井岡羥胺A 酯類衍生物的酶法合成及其生物活性

葉 康, 江瑞妮, 蒼 濤, 陸躍樂, 陳小龍, 范永仙

(1. 浙江工業大學 生物工程學院，杭州 310014；2. 浙江工業大學 化學工程學院，杭州 310014；3. 浙江省農業科學院 農產品質量安全與營養研究所，杭州 310021)

井岡霉素 (validamycin) 是由吸水鏈霉菌井岡變種合成的一類農用抗生素[1]，包括A、B、C、D、E、F、G 和H 共8 個組分，具有低毒、高效、廉價等優勢，被廣泛用于水稻紋枯病的防治[2]。井岡羥胺A (validoxylamine A) 作為井岡霉素A 中的活性結構單元，具有抑菌、殺蟲活性[3]，是重要的生物農藥中間體[4](圖式1)。

研究表明，井岡羥胺A 作為一種競爭性的海藻糖酶抑制劑，能夠高效抑制海藻糖的水解，阻斷生物體內的能量代謝，達到抑制病蟲害的效果[5]。然而，盡管在離體試驗中井岡羥胺A 對海藻糖酶表現出極強的抑制活性[6-7]，但是由于其含多個羥基結構，而生物體對井岡羥胺A 的吸收效果較差，所以在活體實驗中未能表現出應有的生物活性[8]。因此，如何提高井岡羥胺A 對昆蟲表皮的透皮作用成為研究的熱點和難點。鄭鹛[9]合成了菊酰基井岡羥胺A 化合物，其在500 mg/L 下對苜蓿蚜蟲死亡率達96.7%。鄭輝[10]通過化學法構建了多種井岡羥胺A 衍生物的化合物庫，在一定程度上拓寬了井岡羥胺A 的應用范圍。

酯化反應是常見的用于改變化合物極性的藥物設計手段，但井岡羥胺A 的多羥基結構加大了其通過化學方法進行酯化修飾的難度。與井岡羥胺A 結構類似的糖類化合物，在經脂肪酶Novozym 435 酯化合成糖酯后，已廣泛用于食品、化妝品以及醫藥等領域[11]。由于在傳統的化學酯化過程中，極易產生多種副產物，因此需要涉及羥基的保護/脫保護等復雜步驟[12-13]，而脂肪酶催化的酯化反應具有高度的選擇性，能在溫和的條件下一步合成單一位點的酯化產物[14-16]，并且現有的固定化技術不僅能夠有效提高脂肪酶在有機溶劑中的耐受性，而且固定化脂肪酶還能夠回收再利用，降低了使用成本[15,17]。鑒于此，本研究以井岡羥胺A 為先導化合物，利用脂肪酶Novozym 435將不同的有機酸引入井岡羥胺A 分子中，設計合成了9 個未見文獻報道的井岡羥胺A 酯類衍生物(圖式2)，并測定了其對立枯絲核菌、油菜菌核病菌以及豆蚜的生物活性。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance Ⅲ 500 MHz 核磁共振儀 (以DMSO-d6或者Methanol-d4為溶劑，TMS 作為內標)。薄層層析硅膠板 (GF 254 型) 購自青島海洋化工；柱層析硅膠 (300～400 目，粒度為40～45 μm)購自阿拉丁 (上海) 試劑有限公司；脂肪酶Novozym 435 購自北京高瑞森科技有限公司；全部試劑均為市售分析純。

