帕金森病患者治療期間血清miR-153，miR-128b水平表達與非運動癥狀的相關性研究

李群英，甄時建，何樹光，陳超英

（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院檢驗科，湖南株洲 412000）

帕金森是中老年中樞神經系統常見病，主要以運動緩慢、靜止性震顫、步態、姿勢異常為特征性表現，發病率、致殘率、死亡率均較高[1]。病理學研究結果顯示，除上述特征性臨床表現外，還存在諸多非運動癥狀，如感覺異常、自主神經紊亂及精神疾病等，除了疾病本身給患者造成嚴重困擾外，對患者生活質量也造成極大影響[2-3]。帕金森作為全球第二大神經病變，尚缺乏有效的治療方案，目前基因治療是最有前景的治療方案。微小RNA（micro RNA，miRNA）是機體內內源性微小非編碼單鏈RNA，主要作用于靶基因的特定序列，在轉錄完成后，促使靶基因活性受到抑制并降解，調控基因的表達，在生物細胞增殖、分化、凋零等過程中扮演不可或缺的角色[4]。血清miR-153，miR-128b 均隸屬于腦特異性 miRNA，其有效保障了中樞神經系統的健康發育，個體罹患帕金森后，中樞神經系統受損，受損細胞主動分泌miRNA 并釋放入血，造成腦部損傷患者血液中miRNA 表達譜發生異常改變[5-6]。但臨床關于miR-153 和miR-128b與帕金森患者非運動癥狀之間的研究較少。鑒于此，本研究旨在探析miR-153 和miR-128b 在帕金森患者機體中表達情況，并分析其與帕金森患者非運動癥狀之間的關系，旨在為緩解帕金森患者臨床癥狀，促進良性預后提供新的干預靶點。

1 材料與方法

1.1 研究對象 本次研究方法與思路均取得我院醫學倫理委員會審核通過。前瞻性研究選取我院2018年1月～2019年10月期間收治的82 例帕金森患者，其中男性43 例，女性39 例；年齡55～78 歲，平均年齡66.52±6.45 歲；吸煙者70 例，飲酒者68 例；并發癥：糖尿病67例，高血壓70例，冠心病45例（每位患者可并發單種或多種疾病）。納入標準：①滿足帕金森相關指南[7]：a.單側發病；b.伴靜止性震顫；c.病程呈進行性加重；d.癥狀長期非對稱，患病側明顯；e.對左旋多巴胺反應良好，且反應持續時間≥5年；f.伴左旋多巴誘導舞蹈癥；②患者及家屬均知曉本次研究目的并自愿簽署知情同意書。排除標準：①伴重要臟器功能受損者；②并發認知功能缺陷，不能有效配合研究者；③并發其他腦血管疾病，如腦血管疾病后遺癥、腦損傷等。

1.2 儀器與試劑 總RNA 試劑盒：賽默飛世爾中國公司；一次性采血器：河南省三強醫療器械有限公司。

1.3 方法

1.3.1 非運動癥狀評估方法：采用非運動癥狀評價量表（non motor symptoms scale，NMSS）[8]評估，包括睡眠、疲勞、心血管系統等8 項內容，按照近1 個月內癥狀出現的頻率（1～4 個等級標準）與嚴重程度（0～3 等級制），NMSS 總分=程度×頻率，得分越高表明帕金森患者非運動癥狀越嚴重。

1.3.2 血清學檢測方法：血清miR-153，miR-128b 水平檢測：入院抽取5ml 空腹肘靜脈血，3 500r/min 離心15min，分離上清液保存于-30℃待檢。采用相對定量分析法分析、解讀數據，得出血清miR-153，miR-128b 表達譜。

1.3.3 隨訪方法：所有患者均參照帕金森指南給予常規抗帕金森病藥物治療，包括多巴胺受體激動劑、左旋多巴、抗氧化應激等藥物，本研究中患者在門診給予：鹽酸多奈哌齊膠囊、鹽酸普拉克索片，第1 周起始劑量0.375mg/天，第2 周0.75mg/天，每周加量一次，每日最大劑量≤4.5mg，3 次/天，多巴絲肼片治療，375～780mg/天，3 次/天，在此基礎上聯合認知功能訓練。對所有患者均進行有效追蹤，患者分別于治療前、治療4，8，12周于我院門診復查，采用NMSS 量表評估患者非運動癥狀，并檢測血清miR-153，miR-128b 水平，所有入組患者隨訪期間的非運動癥狀評估與血清學檢測均由同一組醫師進行。

1.4 統計學分析 采用 SPSS 23.0統計分析軟件，符合正態分布的計量資料以均值±標準差（x ± s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；計數資料以率表示，兩組間比較采用χ2檢驗，采用一般線性回歸分析得到線性回歸方程，檢驗血清miR-153，miR-128b 對帕金森患者非運動癥狀的影響；相關性分析采用雙變量Pearson 相關性檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療不同階段血清miR-153，miR-128b 表達譜及NMSS 評分對比 見表1。治療前血清miR-153，miR-128b 表達譜及NMSS 評分＞治療4 周＞治療8 周＞治療12 周，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

