷酶陽性細胞數明顯減少(P<0.05)，細胞藍染程度較淺；20 μmol/L FUCO組SA-β-半乳糖苷酶陽性細胞率比模型組降低，但兩組之間無明顯差異(P>0.05)。上述結果與本課題組前期研究[17]中發現5，10 μmol/L的FUCO可抑制H2O2誘導的WI-38細胞的活力下降和SA-β-半乳糖苷酶活性增高結果相似。

MDA是脂質過氧化反應產物，MDA的含量升高是細胞衰老的重要標志之一。本實驗發現模型組比空白組細胞的MDA含量明顯增高，而5-20 μmol/L的FUCO可明顯降低D-gal誘導的MDA含量增高。Zeng等[22]發現3 μmol/L FUCO就可明顯降低TBT誘導的HepG2細胞內的MDA含量。上述結果表明FUCO可抑制外界刺激引發的細胞脂質過氧化，延緩細胞衰老的發生。

以上關于細胞活力、SA-β-半乳糖苷酶活性和MDA含量檢測實驗中，我們發現5，10 μmol/L FUCO的抗衰老作用效果相差很小，20 μmol/L FUCO的抗衰老效果與前二者比相差較大，3個FUCO組沒有表現出特別明顯的劑量-效應關系。Zhang等[18]在研究FUCO對外傷引起的小鼠繼發性腦損傷的干預作用時發現，灌胃給藥的50，100,200 mg/kg 3個劑量中100 mg/kg的抗損傷作用效果最好，腦室注射給藥的 0.01，0.05,0.1 mmol/L 3個劑量中0.05 mmol/L的抗損傷效果最好，該研究中兩種給藥方式都沒有發現明顯的藥物量效關系。綜合考慮本研究及Zhang等[18]的研究結果，沒有出現明顯的量效關系的原因可能是設置的3個FUCO 濃度不太合適，應設置更多的濃度梯度，例如可在低于5 μmol/L及10-20 μmol/L增設適當的藥物濃度，這樣有可能會檢測到較明顯的量效關系，下一步將驗證該設想。

Lashmanova等[15]研究表明0.3-5.0 μmol/L FUCO能延長黑腹果蠅和秀麗隱桿線蟲的壽命。無毛老鼠局部使用0.001%的FUCO溶液預處理可減輕UVB誘導的光老化過程中皺紋的形成[23]。結合本實驗結果，FUCO對D-gal誘導的神經細胞衰老具有較好的抑制作用。

3.3 FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬的影響

自噬是細胞的一種生存策略，細胞自噬對于維持細胞和個體的健康具有重要作用。適度激活細胞自噬具有抗衰老作用，調節細胞自噬水平已成為抗衰老的重要策略。有研究表明FUCO可通過Nrf2自噬途徑在顱腦外傷模型中提供神經保護作用[18]，表明FUCO可能會通過調控自噬途徑來對抗D-gal引起的神經細胞衰老。但目前還未發現有FUCO介導自噬途徑抗衰老的研究報道。因此，本研究探討了FUCO對D-gal誘導衰老的SH-SY5Y細胞自噬的影響作用。

透射電子顯微鏡觀察自噬體形成的研究結果顯示，空白對照組細胞發生自噬的水平較低，而D-gal模型組細胞自噬體數量明顯比空白組高，這與前人使用D-gal誘導細胞或動物衰老研究的結果相似[24,25]，說明D-gal可引起細胞發生自噬。與模型組相比，F10、F20和RAP組細胞內自噬體數量明顯比模型組增多，Western blot檢測自噬相關蛋白表達的結果也顯示上述3個組中細胞內的ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值較模型組上調，p-mTOR/mTOR蛋白比值較模型組下調，表明上述3組細胞的自噬作用比模型組增強。從Western blot檢測結果可以看出，隨著FUCO濃度增大，F5、F10和F20組的ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達比值表現出明顯濃度依賴性，p-mTOR/mTOR蛋白表達比值未表現出明顯的劑量-效應關系，僅有F10和F20兩組的p-mTOR/mTOR比值隨濃度增加表達下調，該結果也與這兩組的ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值表現出的自噬增強趨勢相吻合。F5組細胞的ATG5和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值較模型組下調，意味著自噬作用減弱，這與透射電子顯微鏡結果顯示F5組細胞較模型組自噬作用增強不一致，但本實驗結果還發現F5組的p-mTOR/mTOR比值較模型組顯著下調(P<0.05)，這與其自噬體數目較模型組增多是吻合的。針對F5組自噬相關蛋白的表達與透射電子顯微鏡觀察結果不一致的問題，將通過實驗進一步驗證。

從自噬體及自噬相關蛋白檢測結果來看，FUCO在5-20 μmol/L濃度范圍內可增強細胞自噬，其中20 μmol/L FUCO組自噬作用最強。綜合分析本研究細胞活力、SA-β-半乳糖苷酶活性和MDA含量檢測結果，發現20 μmol/L FUCO對細胞的保護作用并不明顯，5,10 μmol/L FUCO的抗細胞衰老作用明顯優于20 μmol/L。考慮到20 μmol/L FUCO組的自噬作用最強，猜想F20組很有可能是由于過度激活自噬，對細胞造成了一定的傷害。這一猜想與胡晶晶等[26]在研究大鼠心肌缺血再灌注損傷中提到的過度自噬是損傷的原因，抑制自噬過度激活可減輕損傷的觀點類似。綜上所述，我們認為FUCO可通過適度激活自噬途徑抑制D-gal誘導的SH-SY5Y細胞衰老。

值得注意的是，盡管透射電子顯微鏡觀察結果顯示模型組的自噬體數目比空白對照組多，但模型組的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值較空白組下調，p-mTOR/mTOR蛋白比值較空白組上調，這二個比值與細胞自噬增強時該蛋白的變化趨勢不吻合。但是，考慮到自噬與衰老過程都是由多條信號通路共同介導完成，其中mTOR、SIRT1以及p53等是多條信號通路的交叉點[27]，是調控二者的關鍵蛋白，受眾多因素的調控，特別是mTOR分子，他是自噬調控信號通路中一個關鍵位置的激酶，多種信號分子可調節其活性，mTOR上游的MAPK/Erk1/2、PI3K-1/Akt等信號都會影響mTOR的活性，Yu等[28]也發現FUCO可通過激活PI3K-1/Akt并抑制Erk途徑保護H2O2引起的神經細胞損傷。p53蛋白也可影響mTOR的活性，p53在特定位置的適度過表達可抑制mTOR，激活自噬，而其過度表達反而會抑制自噬，使細胞表現出衰老的癥狀[27]。因此，對于模型組的p-mTOR/mTOR和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達與透射電子顯微鏡結果不一致的問題，還需通過排除自噬調控復雜通路中其他蛋白對自噬的影響才能闡明原因。

4 結論

本研究中細胞活力、SA-β-半乳糖苷酶活性和MDA含量檢測結果表明，FUCO在5-10 μmol/L時對D-gal誘導衰老的神經細胞具有明顯的抑制作用，20 μmol/L FUCO的抗衰老作用較差。對細胞自噬體形成及自噬相關蛋白的研究結果表明，FUCO很可能是通過適度激活細胞自噬來發揮其抗衰老作用。