我院呼吸內科住院患者25株肺炎克雷伯氏菌同源性分析

張燕星，呂浩北，黃冬梅，趙志國★，陳盟

（1.承德醫學院，河北 承德；2.承德市中心醫院，河北 承德）

0 引言

隨著經濟水平的進步，各種新興醫療技術在提高治愈率的同時，院內感染的風險也在逐步上升[1]，醫院呼吸內科感染率較高，治療周期長，臨床抗菌藥物使用難度大，因此及時準確的病原菌鑒定及同源性分析對臨床優化抗菌藥物至關重要。本研究通過收集2020年11月至2021年3月呼吸內科住院患者檢出的病原菌，監測其分布及同源性，旨在發現耐藥菌株的傳播情況，為臨床合理用藥提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

選取2020年11月至2021年3月我院呼吸內科住院患者分離病原菌，剔除同一患者分離的重復菌株，獲得目的菌株89株。

1.1.2 儀器與試劑

VITEK 2 Compact全自動微生物鑒定及藥敏分析系統，VITEK MS全自動快速微生物質譜檢測系統，基質液：VITEK MS-CHCA；培養基（鄭州安圖生物）；質控菌株：大腸埃希菌ATCC 8739、ATCC 25922（衛生部臨檢中心）。

1.2 實驗方法

1.2.1 耐藥檢測

按照《全國臨床檢驗操作規程》進行實驗，采用VITEK MS RUO模式鑒定病原菌，藥敏試驗采用MIC或K-B法，按照美國臨床實驗室標準化研究所最新標準進行藥敏結果判定（CLSI M100-ED29）。

1.2.2 質譜鑒定及同源性分析

接種環挑取單個菌落，均勻涂在靶板上，立刻加1 μL的CHCA基質液，干燥后應用VITEK MS RUO模式對目的菌株進行鑒定，利用SARAMIS軟件分析其同源性。

1.2.3 病原體耐藥表型

對CRKP行mCIM和eCIM實驗。mCIM：取待測菌株1 μL接種TSB肉湯試管中，渦旋15 s，放入10 μg美羅培南紙片，35 ℃孵育4 h，取出紙片放入ATCC 25922涂布的MH培養基上，35 ℃孵育18 h，量取抑菌圈直徑。eCIM：于TSB肉湯試管加0.5 M EDTA20 μL，其余步驟與eCIM一致。具體結果按照2020版CLSI M100進行分析。

1.3 統計學分析

應用WHONET 5.6和SPSS 26.0進行統計學分析，計數資料通過χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病原菌分布

2020年11月至2021年3月我院呼吸內科送檢合格標本375株，檢出病原菌89株，其中肺炎克雷伯氏菌25株。送檢主要標本為痰標本，占比82.02%，各標本之間進行卡方檢驗，P＞0.05，差異無統計學意義，見表1。

表1 標本分布（n,%）

2.2 藥敏實驗結果

根據藥敏結果將KPN分為野生型9株，CRKP型14株，ESBL型2株。野生型哌拉西林耐藥率為6.7%，ESBL型頭孢吡肟耐藥率為23.5%，CRE替加環素耐藥率為7.9%，三個類別卡方檢驗除哌拉西林和慶大霉素外，其余藥物P＜0.05，見表2。

表2 肺炎克雷伯氏菌耐藥率（%）

2.3 病原菌耐藥表型

mCIM和eCIM實驗顯示，產金屬酶有9株，產絲氨酸酶5株。

2.4 同源性分析

根據質譜儀建庫標準，質譜相似性需達到70%以上，因此該實驗以聚類分析結果中縱坐標0.7為差異水平，肺炎克雷伯氏菌可分為5個質譜型別，見圖1。

圖1 肺炎克雷伯氏菌樹狀圖

3 討論

基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術作為一種新型微生物鑒定方式，目前已經廣泛應用于臨床診斷、院感檢測中[2]，可以對肺炎鏈球菌、陰溝腸桿菌等病原菌進行同源性分析[3-4]。2020年CARSS網顯示，CRKP檢出率持續上升，死亡率高達6.16%，顯然已經成為臨床上高度重視的病原菌。

本實驗病原菌KPN檢出最多，送檢標本中痰標本占比最大，各標本之間進行卡方檢驗，P＞0.05，差異無統計學意義，暫不能說明病原菌檢出與否與送檢標本類型有關。根據KPN藥敏結果，將25株KPN分為野生型、ESBL型、CRKP型，其中CRKP檢出最多。卡方檢驗結果顯示，除哌拉西林和慶大霉素外，其他藥物之間存在差異。野生型大多數抗菌藥物均較敏感，ESBL型氨基糖苷類、酶抑制劑耐藥率較低，CRKP型對復方新諾明和替加環素耐藥率較低；臨床可以根據藥敏分型使用適合的抗菌藥物，降低藥物選擇性壓力。mCIM和eCIM實驗顯示，產金屬酶9株，占比36%，絲氨酸酶5株，占比20%，與宋靜等[5]研究相比我院產金屬酶菌株較多，可能與地區流行菌株及用藥習慣等因素有關。

根據建庫標準，以縱坐標0.7差異水平，可以將KPN分為5個質譜型別，藥敏表型和質譜分型兩者進行比較，CRKP型集中一個質譜分型中，而野生型和ESBL型則散在分布，這說明質譜分型和藥敏分型存在部分相似，也存在不同，可以對CRKP菌株進行同源性分析，追蹤傳染源。李鑫等[6]研究發現SARAMIS相對值＞85%可以認定為同一型別，本研究顯示8株肺炎克雷伯氏菌具有一定的同源性，有研究表明吸痰造成的氣溶膠會造成空氣環境污染[7]，通過醫護人員手或器械與患者交叉傳播，該實驗結果提醒我院呼吸內科應注意病房空氣、呼吸機等消毒，避免耐藥病原菌的傳播。

因為技術和資金等原因，本實驗未對KPN進行分子學研究；同時本實驗收集菌株數量較少，應擴充菌株數量，進一步明確病原菌的親緣關系。