CD64指數、IL-6、PCT檢測對兒童過敏性紫癜合并感染的早期診斷價值分析

余麗娜，侯海瑞，張燕妮，劉 梅

湖北省武漢市漢口醫院檢驗科，湖北武漢 430016

過敏性紫癜又稱亨-舒綜合征(HSP)，是一種好發于兒童，并以全身壞死性小血管炎為主要病理改變的免疫性疾病，表現為免疫復合物沉積伴有皮膚、關節、胃腸道、腎臟等多器官系統損害[1]。流行病學研究表明，細菌、病毒等病原微生物感染為本病最常見的原因，其次為各種過敏原如食物、藥物、吸入性過敏原及疫苗接種等[2]。本病雖具有自限性，但易反復，尤其是合并感染時，常導致多器官功能損害，病情進展較快，危害巨大。因此，早期預測HSP患兒合并感染的發生并及時予以干預對減少多器官功能損害具有重要臨床意義。目前診斷感染的金標準為病原學培養，但周期較長且陽性率較低，臨床上常有一定的局限性。而常規炎癥指標如白細胞(WBC)計數、C反應蛋白等在多種病理狀況下都會升高，缺乏特異性[3]。近年來研究表明，CD64為免疫球蛋白超家族成員中免疫球蛋白(Ig)G Fc段受體之一，其在感染早期受細菌誘發而大量表達于中性粒細胞表面，可反映機體早期細菌感染狀況[4]。白細胞介素-6(IL-6)為內皮等細胞產生的多功能炎癥細胞因子，在炎性反應的早期即發揮關鍵作用，同時研究顯示IL-6與多種免疫性疾病的發生、發展密切相關[5]。降鈣素原(PCT)為甲狀腺濾泡旁細胞等分泌的糖蛋白，在嚴重細菌感染或并發膿毒血癥時具有較好的診斷價值，可反映機體炎性反應程度[6]。本研究分析HSP患兒合并感染早期CD64指數、IL-6和PCT的變化，探討它們在HSP合并感染早期診斷中的價值及臨床意義。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年本院收治的472例HSP患兒(HSP組)為研究對象，根據患兒臨床診斷和病原學結果，將HSP患兒分為感染組(221例)和非感染組(251例)。另收集50例健康兒童作為對照組。感染組男108例、女113例，年齡2～16歲、平均(6.4±3.1)歲；非感染組男119例、女132例，年齡1～16歲、平均(6.6±3.3)歲；對照組男30例、女20例，年齡1～16歲、平均(6.6±3.2)歲。3組研究對象的性別、年齡構成比較，差異無統計學意義(P<0.05)，具有可比性。

納入標準：(1)所有HSP患兒的診斷標準、治療方案均符合中華醫學會2013年制訂的《兒童過敏性紫癜循證診治建議》[7]，且均為初發就診患兒；(2)所有患兒近期無糖皮質激素或免疫抑制劑類藥物使用史；(3)患兒均無其他過敏性、自身免疫性疾病病史。HSP患兒非感染組納入標準：(1)經醫院信息管理系統查詢，HSP患兒疾病診斷治療過程中沒有并發呼吸系統、泌尿系統等的前驅感染臨床指征；(2)HSP患兒在治療過程中進行的病原體實驗室檢查，結果全為陰性。本研究符合《世界醫學會赫爾辛基宣言》相關要求，研究對象及其監護人均知情同意并簽署知情同意書。

1.2實驗室指標檢測 分別采集所有研究對象的無抗凝劑靜脈血和EDTA-K2抗凝劑靜脈血各2 mL，EDTA-K2抗凝劑靜脈血用于檢測CD64指數及血常規，無抗凝劑靜脈血取血清檢測IL-6、PCT及超敏C反應蛋白(hs-CRP)。將20 μL CD64-PE抗體(購自美國BD公司)加入50 μL EDTA-K2抗凝全血中混勻，室溫避光孵育20 min，然后加入1 mL FACS細胞裂解液，裂解紅細胞，混勻后室溫避光孵育10 min，以1 500 r/min離心5 min，棄上清液，加入500 μL 磷酸鹽緩沖液混勻細胞，采用美國BD公司FACS Canto Ⅱ流式細胞儀檢測中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞熒光強度，計算CD64指數，計算公式：CD64指數=(中性粒細胞-淋巴細胞)/(單核細胞-中性粒細胞)。采用日本希森美康全自動血液細胞分析儀XE-2100檢測血常規；采用美國Peprotech公司人重組IL-6酶聯免疫吸附試驗試劑盒檢測IL-6；采用電化學發光法、羅氏Cobas E602及其原裝試劑盒檢測PCT；采用免疫比濁法及西門子公司原裝試劑盒檢測hs-CRP。

2 結 果

2.1HSP組患兒和對照組CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較 2組WBC水平差異無統計學意義(P>0.05)，但HSP組CD64指數及IL-6、PCT、hs-CRP水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 HSP組和對照組CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較

2.2不同類型HSP患兒CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較 參考Fessatou方法對HSP患兒皮膚、關節、腹部及腎臟癥狀進行評估并據此將HSP分為皮膚型、關節型、腹型、腎型、混合型(HSP涉及2個以上系統癥狀者)。不同類型HSP患兒比較，CD64指數及IL-6、PCT水平差異有統計學意義(P<0.05)，而WBC、hs-CRP水平差異無統計學意義(P>0.05)。兩兩比較，腎型HSP患兒的CD64指數及IL-6、PCT水平高于皮膚型、關節型、腹型HSP患兒，差異有統計學意義(P<0.05)，其余類型HSP患兒間CD64指數及IL-6、PCT水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同類型HSP患兒CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較

