HIV/AIDS合并侵襲性真菌感染GM和BG抗原檢測的價值*

黃宛虹，陳松林，羅曉璐，劉澤端，磨立達，林英輝△

1.廣西壯族自治區南寧市第四人民醫院/廣西醫科大學附屬南寧市傳染病醫院/廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)檢驗科，廣西南寧 530023；2.廣西中醫藥大學第一附屬醫院檢驗教研室，廣西南寧 530023

眾所周知，獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)主要因為人類免疫缺陷病毒(HIV)攻擊細胞免疫，導致機體免疫功能低下從而容易發生各種感染，特別是致病性真菌和某些條件致病性真菌引起的侵襲性真菌感染(IFI)，給患者造成較大危害[1]。而IFI具有缺乏典型臨床癥狀，影像學無特異性表現，不易病理活檢，真菌涂片鏡檢檢出率低及真菌培養時間長等特點[2-3]，嚴重影響了IFI的臨床診治。因此，尋求一種對IFI的診斷既準確又及時的檢驗方法非常必要。半乳甘露聚糖(GM)和(1，3)-β-D-葡聚糖(BG)檢測已在國內外得到廣泛應用，并且已證實它們對IFI的診斷效果良好[4]。本研究擬探討GM、BG檢測在HIV/AIDS合并IFI診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年10月在南寧市第四人民醫院住院的1 333例HIV/AIDS患者作為研究對象，所有研究對象中男986例、女347例，年齡16～94歲、平均(54.25±15.75)歲。所有HIV/AIDS患者均經確證試驗證實。回顧性查閱患者住院病歷，根據IFI診斷標準[5]將HIV/AIDS分為IFI組(380例)和非IFI組(953例)。IFI組中，男299例、女81例，年齡17～88歲、平均(50.51±14.91)歲；非IFI組中，男687例、女266例，年齡16～94歲、平均(56.49±15.92)歲。2組患者性別、年齡比較差異無統計學意義(P<0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 念珠菌顯色平板、血培養瓶來自鄭州安圖生物工程股份有限公司；真菌鑒定藥敏檢測試劑盒、TDR-1002細菌鑒定藥敏分析儀來自長沙天地人生物科技有限公司；BACT/ALERT 3D120全自動血培養儀來自法國梅里埃公司；LKM動態試管檢測儀、智能恒溫檢測儀及配套的BG檢測試劑來自湛江安度斯生物有限公司，GM檢測試劑來自丹娜生物科技有限公司。所有試劑均在使用有效期內。

1.3方法 HIV/AIDS住院患者出現感染癥狀時，于清晨空腹抽取靜脈血分別注入真空干燥管5 mL、無熱源肝素鈉抗凝采血管2 mL，分別以3 500 r/min離心 5min分離血清、血漿。采用酶聯免疫吸附試驗競爭法檢測血清GM水平，GM水平≥0.85 μg/L為陽性；采用光度法檢測血漿BG水平，BG≥100.5 pg/mL為陽性。同時，抽取靜脈血10 mL于血培養瓶中進行血液真菌培養，并留取痰、灌洗液等標本進行真菌培養。分析GM、BG單獨檢測、并聯檢測及串聯檢測診斷IFI的靈敏度(SE)、特異度(SP)、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)，并比較IFI組與非IFI組的GM、BG水平及真菌分布情況。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0統計軟件對數據進行統計分析。非正態分布的計量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用Mann-whitneyU檢驗。計數資料以頻數、率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1GM、BG單獨檢測與聯合檢測對IFI的診斷效能 IFI組380例患者中，GM、BG同時陽性140例，單一GM陽性76例，單一BG陽性111例，GM、BG同時陰性53例；非IFI組953例患者中GM、BG同時陽性5例，單一GM陽性106例，單一BG陽性69例，GM、BG同時陰性773例。GM、BG單獨檢測、并聯檢測及串聯檢測診斷IFI的SE、SP、PPV、NPV比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；兩兩比較，GM單獨檢測與GM和BG并聯檢測的PPV差異無統計學意義(P>0.05)，其余差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 GM、BG單獨檢測與聯合檢測的診斷效能[%(n/n)]

2.2IFI組與非IFI組GM、BG水平比較 IFI組GM、BG水平高于非IFI組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 IFI組與非IFI組GM、BG水平比較[M(P25,P75)]

2.3IFI組與非IFI組真菌培養結果 IFI組380例患者標本真菌培養均陽性，部分患者多部位可分離出同一種或兩種真菌，其中各類標本真菌培養陽性的有痰205份，骨髓或血液195份，灌洗液8份，咽拭子29份，腦脊液22份，尿液10份，大便5份，胸腔積液、腹水及膿液4份，皮膚組織2份。380例患者標本培養結果為念珠菌214例(56.32%)，以痰培養(85.06%)陽性為主；馬爾尼菲籃狀菌197例(51.84%)，以血液或骨髓培養(95.94%)陽性為主；隱球菌26例(6.84%)，以腦脊液培養(92.31%)陽性為主；曲霉菌15例(3.95%)，阿薩希孢子菌10例(2.63%)；混合真菌82例(21.58%)。非IFI組中400例痰或咽拭子真菌培養結果陽性，以念珠菌(98.25%)為主。見表3。

表3 IFI組與非IFI組真菌培養結果[n(%)]