表1 治療不同階段血清miR-153，miR-128b 表達譜及NMSS 評分對比（x ± s）

2.2 治療不同階段血清miR-153，miR-128b 表達譜與NMSS 評分之間的相關性 見圖1、圖2。經相關性分析得出，NMSS 評分與血清miR-153，miR-128b 表達譜均呈正相關（r=0.246，0.486，P＜0.001）。

圖1 血清miR-153 與NMSS 評分之間的相關性

圖2 miR-128b 與NMSS 評分之間的相關性

2.3 治療不同階段血清miR-153，miR-128b 表達譜與NMSS 評分之間的線性回歸分析 見表2。經線性回歸分析檢驗得到血清miR-153 線性回歸方程：Y=13.656+1.704X， 血清miR-128b：Y=13.656+22.661X，帕金森患者血清miR-128b 水平可能是患者非運動癥狀的影響因素（P＜0.05）。

表2 治療不同階段血清miR-153，miR-128b 表達譜與NMSS 評分之間的線性回歸分析

3 討論

帕金森病的治療需求迫在眉睫，隨著對miRNA導致疾病發病的作用認知不斷加深，臨床逐漸開展以基因作為治療靶點的方案。因miRNA 亞型諸多，帕金森疾病發病機制復雜，以單基因作為干預靶點的治療效果難達預期，但miRNA 對編碼基因的多途徑調控，為各類疾病的治療開辟了新的途徑[9-10]。

miRNA 是生物進化過程中保守性較高的內源性非編碼小分子，對靶mRNA 具有顯著的負性調控作用，其在體內發揮的生物學作用主要體現在如下幾點：①miRNA 主要表達于胚胎發育、細胞分化、代謝、凋亡等過程中，具有廣泛的、顯著的基因調節功能[11]；②miRNA 具有極強的穩定性，難以被核糖苷酸酶降解，即使在各種極其惡劣環境下，如強酸、煮沸等，miRNA 表達變化不明顯[12]；③miRNA 可通過多元化途徑與復雜的調節網絡系統對靶基因進行調控，各種miRNA 及其亞型之間相互協同、拮抗，共同參與信號傳導，但在不同組織中，其占主導地位均是該組織中特異性的miRNA，miRNA 表達具有顯著的時間特異性與組織特異性[13-14]；④miRNA 也在血液、組織細胞、羊水、尿液等體液中表達，且外周血液中miRNA水平監測相對于組織中監測更為便捷、且具有較高的準確性。由此可見，外周血中miRNA 含量可作為疾病治療及預后的新型評估生物學標志的科學性[15-16]。血清微小RNA-153（microrna RNA-153，miR-153）與微小RNA-128b（microrna RNA--128b，miR-128b）均屬于miRNA 重要亞型，其與帕金森病理發生過程密不可分；血清miR-153 和miR-128b 水平增加，作為腦部組織特異性miRNA亞型，在介導炎癥凋亡、受體功能等方面均具有重要意義。本研究結果顯示，治療前血清miR-153 和miR-128b 表達譜及NMSS 評分＞治療4 周＞治療8 周＞治療12 周，表明帕金森病患者血清miR-153和miR-128b 表達譜與非運動癥狀密切相關。分析其原因可能為：①患者罹患帕金森疾病后，腦部組織細胞受損，造成血腦屏障受損，腦部組織中特異性miR-153 和miR-128b 沿著受損部位浸入血液中，并隨著血液循環到達全身，且疾病越嚴重，血清miR-153 和miR-128b 水平表達越高[17-18]。②患病后，機體神經元受到損害，miR-128 可對神經元生長分化進行調控，通過下調miR-128b 水平，多巴胺含量及神經元興奮性均隨之下降，進而影響患者認知功能；③miR-128b 還能夠調節PCMI，進而對腦部皮層發育產生影響；④miR128b 可與人軸抑制蛋白1 特異性結合，誘發神經炎癥反應異常，加重病情[19-20]。由此推測能否將血清miR-153 和miR-128b 表達譜作為帕金森病患者非運動癥狀的預估指標。

為進一步驗證上述猜測，本研究進一步經相關性分析得出，NMSS 評分與血清miR-153 和miR-128b 表達譜均呈正相關，該結果提示臨床可通過監測并干預血清miR-153 和miR-128b 表達譜，以此緩解帕金森病患者非運動癥狀。分析造成該種現象的原因可能為：當血清miR-153 和miR-128b 水平升高，造成個體神經元凋亡，帕金森病患病后，大血管內皮細胞退化，血腦屏障受損、神經元丟失，最終導致患者個體神經保護功能下降，病情加重。故考慮將血清miR-153，miR-128b 表達譜作為帕金森病患者非運動障礙情況評估的有效指標，但本研究仍具有一定的局限性，如納入的樣本數量較少，且缺乏個案分析，本研究經線性分析得知血清miR-153 不是帕金森病患者非運動癥狀的影響因素，可能與本次研究納入的樣本數量較少有關。因此本研究結果的可信度還需在未來開展更多的相關性研究加以證實，旨在為臨床諸多帕金森病患者的非運動癥狀治療提供新的干預靶點。

綜上所述，帕金森病患者血清miR-153 和miR-128b 表達譜與非運動癥狀密切相關，臨床可通過監測并干預血清miR-153 和miR-128b 表達譜，以此緩解帕金森病患者非運動癥狀，提高患者預后。