高級(jí)別漿液性卵巢癌患者血清miR-1246和miR-2278檢測(cè)水平的臨床診斷價(jià)值

趙 莉，曹陽(yáng)陽(yáng)，宋秀英，樊陽(yáng)陽(yáng)

(1.西安高新醫(yī)院婦科，西安710075; 2.陜西省人民醫(yī)院產(chǎn)科，西安 710068)

卵巢癌(ovarian cancer,OC)的死亡率高居?jì)D科惡性腫瘤之首，其中晚期的高級(jí)別漿液性卵巢癌(high-grade serous ovarian cancer,HGSOC)患者約占70%[1-2]。臨床上HGSOC 的標(biāo)準(zhǔn)治療方案是術(shù)后輔以鉑類為基礎(chǔ)的化療，但是大量研究指出半年內(nèi)HGSOC 患者復(fù)發(fā)率高達(dá)25%，5年總體生存率(overall survival,OS)僅為31%[3-4]。目前對(duì)HGSOC的治療方案均欠佳，尋找潛在的生物標(biāo)志物是進(jìn)一步提高HGSOC 臨床療效的新的研究方向。

MicroRNA 是一類由21～25 個(gè)核苷酸組成的非編碼小RNA 家族。miR-1246 是一種腫瘤標(biāo)志物，已有報(bào)道指出miR-1246 在宮頸鱗癌和食管癌等[5-6]中呈異常高表達(dá)。miR-2278 是腫瘤抑制因子，具有抑制白血病細(xì)胞增殖和恢復(fù)化療藥物應(yīng)答等作用[7]。目前關(guān)于miR-1246 和miR-2278 在HGSOC臨床診斷中的價(jià)值研究尚不深入，本研究擬考察miR-1246 和miR-2278 可否作為檢測(cè)HGSOC 的候選血清生物標(biāo)志物，旨在為HGSOC 的臨床合理診療提供新的思路和參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年1月～2019年1月西安高新醫(yī)院婦科收治的且經(jīng)病理證實(shí)的55 例HGSOC 患者為試驗(yàn)組，年齡37～76 歲，平均年齡52.3±2.9 歲。另選擇同期我院51 例體檢健康者為對(duì)照組，年齡31～69 歲，平均年齡51.8±3.2歲。本研究經(jīng)由我院倫理委員會(huì)審核并通過，受試者自愿參加且均簽署知情同意書。分別收集兩組的年齡、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)和國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì) (Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期，試驗(yàn)組的FIGO 分期患者例數(shù)顯著高于對(duì)照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：① 心、肝、肺等器官功能障礙者；②并發(fā)其他腫瘤者；③入院前未接受任何腫瘤相關(guān)性手術(shù)，放化療。

1.2 儀器與試劑 RNA 提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司，miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒和miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 試劑盒均購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.3 方法 受試者于入院后2 周內(nèi)進(jìn)行采血，采集清晨空腹靜脈血10 ml，2 000 r/min 離心20 min，棄去上清液，置于-80℃冰箱待測(cè)。采用RNA 提取試劑盒提取總RNA，用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 試劑盒對(duì)miRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real-time quantitative PCR,rt-qPCR)分析，以U6 為內(nèi)參。Ct值計(jì)算miR-1246和miR-2278 的絕對(duì)濃度。以miR-1246 和miR-2278 絕對(duì)濃度的中位值進(jìn)行劃分，大于中位值視為表達(dá)上調(diào)，反之為表達(dá)下調(diào)。miR-1246 引物序列：AGGGGCAATGGATTTTTGG；miR-2278 引物序列：GGGAGAGCAGTGTGTGTT。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。滿足正態(tài)性分布及方差齊性的計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)。不滿足正態(tài)性分布和(或)方差齊性，采用Mann-Whitney 秩和檢驗(yàn)。多組比較采用單因素方差分析(ANOVA)，采用LSD 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料的比較 見表1。試驗(yàn)組患者的CA125，miR-1246 和miR-2278 水平均顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P=0.00)。

