聯合檢測BRD4、CXCR4及TGAb、TPOAb水平評估甲狀腺癌切除術后患者預后的價值

王曉明，陳茜，呂金鋒，張攀攀

（1.河南省焦作煤業（集團）有限責任公司中央醫院普外二科；2.河南省焦作煤業（集團）有限責任公司中央醫院手術室，河南焦作 454000）

甲狀腺癌是常見內分泌系統惡性腫瘤,近年來發病率逐年升高，病理類型以分化型多見。手術切除是臨床治療甲狀腺癌的主要方法,大部分患者手術切除后預后較良好,但也有部分患者會出現腫瘤復發或遠處轉移[1]。腫瘤分子標志物對甲狀腺癌患者預后的評估逐漸成為臨床研究的熱點。研究指出[2]，甲狀腺球蛋白抗體（Thyroglobulin antibody，TGAb）及抗甲狀腺過氧化物酶抗體（Thyroid peroxidase antibody，TPOAb）時甲狀腺自身抗原產生的抗體，是重要甲狀腺免疫性炎癥指標，其水平異常與甲狀腺癌的發生、發展密切相關。研究證實[3]，溴結構域蛋白4（Bromodomain-containing protein-4，BRD4）及趨化因子受體4（Chemokine receptor-4，CXCR4）參與癌細胞的生長、侵襲、轉移等。本研究選取我院行甲狀腺切除術患者為研究對象，探討BRD4、CXCR4、TGAb、TPOAb聯合檢測對其預后的評估價值。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經醫學倫理委員會批準，選取我院2016年1 月-2017年1 月收治的接受甲狀腺癌切除術患者126例為研究對象。診斷標準：參照《甲狀腺癌診療規范（2018年版）》[4]。納入標準：⑴經病理學確診為甲狀腺癌并成功完成甲狀腺癌切除術者；⑵年齡≥18 歲；⑶術前無遠處轉移病灶；⑷術前未接受放療或化療者。排除標準：⑴合并嚴重臟器功能障礙；⑵術前即存在明顯甲狀腺功能障礙；⑶既往存在頸部手術史者；⑷合并感染疾病、免疫、血液系統疾病者。126例患者中男51例，女75例；年齡26～67 歲，平均年齡60.23±4.38 歲；病理類型：乳頭狀癌73例，濾泡狀癌33例，混合型癌20例。患者均簽署知情同意書。所有患者持續隨訪3年。

1.2 方法 血清TGAb、TPOAb水平檢測：所有患者術后1年采集空腹清晨靜脈血5ml，4000r/min 離心5min，取上層血清保存于-70 攝氏度環境中待檢。通過放射免疫法檢測血清TGAb水平，通過化學發光法檢測血清TPOAb水平，試劑盒分別購買于上海紀寧生物和上海恒雅生物科技，操作均嚴格遵循說明書進行。

腫瘤組織BRD4、CXCR4水平檢測：所有腫瘤組織標本以10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4μm 切片，蘇木精伊紅染色，采用免疫組化法進行染色，試劑盒購買于上海長島生物科技。BRD4、CXCR4鼠抗人單克隆抗體分別購買于上海艾美捷科技有限公司和上海鈺博生物科技有限公司。以磷酸鹽緩沖液為陰性對照代替一抗，以已知陽性切片為陽性對照。

1.3 評價指標 以隨訪過程中核素顯像檢查結果為金標準，評估血清TGAb、TPOAb水平聯合腫瘤組織BRD4、CXCR4水平對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的價值。甲狀腺癌復發或轉移判定標準[5]：血清TGAb＞100 IU/ml 為陽性，血清TGAb≤100 IU/ml 為陰性；血清TPOAb＞50 IU/ml 為陽性，血清TPOAb≤50 IU/ml 為陰性；腫瘤組織BRD4、CXCR4水平根據染色強度分為4 級，0 分無色，1 分淡黃色，2 分棕黃色，3 分棕褐色，并于400 倍鏡下觀察著色細胞比例，著色細胞≤5%為0 分，6%≤著色細胞≤25%為1 分，26%≤著色細胞≤50%為2 分，著色細胞≥51%為3 分。根據染色強度評分和陽性細胞比例評分乘積判斷性質，0～1 分為陰性，2 分以上為陽性。4 者聯合診斷以其中任何一項陽性則為陽性。診斷準確度=（真陽性＋真陰性）/總例數×100%。采用ROC 曲線分析血清TGAb、TPOAb聯合腫瘤組織BRD4、CXCR4對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的價值。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0 軟件統計分析，計量資料以()形式表示，采用獨立樣本t 檢驗，計數資料比較采用卡方檢驗，采用ROC 曲線分析預測價值。P<0.05 為比較差異有統計學意義。

2 結果

2.1 術后核素顯像檢查結果 126例行甲狀腺癌切除術患者術后經核素顯像檢查確診43例復發或轉移，未復發或轉移83例。

2.2 對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的診斷準確率對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的診斷準確率,血清TGAb 為79.37%，血清TPOAb 為78.57%，癌組織BRD4 為75.40%,癌組織CXCR4 為73.81%,血清TGAb、TPOAb聯合癌組織BRD4、CXCR4為91.27%。見表1。

