白茅根炒炭前后多糖含量的變化研究

張麗宏

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原 030020）

白茅根又名茅根、茅針、刀茅、地筋、白茅，是禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.Major （Nees）C.E.Hubb.的干燥根莖[1]。其在全國(guó)各地均有分布，但主要集中于華北地區(qū)。自古以來(lái)就被醫(yī)家所青睞，其用法在《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草正義》《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》等均有記載。白茅根性味甘、寒，能涼血止血、清肺胃熱、清熱利尿?？蓮V泛用于調(diào)理熱毒侵入所致的煩渴、嘔吐、熱淋痰多、尿血，以及小便功能障礙、腹部灼熱水腫、黃疸等；炒炭后，涼血作用減弱，止血作用增強(qiáng)，長(zhǎng)于治療出血證。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料報(bào)道，白茅素、蘆竹素、羊齒醇等三萜類化合物，葡萄糖、蔗糖、淀粉等多糖類化合物為白茅根的主要有效成分，其中多糖類物質(zhì)具有增強(qiáng)小鼠耐缺氧作用、增強(qiáng)免疫、降血脂等作用[2-3]。

目前，有關(guān)于白茅根的用藥歷史沿革、主要有效成分、提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理作用、臨床使用情況等各個(gè)領(lǐng)域的研究都已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但對(duì)其炮制前后化學(xué)成分含量的變化研究鮮有報(bào)道，尤其是有關(guān)多糖含量的變化，至今尚未見國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道。有文獻(xiàn)報(bào)道，糖類物質(zhì)經(jīng)炭化后可以增加止血效果[4]。因此選取白茅根中的有效成分多糖類化合物作為研究指標(biāo)，測(cè)定了白茅根炒炭前后多糖類物質(zhì)含量的變化，探討炒炭工藝是否會(huì)使多糖類物質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)化，推測(cè)多糖的炭化可能是增加茅根炭止血功效的重要作用機(jī)制，為進(jìn)一步明確茅根炭的止血物質(zhì)基礎(chǔ)提供研究基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

FA1204N萬(wàn)分之一電子天平（上海奔普儀器科技有限公司），UV-2600i型紫外分光光度計(jì)（日本島津Shimadzu公司），高速中藥粉碎機(jī)（400B型，200g，山東精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司），中國(guó)藥典專用篩（1～9號(hào)篩，浙江省上虞市華康化驗(yàn)儀器廠），HH-S型精密恒溫水浴鍋（中國(guó)江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠），DZF -6021型真空干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 主要材料

白茅根藥材（批號(hào)：190910）產(chǎn)于河北省石家莊，購(gòu)買于山西省太原市同仁堂藥店，并經(jīng)山西藥科職業(yè)學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為白茅根的干燥根莖。茅根炭制品為同一批藥材按照2020版《中國(guó)藥典》中的炒炭法，于本校炮制教研室加工制得。將以上藥物粉碎，過(guò)4號(hào)篩，混合均勻，放入干燥箱內(nèi)于50 ℃下干燥24h，取出后放入干燥器內(nèi)，備用。

葡萄糖對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司（分析純，批號(hào)200613），其余所用濃硫酸、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚也均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制前后粗多糖成分的制備

取經(jīng)過(guò)前置處理的白茅根、茅根炭粉末各10g，分別加入10倍量體積的95%乙醇，回流2次，每次2h，濾出藥渣自然揮干至無(wú)醇味，60℃恒溫干燥后轉(zhuǎn)移至燒瓶?jī)?nèi)，加入10倍量體積的蒸餾水回流提取2h，趁熱過(guò)濾，重復(fù)兩次，合并兩次的濾液，濃縮至一定的體積。緩慢加入95%乙醇至醇濃度為80%，靜置過(guò)夜后。抽濾，濾渣依次經(jīng)無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，50℃真空干燥即得粗多糖，稱重得白茅根粗多糖為1.77g，茅根炭粗多糖0.87g。白茅根與茅根炭圖片見圖1。

圖1 白茅根與茅根炭示意圖

2.2 供試品溶液制備

精密稱取白茅根、茅根炭的粗多糖各5mg，加蒸餾水溶解，稀釋定容于50mL量瓶中，搖勻，備用。

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃恒溫干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖50mg，加蒸餾水溶解，定容于50mL容量瓶中，搖勻，備用。