表1 兩組臨床資料的比較

2.2 血清CA125，miR-1246 和miR-2278 單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值 見表2。血清CA125，miR-1246 和miR-2278 聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度分別為98.7%和79.5%，診斷符合率為89.1%，高于單一檢測(cè)指標(biāo)。

表2 血清CA125，miR-1246 和miR-2278 單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值

2.3 血清miR-1246 和miR-2278 的表達(dá)上調(diào)與HGSOC患者臨床病理特征的關(guān)系 見表3。血清miR-1246和miR-2278 上調(diào)在FIGO 分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無復(fù)發(fā)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)，血清miR-1246 和miR-2278 上調(diào)在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中的比例顯著高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。

表3 血清miR-1246 和miR-2278 的表達(dá)上調(diào)與HGSOC 患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

3 討論

卵巢癌是導(dǎo)致女性惡性腫瘤死亡的主要原因[8]，其較高的死亡率與早期癥狀不明顯、診斷延遲和缺乏診斷標(biāo)志物等有關(guān)[9-10]。在診斷標(biāo)準(zhǔn)物方面，CA125 是婦科領(lǐng)域應(yīng)用較廣泛的血清腫瘤標(biāo)志物，然而，有研究結(jié)果指出其對(duì)早期OC 的檢測(cè)作用有限，僅有約50%的早期OC 患者血清CA125 水平高于正常水平[11]。另外，CA125 在子宮內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌癥和盆腔炎等良性疾病中也會(huì)升高。因此，尋找高準(zhǔn)確度和特異度的血清標(biāo)志物對(duì)OC 的早期診斷意義重大。

microRNA 是一類非編碼單鏈RNA 分子，主要參與生物轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的負(fù)向調(diào)節(jié)，通過調(diào)節(jié)靶基因和下游信號(hào)通路發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用。大量研究結(jié)果指出失調(diào)的microRNA 與卵巢惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12-14]。miR-1246 于2008年發(fā)現(xiàn)于人胚胎干細(xì)胞，其在多種腫瘤中呈高表達(dá)，被認(rèn)為是一種癌基因[15]。miR-1246 可促進(jìn)肺上皮祖細(xì)胞的快速增殖和未分化表型，在肺癌患者組織中呈高表達(dá)且發(fā)揮促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展的作用。此外，近期有報(bào)道亦指出miR-1246 在食管鱗癌中呈異常高表達(dá)。miR-2278 可作為腫瘤抑制因子，上調(diào)miR-2278 的表達(dá)可抑制耐藥白血病細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。目前關(guān)于miR-1246和miR-2278 在HGSOC 臨床診斷中的價(jià)值研究尚不深入，本研究擬考察miR-1246 和miR-2278 可否作為檢測(cè)HGSOC 的候選血清生物標(biāo)志物，旨在為HGSOC 的臨床合理診療提供新的思路和參考。

本研究結(jié)果表明miR-2278 是預(yù)測(cè)HGSOC 最好的單一標(biāo)志物，敏感度為90.9%，miR-1246 特異度最高76.3%。當(dāng)miR-1246，miR-2278 和CA125聯(lián)合使用時(shí)，敏感度達(dá)到98.7%。因此，血清miR-1246 和miR-2278 可能成為診斷HGSOC 的有前途的生物標(biāo)志物，并克服CA125 局限性。

綜上所述，miR-1246 和miR-2278 是鑒別HGSOC較敏感和特異的標(biāo)記物，其表現(xiàn)優(yōu)于CA125。miR-1246，miR-2278 和CA125 的三重組合是高敏感度鑒定HGSOC 強(qiáng)有力的標(biāo)記物。接下來，我們會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大研究的規(guī)模來證實(shí)miR-1246 和miR-2278 作為診斷HGSOC 的生物標(biāo)志物的作用。