表1 對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的診斷準確率

2.3 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯合對 甲狀腺癌切除術后復發或轉移的ROC 分析 經ROC 曲線分析四項指標對甲狀腺癌切除術后復發或轉移評估價值,血清TGAb 預測復發或轉移的AUC 為0.754，特異度為62.79%，敏感度為87.95%；血清TPOAb 預測復發或轉移的AUC 為0.753，特異度為65.12%，敏感度為85.54%；BRD4 預測復發或轉移的AUC 為0.701,特異度為53.49%,敏感度為86.75%；CXCR4 預測復發或轉移的AUC 為0.695，特異度為55.81%,敏感度為83.13%。TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯合預 測復發 或轉移的AUC 為0.895,特異度為83.72%,敏感度為95.18%。

表2 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯合對甲狀腺癌切除術后復發或轉移的ROC 分析

3 討論

甲狀腺癌是頭頸部多發惡性腫瘤疾病,近年來在實體惡性腫瘤中發病率增長速度最快。甲狀腺癌切除手術是目前臨床治療甲狀腺癌的主要方法，但患者術后頸部淋巴結轉移、肺部轉移的風險較高，降低存活率。因此早期準確的評估甲狀腺癌患者行切除術后復發或轉移情況風險對臨床制定適宜的治療方案、提高患者生存率、提生生存質量意義重大。臨床研究證實[6]，腫瘤標志物水平可為甲狀腺的治療、療效評價以及預后評估提供重要參考。TGAb 是甲狀腺濾泡柱狀細胞的糖蛋白之一，主要存在于自身甲狀腺免疫性疾病患者體內，是機體免疫功能紊亂的血清標志物[7]。TPOAb 則主要在甲狀腺細胞的內質網與頂部存在,屬于一類膜結合糖蛋白分子，以血紅素為輔基，促進甲狀腺激素的合成[8]。TGAb、TPOAb 均是自身免疫性甲狀腺疾病發生和發展時產生的重要抗體,可作為其發生和發展的標志物。有研究證實[9]，自身免疫性甲狀腺病是甲狀腺癌發生的危險因素,也與甲狀腺癌術后復發或轉移關系密切。本文以核素顯像檢查結果為金標準，隨訪126例行甲狀腺癌根治術患者術后復發或轉移情況,并與患者血清TGAb、TPOAb檢查結果比較，研究結果顯示，血清TGAb對甲狀腺癌根治術患者術后復發或轉移的診斷準確率為79.37%,特異度為62.79%,敏感度為87.95%，血清TPOAb對甲狀腺癌根治術患者術后復發或轉移的診斷準確率為78.57%，特異度為65.12%，敏感度為85.54%。并經ROC 曲線分析顯示血清TGAb、TPOAb對甲狀腺癌根治術患者術后復發或轉移的診斷曲線面積分別為0.754、0.753，可知血清TGAb、TPOAb 單個指標的診斷效能較低，還需參考其他指標。

趨化因子受體主要分為CC受體、XC受體、CX3C受體以及CXC受體4 個亞家族。CXCR4 屬于CXC受體家族，與其特異性配體趨化因子基質細胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)構成生物軸[10]。相關報道指出[11]，CXCR4/SDF-1生物周能激活多條信號通路,將腫瘤細胞肌動蛋白絲聚合，形成偽足進而促進血管局部形成，提高腫瘤細胞遷移、侵襲等生物學活性，促進腫瘤生長、轉移和浸潤。有學者研究發現[12],CXCR4水平越高，甲狀腺腫瘤分化程度越低,其表達水平高是影響甲狀腺腫瘤預后獨立危險因素。但本文研究結果顯示，腫瘤組織中CXCR4對甲狀腺癌切除術后復發或轉移診斷準確率為73.81%，ROC 曲線分析顯示AUC 為0.695,特異度為55.81%,敏感度為83.13%，可知CXCR4 單獨評估的效能不佳。BRD4 屬于溴結構域蛋白家族,溴結構域蛋白家族已被證實在多種腫瘤中表達上調，與腫瘤細胞的生長、增殖、凋亡等生物學行為密切相關[13]。BRD4 是一類進化層面高度保守的蛋白，能識別、結合乙酰化賴氨酸殘基，招募染色質調節蛋白、染色質重塑因子、轉錄因子等進而影響下游基因的轉錄過程，促進腫瘤細胞生長[14]。報道顯示[15]，抑制甲狀腺癌組織中BRD4表達可使癌細胞周期停滯，抑制腫瘤生長。本文結果中BRD4對甲狀腺癌切除術后復發或轉移診斷準確率為75.40%。本文分析4 項指標聯合診斷甲狀腺癌術后復發或轉移的顯示，診斷準確率為91.27%，經ROC 曲線分析，AUC 為0.895，特異度為83.72%，敏感度為95.18%。可知4 項指標聯合評估甲狀腺癌術后復發或轉移的效能較好，用于預測甲狀腺癌術后復發或轉移價值較高。

綜上所述，血清TGAb、TPOAb水平聯合癌組織BRD4、CXCR4對甲狀腺癌切除術患者術后復發或轉移具有較高預測價值。