1.2 目標化合物合成

將8 g 井岡羥胺A 加入500 mL 叔丁醇中，100 ℃下回流5 h，得到井岡羥胺A-叔丁醇飽和溶液，備用。在單口圓底燒瓶中，依次加入井岡羥胺A-叔丁醇飽和溶液21 mL (含井岡羥胺A 0.5 mmol)、有機酸2 mmol、Novozym 435 脂肪酶60 mg 和4?分子篩600 mg，于60 ℃恒溫磁力攪拌水浴鍋中反應。24 h 后補加井岡羥胺A 固體170 mg (0.5 mmol)，繼續反應24 h，采用薄層色譜(TLC，V(正丙醇)：V(乙酸) :V(水) = 4 : 1 : 1) 監控至反應終點。過濾，減壓脫去溶劑，用10 mL正丁醇萃取，再用飽和氯化鈉洗滌，保留有機相，減壓蒸餾除去有機溶劑，硅膠柱層析 (V(正丙醇) :V(乙酸) = 8 : 1) 純化，減壓脫去溶劑并干燥后得到井岡羥胺A 酯類衍生物。

9 種新型衍生物的結構經1H NMR、13C NMR和HRMS 驗證，相關數據如下。

井岡羥胺A 芥酸酯 (Ⅰ)：淡黃色油狀液體，收率42%。1H NMR (500 MHz, Methanol-d4),δ: 5.98 (d,J= 13.7 Hz,1H), 5.36 (t,J= 4.9 Hz, 2H), 4.81 (d,J= 12.9 Hz, 1H), 4.61(d,J= 13.0 Hz, 2H), 4.21 (p,J= 14.4, 12.8 Hz, 3H), 3.99 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 3H), 3.46 (d,J=15.1 Hz, 2H), 3.33 (d,J= 1.7 Hz, 3H), 3.27 (d,J= 8.8 Hz,1H), 2.40 - 2.32 (m, 2H), 2.12 (s, 1H), 2.09 - 2.03 (m, 4H),2.03 (s, 1H), 1.66 - 1.60 (m, 2H), 1.38 - 1.28 (m, 32H), 0.92(t,J= 6.8 Hz, 3H)。13C NMR (126 MHz, Methanol-d4),δ:175.70, 140.51, 140.84, 125.12, 75.02, 74.43, 74.12, 72.73,72.36, 70.74, 65.91, 63.33, 56.27, 54.83, 37.75, 33.04, 31.26,30.81, 30.72, 30.61, 30.58, 30.42, 30.31, 30.29, 30.24, 28.10,26.08, 26.04, 26.03, 22.57, 14.47。HRMS:C36H65NO9[M+H]+，測試值656.470 0，計算值656.469 3。

井岡羥胺A 對氟苯乙酸酯 (Ⅱ)：淡黃色油狀液體，收率34%。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6),δ: 7.31 (dd,J= 8.4,5.5 Hz, 2H), 7.13 (t,J= 8.8 Hz, 2H), 5.75 (d,J= 4.1 Hz, 1H),4.20 (d,J= 3.1 Hz, 1H), 4.18 (d,J= 3.0 Hz, 1H), 4.00 (s, 1H),3.98 (s, 1H), 3.96 - 3.96 (m, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.91 (s, 2H),3.74 (d,J= 5.9 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.43 - 3.32 (m, 4H),3.26 - 3.22 (m, 1H), 3.08 - 3.01 (m, 2H), 2.99 - 2.92 (m, 1H),1.99 - 1.92 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.02 (t,J= 13.4 Hz,1H)。13C NMR (126 MHz, DMSO-d6),δ: 171.19, 160.29 (d,J= 242.6 Hz), 140.72, 131.46 (d,J= 8.1 Hz), 130.78, 120.00,114.99 (d,J= 20.8 Hz), 74.61, 73.39, 72.61, 71.61, 71.11,70.18, 65.47, 61.45, 54.10, 52.09, 38.40, 35.97, 27.52。HRMS:C22H30FNO9[M+H]+，測試值472.197 9，計算值472.197 7。

