血篩集中化核酸檢測質量指標監測的回顧性分析

周麗君，王珊，付薪靜，萬建華，穆耶賽爾，張洪斌

（烏魯木齊市血液中心，新疆 烏魯木齊）

0 引言

血篩核酸擴增技術（NAT）是在分子生物學水平的基礎上直接對病原體核酸進行檢測，作為對酶聯免疫吸附試驗（ELISA）血液檢測的補充，大大縮短檢測“窗口期”，降低輸血傳播疾病殘余風險[1-2]。新疆位于西北部，地大物博，各地區檢測水平參差不齊，核酸檢測對人員、環境、設備等方面要求較高，新疆地區對沒有開展核酸檢測的實驗室實行核酸集中化檢測，目前血站實驗室在業務運行、檢測前樣本質量、性能驗證、檢測中實驗室內質控、檢測后是否拆分、拆分陽性率、室間質評等的綜合評價領域，亟需建立一套系統、科學、有效、綜合的評價方法，制定業務發展和實驗室質量管理相適應的質量指標，建立同行實驗室之間標桿比對的體系[3]。本研究對本中心核酸檢測實驗室2017年1月至2020年12月核酸檢測質量監控中常用的指標進行分析，探究本實驗室核酸檢測自身業務運行和質量管理效果的真實狀態，有助于實驗室利用系統、科學的綜合評價結果，確保血液檢測結果準確、及時、有效。

1 材料與方法

1.1 核酸檢測設備和試劑

本研究使用兩套核酸檢測系統，A系統和B系統兩套系統互為備用，混樣分項目檢測，每批檢測均依據試劑說明書設置陰性質控和陽性質控，每個pool均含內標。室內質控濃度為最低檢測限2～5倍并且與已知陰性樣本混樣檢測，第三方室內質控品監控，A系統室內質控濃度分別為：50 IU/mL、200 IU/mL、1000 IU/mL；B系統200 IU/mL、2000 IU/mL、2000 IU/mL。按照混樣規則進行混樣檢測，混樣檢測為反應性的pool挑選出樣本，進一步做拆分實驗，拆分實驗為反應性的標本判定為核酸檢測結果陽性，無反應性則判定為核酸檢測結果陰性。

1.2 資料來源于本中心核酸檢測實驗室

對2017年1月至2020年12月核酸檢測的基本情況進行回顧性分析。

1.3 監測指標

樣本數、檢測批次、匯集陽性pool數、陽性標本數、核酸檢出率、拆分檢出率、樣本采集錯誤數量、樣本采集錯誤率、室間質評滿分次數、室間質評滿意度、室內質控失控次數、室內質控失控率、實驗失敗次數、實驗失敗率、設備故障天數、設備故障率。

1.4 常用質量監控指標計算方式

1.4.1 核酸陽性情況相關指標

核酸檢出率=（核酸陽性標本數/檢測標本總數）×100%。

拆分檢出率=（拆分陽性標本數/混樣陽性pool數）×100%。

1.4.2 樣本采集錯誤率

樣本采集錯誤率=（樣本錯誤/樣本總數）×100%。

1.4.3 室間質評滿意度

室間質評滿意度=（室間質評100分次數/參加總次數）×100%。

1.4.4 室內質控失控率

室內質控失控率=（第三方室內質控失控批次/總實驗批次）×100%。

1.4.5 實驗失敗率

實驗失敗率=（實驗失敗批次/總實驗批次）×100%。

1.4.6 設備故障率

設備故障率=（設備故障天數/可使用天數）×100%。

2 結果

A系統與B系統比較，見表1。

表1 A系統與B系統質量監測指標比較（n,%）

3 討論

血站實驗室可借鑒國際通用的醫學實驗室質量指標體系框架。如2010年美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）頒布了《建立使用質量指標實施實驗室過程改進和質量監控》(GP35 A)[4]，2017年，我國國家衛計委頒布了《臨床實驗室質量指標》(WS/T496 2017)，為我國臨床實驗室質量指標體系的建立提供了標準依據[5]。烏魯木齊2017年1月至2020年12月共檢測核酸樣本229136例，采用幾種主要指標對核酸檢測日常運行情況進行監控，質量指標項目主要來源于每月給國家衛健委上報的質量指標[3]，2017～2020年總體核酸檢測情況，A系統和B系統比較，核酸檢出率、實驗失敗率有顯著性差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；兩個系統均進行兩兩比較，A系統樣本采集錯誤率2018年與2019年有顯著性差異（P＜0.05），實驗失敗率2017年與2018年有顯著性差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；B系統設備故障率：2017年與2020年有顯著性差異（P＜0.05），設備故障率：2018年與2020年有差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；樣本采集錯誤率0.010%，標本錯誤主要原因是：樣本不足量、核酸酶免試管條碼貼錯、集中化樣本因冷凍后在運輸過程中導致嚴重溶血；核酸檢出率A系統0.091%高于B系統0.043%，主要與檢測試劑最低檢出限等有關；A系統拆分檢出率56.949%，與山東[6]接近，反映匯集反應性pool拆分效率的指標，本實驗室在每月分析中可以看出，在檢測室間質評之后的1周拆分效率較低，可能是室間質評樣本中有HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA陽性樣本，檢測之后沒有消毒徹底導致；室間質評滿意度12次結果均為100分，但其中一次B系統核酸檢測設備檢測結果中，有一室間質評樣本HIV項目混樣檢測結果為陰性，但仔細觀察擴增圖異常才分析得出正確結果；室內質控失控率較低，主要出現為HCV RNA匯集未檢測出，室內質控失控及時填寫失控報告并進行分析；實驗失敗率，A系統低于B系統，實驗失敗主要為陽性未檢測出、內標未出、陰性檢測到陽性結果、實驗室溫度超出30 ℃、實驗室干燥、人為因素、其他原因實驗失敗等；設備故障率，主要為匯集表現為未加上樣本頻繁；提取故障主要表現為維護無法進行、設備報錯、提取磁珠異常等；擴增故障未出現過。本實驗室機采血小板、RH樣本按照混樣規則分配在不同的pool中，與全血已知陰性樣本混樣，拆分當日進行，保證樣本在采集后72 h內發放結果，并且機采血小板、RH樣本可提前檢測出結果，運行效果良好。

本研究的實驗室在2016年建立了實驗室質量體系之后，通過新疆臨檢中心PCR實驗室驗收，本研究通過對本實驗室質量指標的分析探索，不斷持續改進，以提高實驗室檢測能力。