AutoLumo A2000Plus檢測新型冠狀病毒抗體性能評價

王雪蓮，張辰宇，馮曉敏，柏國明

1.北京懷柔醫(yī)院檢驗科，北京 101400；2.首都醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，北京100069

新型冠狀病毒肺炎是由新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)引起的以肺部病變?yōu)橹鞯男掳l(fā)傳染病，也可引起消化系統和神經系統的損傷，嚴重者可導致死亡[1]。SARS-CoV-2主要經呼吸道飛沫和密切接觸傳播。SARS-CoV-2感染的患者，包括無癥狀感染者均為傳染源，且人群普遍易感[2]。新型冠狀病毒肺炎流行形勢非常嚴峻，截止到2020年11月23號，新型冠狀病毒肺炎全球累計確診超5 888萬例，死亡破139萬例，所以做好SARS-CoV-2的實驗室檢查是非常重要和必要的。2020年3月3日發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》(以下簡稱“第七版方案”)[3]新增加了抗體血清學檢測作為診斷SARS-CoV-2感染的另一檢測手段，來彌補核酸檢測漏檢的風險。為保證檢驗結果可靠有效，對定量實驗進行方法學驗證是實驗技術要求中的重要一環(huán)[4]，依據ISO15189《醫(yī)學實驗室質量和能力的專用要求》，參考有關文獻[5-7]，對安圖磁微粒化學發(fā)光儀AutoLumo A2000Plus檢測SARS-CoV-2抗體IgG和IgM的性能進行評價。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 儀器：安圖磁微粒化學發(fā)光儀AutoLumo A2000Plus；試劑：安圖公司配套使用的SARS-CoV-2抗體IgM和IgG試劑(簡稱安圖試劑)、質控品和標準品，博奧賽斯生物公司SARS-CoV-2抗體IgM和IgG試劑(簡稱博奧賽斯試劑)。

1.2方法

1.2.1正確度分析 使用標準品低值和高值連續(xù)測試5次，取均值,看測定均值是否在標準品范圍內。

1.2.2精密度分析 按照WS/T 492-2016指導進行評價；檢測低值和高值2個不同濃度的質控品，每個濃度每天1批，每批重復測定5次，持續(xù)5批，每個質控品獲得25個數據；對于所獲得的測定結果進行統計學分析，計算變異系數(CV)。結果評價標準：批內CV≤1/4允許總誤差(TEa)%；批間CV≤1/3 TEa%。

1.2.3最低檢出限 根據CNAS-GL038：2019《免疫定性檢驗程序性能驗證指南》規(guī)定。使用安圖試劑盒稀釋液稀釋最低檢出限標本，測定4批，每批重復測定5次，共計20個數據。結果評價標準：根據CNAS-GL038：2019《免疫定性檢驗程序性能驗證指南》和《EP09-A2》規(guī)定進行。如果≥95%的標本檢出陽性，檢出限驗證通過。

1.2.4參考區(qū)間 選取40例健康者作為參考個體，年齡18～55歲，無既往病史，排除用藥，無SARS-CoV-2疫苗注射史，各項化驗指標均正常。標準要求：若40例參考個體中不超過2個觀測值在原始報告的參考限之外，廠商提供參考區(qū)間可以接受[8]。若3個以上觀測值超出界限，另選擇40例參考個體進行驗證，若≤2個觀測值超過原始參考限，則廠商提供參考區(qū)間可以接受；若仍有3個觀測值超出參考限，則應重新檢查所用分析程序，考慮2個標本總體生物學特征上是否存在差異，并考慮建立自己的參考區(qū)間。

1.2.5干擾試驗 主要驗證AutoLumo A2000Plus對溶血、黃疸、脂血的抗干擾能力[9]。取20份患者標本，包括10份陰性標本和10份陽性標本(S/CO>8)。將每份血清標本分成3份即60份標本，平均分3組，每組20份標本。干擾物濃度配制：血紅蛋白1 000 mg/dL、膽紅素50 mg/dL、三酰甘油6 000 mg/dL，比較加入干擾物前后S/CO均值的結果。

1.2.6攜帶污染率驗證 使用與儀器配套的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)試劑對高濃度質控品、稀釋后的樣品及零濃度樣品進行檢測，計算攜帶污染率，如污染率均小于1×10-6，驗證結果符合要求。具體驗證程序：使用與儀器配套的HBsAg試劑進行檢測；用高于最低檢出限106倍的該項目質控品作為原液；原液為樣品，在測定儀上測定原液的濃度值。重復測定10次，計算10次濃度的平均值，即為原液的原始濃度值。若因設備或試劑盒線性范圍限定而使得系統無法準確檢測質控品濃度值，則可采用稀釋推算法獲得。例如：某一質控品經過100倍稀釋后濃度值為10 000 ng/mL則原始濃度值為106ng/mL。以原液和零濃度為樣品，按照原液、零濃度樣品、零濃度樣品、零濃度樣品的順序為一組，在測定儀上測定上述樣品的濃度值，共進行5組測定；每一組的測定中，原液的原始濃度值為L原，第2個樣品的濃度值為Li2，第4個樣品的濃度值為Li4，i為該測定組的序號；按照公式Ki=(Li2-Li4)/(L原-Li4)計算攜帶污染率。

1.2.7化學發(fā)光法檢測結果 使用安圖試劑及博奧賽斯試劑分別對40例SARS-CoV-2疫苗接種人員進行檢測，并將檢測結果做比較分析。檢測結果判定標準：S/CO=待測標本發(fā)光值/Cutoff值,S/CO≥1.00時，結果判為陽性；S/CO≤1.00時，結果判為陰性。