井岡羥胺A 對氯苯乙酸酯 (Ⅲ)：淡黃色油狀液體，收率39%。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6),δ: 7.40 - 7.34 (m,2H), 7.33 - 7.28 (m, 2H), 5.74 (dd,J= 15.2, 4.0 Hz, 1H), 4.68(d,J= 13.3 Hz, 1H), 4.61 - 4.54 (m, 2H), 4.50 (s, 3H), 4.20(dd,J= 10.7, 3.1 Hz, 2H), 3.99 (t,J= 8.0 Hz, 2H), 3.74 (d,J=9.5 Hz, 1H), 3.68 (s, 1H), 3.48 (dd,J= 10.4, 3.7 Hz, 1H), 3.45 -3.38 (m, 2H), 3.35 (td,J= 9.1, 8.7, 3.9 Hz, 2H), 3.28 - 3.22(m, 1H), 3.12 (s, 1H), 3.05 (s, 1H), 3.01 (d,J= 9.2 Hz, 1H),2.96 (d,J= 9.3 Hz, 1H), 1.97 (s, 1H), 1.71 (dd,J= 10.9, 3.6 Hz,1H), 1.06 (dt,J= 13.4 Hz, 1H)。13C NMR (126 MHz, DMSOd6),δ: 170.87, 140.68, 135.07, 131.51, 128.28, 119.85, 74.57,73.33, 72.65, 70.58, 70.16, 70.07, 65.52, 61.40, 54.05, 52.04,38.40, 35.90, 27.48。HRMS:C22H30ClNO9[M+H]+，測試值488.167 7，計算值488.168 2。

井岡羥胺A3-苯丙酸酯 (Ⅳ)：黃色油狀液體，收率26%。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6),δ: 7.27 (t,J= 7.5 Hz,2H), 7.21 (d,J= 7.6 Hz, 2H), 7.18 (t,J= 7.3 Hz, 1H), 5.78 (d,J= 4.5 Hz, 1H), 4.72 - 4.34 (m, 8H), 4.18 (dd,J= 10.9,3.1 Hz, 1H), 4.00 (d,J= 6.2 Hz, 1H), 4.00 - 3.95 (m, 2H),3.74 (d,J= 6.3 Hz, 1H), 3.43 (dd,J= 8.9, 5.7 Hz, 1H), 3.38 (t,J= 4.2 Hz, 1H), 3.36 (d,J= 9.0 Hz, 1H), 3.27 (dd,J= 9.4,4.4 Hz, 1H), 3.12 (d,J= 4.7 Hz, 1H), 3.06 (q,J= 4.2, 3.7 Hz,1H), 3.00 (t,J= 9.7 Hz, 1H), 2.85 (t,J= 7.6 Hz, 2H), 2.61 (t,J= 7.6 Hz, 2H), 1.98 (tdt,J= 10.2, 6.8, 4.0 Hz, 1H), 1.70 (dt,J= 14.4, 3.5 Hz, 1H), 1.04 - 0.98 (m, 1H).13C NMR (126 MHz,DMSO-d6),δ: 172.75, 141.05, 141.00, 128.77, 128.65, 126.49,120.32, 75.07, 73.75, 73.70, 73.06, 71.45, 70.60, 65.33, 61.86,54.62, 52.58, 36.33, 35.59, 30.76, 27.91. HRMS: C23H33NO9[M+H]+，測試值498.268 1，計算值498.268 8。