2.3感染組、非感染組、對照組CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較 3組CD64指數及IL-6、PCT、hs-CRP水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。兩兩比較，感染組CD64指數及IL-6、PCT、hs-CRP水平高于非感染組、對照組，非感染組高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 3組CD64指數及IL-6、PCT、WBC、hs-CRP水平比較

2.4CD64指數、IL-6、PCT、WBC、hs-CRP單獨檢測及CD64+IL-6+PCT聯合檢測對HSP合并感染的診斷效能 ROC曲線評估結果顯示，CD64+IL-6+PCT聯合檢測診斷HSP合并感染的曲線下面積(AUC)為0.913，靈敏度為74.3%，特異度為94.6%，陽性預測值為79.8%，陰性預測值為92.1%，準確度為88.4%，優于CD64指數、IL-6、PCT、WBC、hs-CRP單獨檢測的診斷效能，見表4。

表4 各指標單獨檢測及部分聯合檢測對HSP合并感染的診斷效能

3 討 論

HSP是一種由IgA介導的全身中小血管炎癥綜合征，好發于兒童，常侵犯患兒皮膚、關節、胃腸道及腎臟，導致皮膚出現非血小板減少性紫癜，關節腫痛，腹痛、腹瀉、嘔吐等消化道癥狀以及血尿、蛋白尿等腎臟損害癥狀[8]。HSP病因較為復雜，但研究顯示80%以上的HSP患兒在診斷HSP前1～3周出現過上呼吸道感染，導致患兒免疫功能的紊亂，也促進了HSP的發生。本課題組前期的研究也發現HSP患兒發病機制涉及體液免疫與細胞免疫的異常。

研究表明，CD64是機體體液免疫和細胞免疫連接的關鍵分子，在機體感染早期即可通過與IgG亞型(主要為IgG1和IgG3)的結合，參與免疫應答，在免疫復合物清除、抗原呈遞和炎癥介質的釋放中起重要作用[9]。正常情況下，CD64主要表達于抗原提呈細胞，如巨噬細胞、單核細胞等，但當機體受到感染時，中性粒細胞表面CD64大量表達，且在血漿中維持較長時間的高水平狀態[10]。同時，研究顯示CD64在感染引起全身炎性反應時明顯增高，在細菌感染性疾病中具有重要診斷價值[11]。而且最新研究顯示，中性粒細胞表面CD64在病毒等病原體感染和復制時也表達升高，可以作為抗病毒治療有效的重要指標[12]。本研究對感染組、非感染組HSP患兒和對照組兒童進行比較分析，發現感染組CD64指數明顯高于非感染組和對照組(P<0.05)，且非感染組CD64指數也明顯高于對照組(P<0.05)，這可能是由于CD64指數在機體被細菌或病毒的感染的早期就明顯升高，且持續較長時間所致，這說明CD64指數對HSP合并感染具有一定的診斷價值。不同類型HSP患兒比較，結果顯示，在病情最嚴重的腎型HSP患兒中CD64指數明顯高于其他類型，這也表明CD64指數可以很好地用于判斷患兒病情的嚴重程度。

有研究顯示，IL-6在HSP的發病過程中具有重要作用，可通過促進淋巴細胞和巨噬細胞增殖分化啟動炎性反應，直接或間接促進血管內皮細胞的損傷，導致血管通透性的改變，增加了血管脆性，引起壞死性血管炎，繼而出現皮膚紫癜等臨床表現[13-14]。其次，它還可以通過誘導中性粒細胞聚集，促進B細胞活化產生抗體進而改變機體免疫狀態[15]。本研究也顯示，感染組IL-6水平明顯高于非感染組和對照組，這與朱穎等[16]的報道結果一致，這說明IL-6有可能與HSP患兒病變嚴重程度有關，但具體機制有待進一步研究。

本研究還對HSP患兒的常規指標WBC、hs-CRP和PCT進行檢測，發現HSP組的hs-CRP和PCT水平均高于對照組(P<0.05)，說明無論是什么原因引起的HSP，患兒機體均出現不同程度的炎性反應。有研究顯示，在全身炎癥反應綜合征等疾病中這些指標會有不同程度的升高，但靈敏度或特異度有限[17]。為了進一步驗證這些指標對HSP合并感染的診斷效能，本研究采用ROC曲線評估CD64指數、IL-6、PCT、WBC、hs-CRP單獨檢測對HSP合并感染的診斷效能，發現PCT、WBC和hs-CRP對HSP合并感染中的診斷效能不是很好；而CD64指數對HSP合并感染的診斷靈敏度最高(76.1%)，IL-6對HSP合并細菌感染的診斷特異度最高，為84.5%，這說明這些指標單獨檢測對HSP的診斷效能都不太令人滿意，這與HSP發病機制較為復雜密切相關，同時因兒童機體免疫系統尚未完全發育成熟，故需要相關指標聯合檢測來診斷。結果表明，CD64指數+IL-6+PCT聯合檢測對HSP合并感染的診斷效能優于各指標單獨檢測。

綜上所述，CD64指數、IL-6和PCT在HSP合并感染患兒中明顯升高，可作為HSP合并感染早期診斷的重要標志物，三者聯合檢測對兒童HSP合并感染的診斷效能最佳，對臨床病情評估具有一定的指導價值。