2 結 果

2.1正確度驗證結果 使用安圖標準品低值和高值連續(xù)測試5次，實測均值均在標準品范圍內，見表1。

表1 SARS-CoV-2抗體IgM和IgG標準品范圍及正確度驗證結果

2.2精密度驗證結果 SARS-CoV-2抗體IgM和IgG質控品低值和高值的批內和批間精密度均在預期的目標CV內，見表2。

表2 SARS-CoV-2抗體IgM和IgG質控品精密度測定結果

2.3最低檢出限驗證結果 SARS-CoV-2抗體IgM和IgG 100%的標本檢出陽性，驗證結果符合要求，見表3。

表3 SARS-CoV-2抗體IgM和IgG最低檢出限測定結果

2.4參考區(qū)間及干擾試驗驗證結果 40例參考個體的SARS-CoV-2抗體IgM和IgG S/CO觀測值均在廠商提供的參考區(qū)間內(S/CO≤1.00)，故廠商提供的參考區(qū)間可以接受。加入血紅蛋白、膽紅素、三酰甘油干擾前后S/CO均值結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，干擾試驗驗證通過，見表4。

表4 干擾試驗結果比較

2.5攜帶污染率驗證結果 采用稀釋推算法測定原液的濃度值，將HBsAg原液稀釋100倍，重復測定10次，結果為300.562、340.558、276.836、315.432、320.135、314.974、384.294、350.626、365.501、312.865 IU/mL，原液稀釋100倍的平均值為328.178 3 IU/mL，計算原液的原始濃度為32 817.83 IU/mL。以稀釋原液和零濃度為樣品，按照稀釋原液、零濃度樣品、零濃度樣品、零濃度樣品的順序為一組，經測定，5組攜帶污染率均小于1×10-6，符合要求，見表5。

表5 攜帶污染率驗證結果

2.6安圖試劑及博奧賽斯試劑檢測結果比較 使用安圖試劑和博奧賽斯試劑分別對40例SARS-CoV-2疫苗接種人員進行SARS-CoV-2抗體IgM和IgG檢測，2種試劑檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表6。

表6 安圖試劑及博奧賽斯試劑檢測結果比較[n(%)]

3 討 論

檢測出SARS-CoV-2核酸雖然是疑似病例確診的“金標準”，但是假陰性是核酸檢測最突出的問題。SARS-CoV-2抗體的檢測可以有效地彌補核酸檢測漏檢的風險。抗體血清學檢測與核酸檢測相比，操作簡單、快捷，且標本質量有保證，檢測耗時短，可實現自動化、大批量分析，無需對患者進行咽拭子采樣，也可降低醫(yī)護人員暴露風險[10-11]。目前對SARS-CoV-2抗體的檢測主要有膠體金法和化學發(fā)光法。膠體金法其優(yōu)勢在于檢測時間短、成本低、無需借助儀器即可判讀結果，但只能對抗體進行定性檢測，無法實現精確定量。化學發(fā)光法是將高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異度的免疫反應相結合的檢測分析技術[12]，具有特異度高、線性范圍寬、結果穩(wěn)定、操作自動化、速度快等優(yōu)點，臨床上廣泛用于對各種抗原、抗體、激素、酶等的檢測[13]。

ISO15189認可中規(guī)定，實驗室對新購置的儀器，遇到重大投訴，重要零件及試劑更換后均需要對儀器的主要性能指標進行驗證，從而保證檢驗結果的準確可靠。經過周密的實驗設計，本實驗室從正確度、精密度、最低檢出限、參考區(qū)間、抗干擾能力及攜帶污染率幾方面對AutoLumo A2000Plus檢測SARS-CoV-2抗體的性能進行了驗證。結果顯示：對標準品低值和高值各進行5次測試，實測均值在標準品范圍內，正確度驗證合格。精密度是方法學評價的基礎，是性能驗證中最基礎的一項指標，也是檢測系統的基本分析性能之一，因此對精密度的驗證必不可少[14-15]。本試驗SARS-CoV-2抗體IgM和IgG質控品批內預期目標CV≤6.25%，批間預期目標CV≤8.33%。經檢測，SARS-CoV-2抗體IgM低值、高值的批內精密度分別為2.55%和2.33%，批間精密度分別為3.21%和2.90%，SARS-CoV-2抗體IgG低值、高值的批內精密度分別為3.23%和2.21%，批間精密度分別為4.07%和2.81%，SARS-CoV-2抗體IgM和IgG低值、高值質控品均符合預期目標CV要求。選用20份弱陽性標本進行最低檢出限驗證，本試驗100%的標本均能檢出，最低檢出限驗證符合要求。選用的40例參考個體的觀測值均在廠商提供原始參考區(qū)間內，參考區(qū)間可以接受。選用20份患者標本加入干擾物前后進行測定，S/CO均值結果差異不大，對溶血、黃疸、脂血的抗干擾能力符合該試劑規(guī)定要求。攜帶污染率試驗可評價檢測結果是否受到上一標本的影響，且攜帶污染率為一個常數，不受前后2標本濃度差值大小的影響，能有效反映檢測系統攜帶污染的可能[16-17]。本試驗5組測定的攜帶污染率均小于1×10-6，符合要求，證明該儀器的加樣系統不受前后2標本濃度差值大小的影響。使用安圖試劑和與博奧賽斯試劑分別對40例SARS-CoV-2疫苗接種人員進行SARS-CoV-2抗體IgM、IgG檢測，2種試劑檢測結果分別相差1例，說明2種試劑符合性比較好。

綜上所述，AutoLumo A2000Plus檢測SARS-CoV-2抗體IgM和IgG性能良好，可滿足本實驗室需求，能夠在新型冠狀病毒肺炎的防控及診治中發(fā)揮作用。