井岡羥胺A 肉桂酸酯 (Ⅴ)：黃色油狀液體，收率33%。1H NMR (500 MHz, Methanol-d4),δ: 7.69 (dd,J=16.0, 7.1 Hz, 1H), 7.58 (dd,J= 6.2, 2.8 Hz, 2H), 7.38 (dd,J=4.6, 2.2 Hz, 3H), 6.53 ((d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.94 (d,J= 4.4 Hz,1H), 4.90 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 1H), 4.18 (d,J= 14.1 Hz, 1H), 4.12 (d,J= 14.1 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 5.8 Hz,1H), 3.66 (d,J= 6.8 Hz, 1H), 3.64 (d,J= 5.6 Hz, 1H), 3.61 (d,J= 3.4 Hz, 1H), 3.59 (d,J= 9.1 Hz, 1H), 3.57 (d,J= 5.3 Hz,1H), 3.56 (d,J= 6.0 Hz, 1H), 3.54 (d,J= 9.2 Hz, 1H), 3.48(dd,J= 9.8, 4.1 Hz, 1H), 3.42 (d,J= 4.3 Hz, 1H), 3.32 (s, 2H),3.31 - 3.29 (m, 1H), 3.26 (s, 1H), 3.23 (t,J= 9.3 Hz, 1H), 2.17(s, 1H), 2.04 - 1.99 (m, 1H), 1.85 (d,J= 6.1 Hz, 1H)。13C NMR (126 MHz, Methanol-d4),δ: 177.21, 145.19, 141.16,134.35, 130.17, 124.27, 117.43, 75.00, 74.56, 73.26, 72.92,71.42, 70.12, 64.95, 61.12, 54.99, 53.39, 38.51, 27.29。HRMS: C23H31NO9[M+H]+，測試值466.206 9，計算值466.206 2。

井岡羥胺A 水楊酸酯 (Ⅵ)：黃色油狀液體，收率14%。1H NMR (500 MHz, Methanol-d4),δ: 7.86 (s, 1H), 7.44(s, 1H), 6.89 (dd,J= 7.2, 3.8 Hz, 1H), 6.87 - 6.84 (m, 1H),5.93 (d,J= 14.7 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 4.45 (s,2H), 4.23 (d,J= 5.1 Hz, 1H), 4.16 (s, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.10(s, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.93 (dJ= 4.9 Hz, 2H), 3.83 (s, 1H), 3.64 -3.61 (m, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.52 (s, 1H), 3.45 (d,J= 6.7 Hz,2H), 3.04 (s, 1H), 2.24 - 2.19 (m, 1H), 1.80 (s, 2H), 1.51 -1.47 (m, 1H)。13C NMR (126 MHz, Methanol-d4),δ: 170.23,164.06, 141.65, 134.19, 133.24, 126.13, 119.02, 112.90,112.49, 73.68, 73.47, 73.09, 71.14 70.05, 69.78, 65.72, 61.84,56.11, 55.93, 37.07, 25.75。HRMS: C21H29NO10[M+H]+，測試值456.186 0，計算值456.186 4。

井岡羥胺A 阿魏酸酯 (Ⅶ)：黃色油狀液體，收率12%。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6),δ: 7.69 (d,J= 14.2 Hz,1H), 7.22 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.95 - 6.88 (m, 1H), 6.87 -6.76 (m, 1H), 6.41 (d,J= 12.5 Hz, 1H), 6.01 - 5.95 (m, 1H),4.77 (d,J= 7.3 Hz, 1H), 4.74 (d,J= 12.1 Hz, 1H), 4.72 - 4.69(m, 1H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.29 - 4.25 (m, 1H), 4.21 (s,1H), 4.19 (s, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.96(s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 2H), 3.65 - 3.60 (m, 2H), 3.57 (s,1H), 3.52 (s, 1H), 3.51 (s, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.25 - 2.17 (m,1H), 1.88 (s, 1H), 1.64 (s, 1H)。13C NMR (126 MHz,Methanol-d4),δ: 177.36, 147.11, 145.55, 144.14, 140.29,127.19, 125.73, 124.87, 120.03, 115.06, 75.14, 73.68, 73.13,71.57, 71.01, 69,89, 63.32, 61.92, 55.36, 55.08, 52.87, 38.52,25.24。HRMS: C24H33NO11[M+H]+，測試值512.213 1，計算值512.212 6。

