外周血單個核細胞EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查在鼻咽癌高危人群早期篩查中的應用

鐘志輝，張岳漢，李 喬，龍則平

廣東省高州市人民醫院檢驗科，廣東茂名 525200

鼻咽癌發生于鼻咽腔側壁和頂壁，是耳鼻咽喉頭頸外科常見的惡性腫瘤，占全世界新發癌癥病例0.7%，癌癥相關死亡率0.8%；有報道顯示2018年全世界鼻咽癌患者新發129 079例，死亡72 987例，我國鼻咽癌發病占全球38.29%，死亡占40.14%，在南方地區流行更為廣泛[1-2]。鼻咽癌早期癥狀不明顯，主要表現為鼻塞、鼻出血、耳鳴、頭痛、聽力下降等，易轉移擴散，放化療是臨床主要治療手段，早發現、早干預能夠改善患者預后[3-4]。本研究探討外周血單個核細胞EB病毒脫氧核糖核酸(EBV-DNA)檢測和鼻內鏡檢查在鼻咽癌早期篩查中的應用，為鼻咽癌的臨床發現提供支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據《中國癌癥篩查及早診早治技術方案(2011年版)》，計算血清鼻咽癌患病風險率(PROB)，PROB大于0.98為高危人群，PROB在0.65～0.98為低危人群[5]。從2019年10月至2020年9月進行鼻咽癌血清學篩查的人群中檢測出高低危人群1 454例作為研究對象。納入標準：(1)體力活動評分0～2分；(2)無鼻咽癌相關疾病病史。排除標準：(1)存在嚴重精神障礙；(2)并發嚴重心腎等重要臟器疾病；(3)其他原因不能配合完成研究。

1.2方法 分別取受試者全血和生理鹽水各1 mL并混勻，用淋巴細胞分離液分離出白細胞層，使用EB病毒核酸擴增熒光定量PCR檢測試劑盒的DNA提取液(中山大學達安基因股份有限公司提供)提取EBV-DNA，操作步驟嚴格按照說明書進行。以熒光定量PCR檢測EBV-DNA相對水平，檢測試劑和引物均購自中山大學達安基因股份有限公司。PCR反應程序設置為93 ℃ 2 min，93 ℃ 45 s，55 ℃ 60 s，10個循環；93 ℃ 30 s，55 ℃ 45 s，30個循環，反應結束后計算樣本中EBV-DNA拷貝數，低于檢測限為陰性，反之為陽性。

對所有研究對象進行鼻內鏡檢查，結果顯示有可疑病變為陽性，陽性患者進行組織病理學檢查，以病理結果作為鼻咽癌確診依據。計算EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查在高危人群中的陽性率，聯合檢測陽性為EBV-DNA檢測或鼻內鏡檢查其中一項陽性，比較三者的診斷價值。

1.3統計學處理 使用SPSS20.0統計軟件對數據進行統計分析。計數資料以頻數、率表示，比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析EBV-DNA檢測、鼻內鏡檢查單獨和聯合檢測對鼻咽癌的診斷價值。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查陽性率比較 452例高危人群中，EBV-DNA檢測陽性率為17.70%，鼻內鏡檢查陽性率為14.38%，1 002例低危人群中，EBV-DNA陽性率為12.08%，鼻內鏡檢查陽性率為9.68%，無論是高危人群還是低危人群，EBV-DNA檢測的陽性率與鼻內鏡檢查的陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；高危人群的EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查陽性率均高于低危人群，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查陽性率的比較[n(%)]

2.2EBV-DNA、鼻內鏡單獨和聯合檢測對高危人群鼻咽癌的診斷效能 EBV-DNA、鼻內鏡單獨和聯合檢測的ROC曲線下面積分別為0.862、0.790和0.930，約登指數分別為77.22%、75.17%和88.10%，均顯示出良好的診斷效能。EBV-DNA檢測的靈敏度為81.25%，鼻內鏡檢查的靈敏度為76.25%，低于兩者聯合檢測的93.75%，差異均有統計學意義(P<0.05)；EBV-DNA檢測的特異度為95.97%，鼻內鏡檢查的特異度為98.92%，聯合檢測的特異度為94.35%，EBV-DNA檢測與聯合檢測的特異度比較，差異無統計學意義(P>0.05)，鼻內鏡檢查的特異度高于聯合檢測，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 EBV-DNA、鼻內鏡單獨和聯合檢測診斷鼻咽癌的靈敏度和特異度

3 討 論

鼻咽癌是中國廣東、廣西、湖南等南部地區發病率較高的惡性腫瘤之一，男性發病率高于女性，病理機制并不完全清楚[6]。早期患者經治療治愈或無瘤生存比例超過80%，晚期患者需花費更多且5年生存率低于50%，因此在鼻咽癌發病率高的區域或人群中進行早期篩查，提高患者的早期診斷率，對于改善預后，提升治療效果有重要意義[7-8]。

EBV屬于皰疹病毒科嗜淋巴細胞病毒屬，主要以溶解性和潛伏性兩種方式感染細胞，后者是其主要感染方式，可表達各種信號蛋白干擾宿主的免疫應答，誘發持續感染[9]。研究顯示鼻咽癌的發生發展與EBV感染密切相關，鼻咽癌原發腫瘤基因型和外周血單個核細胞EBV基因型基本一致，EBV-DNA體內含量與疾病發展、治療及預后相關，是臨床上重要的腫瘤標志物[10-11]。CHAN等[12]對志愿者進行EBV-DNA和EBV IgA篩查，鼻內鏡檢查和隨訪發現EBV-DNA檢測提升了鼻咽癌患者的早期檢出率，有利于臨床治療。

鼻內鏡檢查可由單人操作完成，視野及成像清晰，直觀反映疾病部位情況，可以對部位進行組織取樣活檢，經濟實用，是當前耳鼻喉科應用廣泛的輔助診斷方式[13-14]。本研究中高危人群中EBV-DNA檢測陽性率為17.70%，鼻內鏡檢查陽性率為14.38%，均明顯高于低危人群的12.08%、9.68%(P<0.05)，說明EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查在鼻咽癌高危人群篩查中具有較高的應用價值，而且EBV-DNA檢測操作更為簡單快捷，臨床上用于鼻咽癌篩查更為廣泛[15-16]。高危人群EBV-DNA、鼻內鏡單獨和聯合檢測的ROC曲線下面積均高于0.700，顯示出良好的診斷效能，其中EBV-DNA檢測篩查鼻咽癌的靈敏度為81.25%，鼻內鏡檢查為76.25%，而二者聯合篩查鼻咽癌的靈敏度高達93.75%，明顯高于二者單獨檢測(P<0.05)，提示應將2種方法結合起來用于臨床鼻咽癌高危人群的篩查診斷；而EBV-DNA檢測、鼻內鏡檢查的特異度高于二者聯合檢測，說明二者聯合檢測存在假陰性情況，提示在上述檢測的基礎上仍需結合病理、血液、生化、影像等手段進行綜合評估，以提高診斷的準確性。

綜上所述，EBV-DNA檢測和鼻內鏡檢查在鼻咽癌高危人群早期篩查診斷中靈敏度和特異度均較高，二者聯合應用可提高鼻咽癌的診斷效能，是鼻咽癌高危人群早期篩查診斷的重要手段。