2.4 苯酚-濃硫酸比色試劑的制備

苯酚溶液：取苯酚100g，加碳酸氫鈉0.05g和鋁片0.1g，蒸餾制取，收集于182℃的餾出成分。稱取此餾分5g，加入95mL蒸餾水，置于棕色試劑瓶?jī)?nèi)，得5%苯酚試液。硫酸為濃硫酸試劑。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 波長(zhǎng)選擇

采用苯酚-硫酸比色法，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、蒸餾水各2mL，分別加入5%苯酚溶液1mL，然后快速垂直貼壁加入濃硫酸7mL，慢速振蕩均勻。在于60℃水浴中加熱30min，然后放至冰水中冷卻至室溫，取適量至比色皿中，按照紫外-可見分光光度法方法測(cè)定，在波長(zhǎng)200～600nm進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，葡萄糖對(duì)照品溶液、供試品溶液在484nm處有最大吸收，且蒸餾水溶液（溶解溶液）在該波長(zhǎng)下無(wú)干擾，因此，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為484nm。

2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5、6mL轉(zhuǎn)移至50mL容量中，加蒸餾水定容，得各濃度對(duì)照品溶液。精密移取上述溶液各2mL，按照2.5.1項(xiàng)中苯酚-硫酸比色法流程操作，于484nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。以對(duì)照品濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，以吸光度Y為終坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：Y=8.9853X+0.0637，R=0.9996（n=6），結(jié)果表在線性范圍為：0.0212～0.1232mg/mL，數(shù)據(jù)良好。

2.5.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取白茅根粗多糖供試液，按照2.5.1方法，連續(xù)6次測(cè)定該樣品的吸光度，結(jié)果RSD=0.12%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密稱取白茅根粗多糖5mg，加蒸餾水溶解，定容于50mL容量瓶中，搖勻。按照2.5.1方法，分別在0、10、20、30、60、90、120min時(shí)測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD=0.26%，說(shuō)明樣品溶液在2h內(nèi)具有很好的穩(wěn)定性。

2.5.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取白茅根粗多糖5mg，各5份，加入蒸餾水溶解，并定容于50mL容量瓶中，搖勻。按照。按照2.5.1方法，測(cè)定吸光度，得RSD=2.19%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取白茅根粗多糖6份，每份5mg，精密稱定，分別精密加入葡萄糖如表1所示，加蒸餾水溶解，稀釋定容到50mL容量瓶中，搖勻。按2.5.1方法測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見 表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

2.5.7 含量測(cè)定

準(zhǔn)確吸取供試液各2mL，按照2.5.1方法操作，并于484nm出測(cè)定吸光度，得白茅根多糖含量為50.2%，得率為35.3%，茅根炭的多糖含量為43.6%，得率為19.9%，得率較白茅根多糖得率下降43.6%，結(jié)果見表2。

表2 樣品中多糖含量測(cè)定（n=3）

3 結(jié)論

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用苯酚-濃硫酸比色法測(cè)定，分別考察了文獻(xiàn)報(bào)道和《中國(guó)藥典》采用的7% 與5% 苯酚溶液[4]，結(jié)果顯示7%的苯酚會(huì)降低樣品紫外吸光值，因此采用的5%苯酚濃度。

白茅根的多糖含量與地域和采摘季節(jié)密切相關(guān)[5]，本實(shí)驗(yàn)所用白茅根生產(chǎn)于河北，與已有的文獻(xiàn)報(bào)道含量基本一致[6]。本實(shí)驗(yàn)的多糖含量測(cè)定結(jié)果為白茅根大于茅根炭。原因可能是在炒碳炮制過(guò)程中，由于受熱溫度高，藥材部分炭化，多糖結(jié)構(gòu)破壞劇烈，而造成含量顯著降低。另外，也有文獻(xiàn)報(bào)道[7]，白茅根炒碳后，5-HMF含量也有顯著地增加，已知5-HMF主要有已糖經(jīng)加熱分解而得。白茅根碳炒后多糖含量變化，尤其是多糖含量的變化可能會(huì)增強(qiáng)凝血機(jī)制。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究為可為制定白茅根炮制工藝及研究白茅根炮制機(jī)理提供新的思路與研究基礎(chǔ)。