井岡羥胺A11-馬來酰亞胺十一酸酯 (Ⅷ)：褐色油狀液體，收率52%。1H NMR (500 MHz, Methanol-d4),δ: 6.14 -5.75 (m, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.51 (s, 1H),4.29 (t,J= 6.7 Hz, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 4.02(q,J= 7.0 Hz, 1H), 3.99 - 3.93 (m, 1H), 3.91 - 3.84 (m, 1H),3.78 (s, 1H), 3.70 - 3.61 (m, 2H), 3.61 - 3.57 (m, 2H), 3.50 (s,1H), 3.48 - 3.47 (m, 2H), 3.35 - 3.22 (m, 3H), 3.05 - 2.94 (m,1H), 2.66 - 2.50 (m, 4H), 2.40 - 2.21 (m, 2H), 2.16 - 2.01 (m,1H), 1.92 (s, 1H), 1.65 - 1.52 (m, 5H), 1.33 - 1.23 (m, 12H)。13C NMR (126 MHz, Methanol-d4),δ: 177.08, 173.55, 141.25,124.61, 75.03, 73.80, 73.13, 71.55, 71.08, 70.65, 65.28, 64.36,54.67, 52.68, 38.99, 37.52, 34.08, 29.11, 28.93, 28.71, 28.15,28.03, 24.96, 24.93。HRMS: C29H48N2O11[M+H]+，測試值601.329 4，計算值601.329 2。

井岡羥胺A 環丙烷羧酸酯 (Ⅸ)：淡黃色油狀液體，收率48%。1H NMR (500 MHz, Methanol-d4),δ: 5.73 (m, 1H),4.63 (dd,J= 9.2, 6.2 Hz, 2H), 4.56 (d,J= 5.9 Hz, 1H), 4.36(d,J= 5.5 Hz, 1H), 4.27 - 4.19 (m, 3H), 4.19 - 4.05 (m, 3H),4.00 (s 1H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.72 - 3.60 (m, 4H), 3.59 -3.43 (m, 3H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.20 (d,J=6.4 Hz, 1H),1.97 - 1.84 (m, 2H), 1.66 (d,J= 3.9 Hz, 1H), 1.14 - 1.01 (m,2H), 1.01 - 0.89 (m, 2H)。13C NMR (126 MHz, Methanol-d4),δ: 173.61, 141.93, 125.11, 74.89, 74.50, 74.16, 73.92, 72.30,71.03, 67.99, 63.96, 56.68, 55.33, 37.25, 25.71, 13.24, 9.36。HRMS: C18H29NO9[M+H]+，測試值404.185 1，計算值404.185 6。

1.3 生物活性測試

1.3.1 抑菌活性 立枯絲核菌Rhizoctonia solani和油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum，分別由浙江大學和浙江省農業科學院提供。

采用菌絲生長速率法[18]測定化合物Ⅰ ～Ⅸ 對植物病原真菌的抑制活性，藥劑質量濃度為200、100、50、25、12.5 和6.25 μmol/L。將目標化合物用5 mL 含0.1% Tween-80 的無菌水溶解，加入熱培養基中，配制成含藥培養基。在含藥培養基上接入菌餅，每個藥劑設置3 次重復。置于生化培養箱 (溫度23 ℃) 中培養，待空白對照菌落長至培養皿2/3 直徑時，測定處理組菌落直徑，并按 (1)式計算抑制率。采用SPSS 軟件計算EC50值和95%置信區間。

式中：I—菌絲生長抑制率，%；D0—空白對照菌落直徑，mm；Dt—藥劑處理菌落直徑，mm。

1.3.2 殺蟲活性 豆蚜Aphis craccivora，由浙江省農業科學院提供。

采用浸葉法[19]測定目標化合物對豆蚜的殺蟲活性。準確稱取待測化合物50 mg，用正丙醇溶解并配制成質量濃度為500 mg/L 的藥液。將感染蚜蟲的蠶豆葉片浸入藥液中10 s，取出懸掛10～20 min 風干水分后，置于帶有濕濾紙片的培養皿中，每個處理設置3 個重復。于23～25 ℃室內培養，相對濕度65%，24 h 后統計結果。以井岡羥胺A 與井岡霉素A 為陽性對照，正丙醇為陰性對照，另設空白對照 (CK)。以毛筆撥動蟲體無反應記為死亡，當CK 死亡率大于10%時判定試驗無效。