組別n馬爾尼菲籃狀菌+隱球菌馬爾尼菲籃狀菌+阿薩希孢子菌念珠菌+隱球菌念珠菌+曲霉菌念珠菌+阿薩希孢子菌IFI組3803(0.79)3(0.79)11(2.89)5(1.32)4(1.05)非IFI組4000(0.00)0(0.00)0(0.00)0(0.00)0(0.00)

3 討 論

AIDS是一種由HIV感染引起，大量破壞CD4+T細胞，導致機體免疫功能受損乃至缺陷，極易引起細菌、真菌、病毒或者原蟲等多種病原體感染，而且通常伴有二重或者多重感染及腫瘤的發生等，嚴重危害人們健康生活的傳染病。而AIDS合并真菌感染率逐年上升，且病死率高，主要由該類患者臨床癥狀多，缺乏特異性，極易被漏診、誤診，患者不能得到及時的救治，濫用抗真菌藥物或延遲抗真菌藥物治療所致[6-8]。一般而言，診斷IFI的金標準是通過真菌培養的方法，該方法既能明確致病菌，又能做相應的真菌藥物敏感試驗，但是真菌培養需要的時間長，在早期無法及時指導臨床使用抗真菌藥物[9]，因此必須尋求一種快速而又準確的檢測方法用于指導臨床診斷及治療。

GM是大多數曲霉菌屬和青霉菌屬真菌細胞壁的多糖抗原成分，可通過酶聯免疫吸附試驗競爭法對其進行檢測；而BG是除隱球菌以外的真菌(包括念珠菌、曲霉菌、毛孢子菌)細胞壁的多糖成分。在IFI時，真菌被人體吞噬細胞吞噬或消化，GM、BG從細胞壁釋放入血，使血液或體液中GM、BG水平升高；而在淺部真菌感染或存在定植菌時，GM、BG不釋放入血，其血中水平不升高。GM、BG常在患者出現癥狀或影像特征前，通過不同的檢測原理，對患者的血清或其他體液進行檢測，可在2 h內得到檢測結果。因此，通過GM、BG檢測有助于臨床對早期IFI與非IFI進行鑒別診斷和治療[9-12]。本研究結果顯示，GM、BG單獨檢測診斷IFI時，除SE較低外，其余指標均較高，與馮凱等[13]研究的結果相一致，提示GM、BG檢測應用于早期IFI的診治有較高的價值，SE較低可能原因是本研究對象主要是HIV/AIDS患者，體內處理真菌的吞噬細胞較缺乏，導致假陰性。也有報道認為，GM主要檢測的是曲霉菌細胞壁GM成分，而BG主要檢測真菌細胞壁的BG成分，適用于除隱球菌和接合菌以外的所有深部真菌感染的早期診斷，尤其適用于侵襲性念珠菌和曲霉感染的診斷[14]，而HIV/AIDS患者合并IFI主要以念珠菌與馬爾尼菲籃狀菌為主。本研究顯示，BG單獨檢測診斷IFI的SE、SP、PPV、NPV均高于GM單獨檢測(P<0.05)，提示在HIV/AIDS合并IFI中BG的診斷價值高于GM；GM、BG并聯檢測診斷IFI的SE、NPV為86.05%、93.58%，串聯檢測的SP、PPV為99.48%、96.55%。GM、BG單獨與聯合檢測診斷IFI的SE、SP、PPV、NPV比較，除GM單獨檢測與GM和BG并聯檢測的PPV差異無統計學意義(P>0.05)外，并聯檢測的SE、NPV和串聯檢測的SP、PPV均高于單獨檢測(P<0.05)，說明GM、BG聯合檢測可提高HIV/AIDS合并IFI的診斷效能，減少漏診率與誤診率。

本研究結果還顯示，IFI組的GM、BG水平高于非IFI組(P<0.05)，提示GM、BG升高有助于IFI與非IFI的鑒別，而且GM、BG檢測可在2 h內得到結果，優于細菌培養[15]，可早期指導HIV/AIDS合并IFI的臨床診斷和治療，避免濫用抗真菌藥物或者延遲抗真菌藥物治療，使患者能夠得到及時有效救治。

本研究中IFI組主要以念珠菌(56.32%)及馬爾尼菲籃狀菌(51.84%)為主，其中馬爾尼菲籃狀菌的檢出率較其他學者報道的高，可能原因為馬爾尼菲籃狀菌較念珠菌更容易引起血液播散，而且本研究主要以HIV/AIDS患者為主，其病原體分布與普通患者存在差異[16-17]。而不同真菌在不同部位的取材，其真菌檢出情況也不一致，本研究中念珠菌以痰為主，馬爾尼菲籃狀菌以血液或骨髓為主，隱球菌以腦脊液為主，但不局限于這些標本，皮膚組織標本中也有馬爾尼菲籃狀菌檢出；而非IFI組有400例培養出念珠菌或曲霉菌，標本均為痰或咽拭子，經查閱病歷等證實為定植菌，因此多部位取材有助于IFI的診斷與鑒別診斷。

綜上所述，HIV/AIDS患者合并IFI時GM、BG水平升高，二者聯合檢測可提高其診斷HIV/AIDS合并IFI的效能，臨床上有助于HIV/AIDS患者合并IFI的早期診斷與鑒別診斷，減少漏診與誤診，降低患者病死率。HIV/AIDS患者合并IFI真菌培養以念珠菌和馬爾尼菲籃狀菌為主，多部位取材有利于IFI的診斷。