分別按 (2)、(3) 式計算死亡率 (M) 和校正死亡率 (Ma)。

式中：N1—豆蚜死亡數；N2—豆蚜總數；M1—施藥組死亡率，%；M2—空白組死亡率，%。

2 結果與討論

2.1 目標化合物的合成

在合成化合物之前，通過制備井岡羥胺A-叔丁醇飽和溶液將反應液中井岡羥胺A 的質量濃度由5.5 g/L 提高至8.2 g/L，有利于提高酶催化反應速率。有研究表明，在脂肪酶催化糖酯合成研究中，提高酰基供體的濃度能夠促進反應的進行[20-21]。Yan 等[22]研究了糖酯合成過程中底物物質的量之比對產率的影響，發現過量的?；w對提高糖酯的產率有較大作用。本研究通過對多個反應條件的探索，最終確定反應溫度為60 ℃，底物n(井岡羥胺A) :n(有機酸) = 1 : 4，分子篩質量濃度為30 g/L，脂肪酶質量濃度為3 g/L。當以酚酸作為酰基供體時，反應時間需延長至7 d 后才檢測到少量產物的生成，這與文獻報道的由Novozym 435 催化水楊酸酯的合成效率相似[23-25]，可能是由于水楊酸苯環上的羥基對脂肪酶具有一定抑制效應[26]。Novozym 435 作為催化劑在合成多元醇酯化物時具有區域選擇性。例如：在催化合成海藻糖二酯時，其酯化位點在兩個伯羥基[27]，在催化葡萄糖與脂肪酸的酯化反應中，其酯化位點同樣在6 位的伯羥基[28-29]。本研究以Novozym 435 為催化劑合成井岡羥胺A 酯類衍生物，反應過程簡單，選擇性高，產物單一有利于分離純化，并且反應用到的脂肪酶、分子篩、叔丁醇均能夠回收再利用，符合可持續發展理念。

2.2 化合物的核磁數據分析

以目標化合物 Ⅳ 的結構 (圖式3) 為例。其與井岡羥胺A 的1H NMR 譜及13C NMR 譜的信號歸屬如表1 所示。高分辨質譜顯示分子中只增加了一個酰基，說明產物為井岡羥胺A 的一酰基化產物；通過比較原料和產物的1H NMR 譜發現，酯化后井岡羥胺A 在δ1.70 處的多重峰向低場移動至δ2.00，這是5 位質子受吸電子基團的誘導效應所致，而比較13C NMR 譜發現，井岡羥胺A 中δ63.06 向低場移動至δ65.33，這是7 位碳受吸電子基團的誘導效應所致，δ38.86 向高場移動至δ36.33，這是6 位碳受γ-效應所致。根據這些結果初步說明酶催化酯化反應區域選擇性發生在7 位。進一步分析發現，7 位伯碳上質子的化學位移向低場移動到δ4.18 和4.00。化合物IV 的二維譜圖遠程異核化學位移相關譜 (HMBC，圖1) 顯示，7 位伯碳上的質子 (δ4.18 和4.00) 與δ172.75的羰基碳存在遠程相關，因此，確定井岡羥胺A 酯化物的酯化位點發生在7 位伯羥基。

表1 化合物 Ⅳ 與井岡羥胺A 的核磁數據分析Table 1 NMR data analysis of compound Ⅳ and validoxylamine A

2.3 對立枯絲核菌和油菜菌核病菌的抑菌活性

目標化合物對立枯絲核菌的抑制作用見表2。除化合物 Ⅱ、Ⅳ、Ⅸ 外，其余化合物在200 μmol/L下對立枯絲核菌的抑制率均大于50%，其中化合物Ⅰ和 Ⅲ 的抑制率分別為71.22%和73.48%。在測定化合物的EC50值時發現，化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅷ表現出優于先導化合物井岡羥胺A 的抑菌活性。初步構效關系分析結果表明：直鏈有機酸作為?；w有利于提高目標化合物的抑菌活性，尤其是低濃度下還能保持較高的抑菌活性 (EC50值：井岡霉素A ＜ Ⅰ ＜ Ⅷ ＜ Ⅲ ＜ 井岡羥胺A ＜ Ⅴ ＜ Ⅵ ＜Ⅱ ＜ Ⅶ ＜ Ⅸ ＜ Ⅳ)；苯環上取代基的電負性增強有利于提高化合物的抑菌活性 (EC50值：Ⅱ ＜ Ⅲ)，推測是由于鹵素作為親脂基團，能夠改善膜透過性，從而增強了化合物的抑菌活性[30]；此外，烷烴鏈上的雙鍵對化合物的抑菌活性具有促進作用(EC50值：Ⅴ ＜ Ⅳ)。

表2 井岡羥胺A 酯類衍生物對立枯絲核菌的抑制作用及EC50 值Table 2 Inhibition and EC50 values of validoxylamine A ester derivatives on R. solani

目標化合物對油菜菌核病菌的抑制活性如圖2所示。在200 μmol/L 下，先導化合物井岡羥胺A并未表現出較高的抑制活性，而通過酯化反應引入不同?；w的衍生物卻有部分表現出了更強的抑菌活性，如目標化合物 Ⅲ、Ⅷ 對油菜菌核病菌的抑制率比井岡霉素A 提高了1.5 倍。表明通過對井岡羥胺A 進行衍生化反應，能夠拓寬其抗菌譜，有利于開發以井岡羥胺A 為先導化合物的殺菌劑。

2.4 對豆蚜的殺蟲活性

如圖3 所示，在500 mg/L 下，井岡羥胺A 與井岡霉素A 對豆蚜的校正死亡率分別為7.71%和32.74%，除了目標化合物Ⅰ和 Ⅸ外，其余化合物的殺蟲活性相對于井岡羥胺A 都得到了提高，其中化合物 Ⅶ 的校正死亡率最高，為64.60%。

初步構效關系研究表明，當以碳鏈長度過大的有機酸 (化合物Ⅰ) 作為?；w時，由于空間位阻增大，削弱了相應衍生物的殺蟲活性，而烷基鏈上的雙鍵對衍生物的殺蟲活性具有促進作用(校正死亡率：Ⅳ ＜ Ⅴ)；此外，苯環上鹵素的電負性越強，殺蟲活性越弱；甲氧基團 (化合物 Ⅶ) 對酯化產物的殺蟲活性有著顯著的增強作用。

3 結論

井岡羥胺A 為生物農藥活性中心，利用脂肪酶法可選擇性地對其進行酯化，獲得系列新型化合物。本研究以井岡羥胺A 為先導化合物，經脂肪酶催化合成了9 種未見文獻報道的井岡羥胺A酯類衍生物。抑菌活性研究表明，所有化合物對立枯絲核菌都表現出一定的抑制活性，其中化合物物Ⅰ、Ⅲ、Ⅷ 的EC50值分別為13.03、34.62和27.69 μmol/L，并且化合物 Ⅲ和 Ⅷ 在200 μmol/L下對油菜菌核病菌的抑制率分別為29.88% 和28.71%，優于井岡羥胺A。此外，對井岡羥胺A的結構進行修飾，還能增強其對蚜蟲的殺蟲活性，目標化合物 Ⅶ 在500 mg/L 下對蚜蟲的致死率為64.60%。本研究為新型井岡羥胺A 酯類衍生物的設計和構效關系提供了新思路。