血清miR-141-3p、IL-35、IL-10聯(lián)合診斷前列腺癌的價(jià)值

張 勇，劉劍新，田長海，韓孝洲，劉 旺，于 澎，邱 瑾，鄢 陽

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院泌尿外科，上海 200082;2.同濟(jì)大學(xué)附屬上海第十人民醫(yī)院泌尿外科，上海 200072

前列腺癌是出現(xiàn)在前列腺的上皮性惡性腫瘤，是目前泌尿內(nèi)科中男性較為常見的癌癥之一，并且其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高[1]。前列腺癌是一種進(jìn)展較為緩慢的癌癥，在早期并不會(huì)出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，逐漸發(fā)展至中后期時(shí)，患者可出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛、腰痛、排尿困難等癥狀[2]。早期前列腺癌是能夠治愈的，但是隨著病情的加重，到達(dá)中晚期時(shí)，治療效果和預(yù)后效果極差。因此對于前列腺癌的早期篩查與診斷是極為重要的[3]。目前臨床上對于前列腺癌的篩查主要是前列腺特異性抗原，但是其特異度較低，所以需要尋找更加有效的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。血清微小RNA-141-3p(miR-141-3p)是一種成熟的miRNA，有研究表示，miR-141-5p在前列腺癌組織內(nèi)表達(dá)會(huì)上調(diào)，但對于miR-141-3p的研究較少[4]。白細(xì)胞介素-35(IL-35)是一種新型炎性因子，能夠介導(dǎo)免疫逃逸并促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，還能夠影響其他細(xì)胞因子的分泌，進(jìn)而參與到腫瘤的發(fā)展當(dāng)中[5]。有研究表示，前列腺癌患者體內(nèi)IL-10會(huì)存在不同程度的改變[6]。所以本研究選取2017年9月至2020年9月上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(下稱本院)疑似前列腺癌患者181例以及同期體檢的健康人群91例的臨床資料進(jìn)行分析，研究血清miR-141-3p、IL-35、IL-10聯(lián)合診斷前列腺癌的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月至2020年9月本院收治的疑似前列腺癌患者181例作為實(shí)驗(yàn)組，另選取同期健康體檢人群91例作為對照組。其中實(shí)驗(yàn)組年齡45～72歲，平均(56.24±10.14)歲，體質(zhì)量55～68 kg，平均體質(zhì)量(60.54±3.05)kg，對照組年齡45～71歲，平均(56.08±10.23)歲，體質(zhì)量55～68 kg，平均體質(zhì)量(60.98±3.89)kg。實(shí)驗(yàn)組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者年齡>18歲；(2)患者精神意志正常；(3)患者能夠接受血清miR-141-3p、IL-35、IL-10檢測；(4)患者資料完整。實(shí)驗(yàn)組排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者年齡<18歲；(2)患者存在心肌梗死、腦梗死等重大疾病；(3)患者存在心、肺、腎等重要器官障礙；(4)患者存在嚴(yán)重凝血功能障礙；(5)患者中途死亡或退出。兩組患者年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究所有患者及其家屬知情且簽署知情同意書，本研究已經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 患者入院后均進(jìn)行細(xì)胞穿刺活檢，通過組織病理學(xué)確診為前列腺癌患者82例，均符合《前列腺癌臨床診療學(xué)》[7]中前列腺癌病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)；其余99例患者診斷為良性前列腺病變：硬化性腺病21例、腎源性腺瘤32例、基底細(xì)胞增生18例、前列腺硬化19例、不典型性腺瘤樣增生9例，均符合《前列腺診斷病理學(xué)》[8]中診斷標(biāo)準(zhǔn)。IL-35、IL-10檢測方法：抽取患者空腹靜脈全血3.5 mL，高速離心分層，分離血清，送至檢驗(yàn)科，IL-35選取上海晶抗生物工程有限公司的人IL-35酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒采用夾心法；IL-10選取上海酶聯(lián)生物科技有限公司的IL-10 ELISA試劑盒，采用固相夾心法進(jìn)行檢測。IL-35前列腺癌陽性標(biāo)準(zhǔn)：>135.10 pg/mL，前列腺良性增生陽性標(biāo)準(zhǔn)：>48.93 pg/mL；IL-10前列腺癌陽性標(biāo)準(zhǔn)：>124.89 pg/mL，前列腺良性增生陽性標(biāo)準(zhǔn)：>45.11(pg/mL)。miR-141-3p檢測方法：抽取患者空腹靜脈血3.5 mL，采用Invitrogen公司的miRNA試劑盒對RNA總量進(jìn)行提取，測量RNA濃度，采用實(shí)時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，選取Ribo Bio公司的anti-miR-NC核苷酸，參考Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染視野，轉(zhuǎn)染效率以熒光顯微鏡計(jì)算熒光素所標(biāo)記的細(xì)胞百分比。miR-141-3p前列腺癌陽性標(biāo)準(zhǔn)：>54.96%，前列腺良性增生陽性標(biāo)準(zhǔn)：>13.40%。

1.3觀察指標(biāo) 對比3組患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10；檢測前列腺癌組血清miR-141-3p、IL-35、IL-10陽性檢出率，繪制曲線下面積(AUC)分析血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合前列腺癌與良性前列腺病變檢測的診斷價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.13組患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10比較 相比于對照組，前列腺癌組和良性前列腺病變組血清miR-141-3p、IL-35、IL-10水平顯著更高；相比于良性前列腺病變組，前列腺癌組血清miR-141-3p、IL-35、IL-10顯著更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10對比

2.2前列腺癌組血清miR-141-3p、IL-35、IL-10陽性檢出率 miR-141-3p診斷前列腺癌陽性率91.46%(75/82)；IL-35診斷前列腺癌陽性率87.80%(72/82)；IL-10診斷前列腺癌陽性率85.36%(70/82)。見表2。

表2 前列腺癌組血清miR-141-3p、IL-35、IL-10陽性檢出率(n)

2.3血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合前列腺癌與良性前列腺病變檢測的診斷價(jià)值分析 從各個(gè)指標(biāo)的檢測結(jié)果分析，三者聯(lián)合檢測明顯優(yōu)于單個(gè)檢測的診斷效率，三者聯(lián)合檢測前列腺癌的靈敏度為96.30%、特異度為95.30%，AUC為0.975。三者聯(lián)合檢測良性前列腺病變的靈敏度為41.40%、特異度為87.90%，AUC為0.620。見表3、4。見圖1、2。

表3 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合診斷前列腺癌診斷價(jià)值分析

圖1 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合檢測前列腺癌ROC曲線

表4 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合診斷良性前列腺病變診斷價(jià)值分析

圖2 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量聯(lián)合檢測良性前列腺病變ROC曲線

3 討 論

前列腺癌是發(fā)生于前列腺上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，主要以前列腺腺泡異常并且出現(xiàn)異常生長為特征的病理性改變[9-10]。前列腺癌的發(fā)病率隨著男性年齡升高而增加，所以對于前列腺癌的早期診斷與篩查較為重要。近年來，前列腺癌的早期敏感血清學(xué)指標(biāo)是臨床上研究的重點(diǎn)[11-13]。

miRNA是近年來新發(fā)現(xiàn)的單鏈小分子RNA，往往在轉(zhuǎn)錄后對基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。miRNAs能夠與靶miRNA的3端非翻譯區(qū)進(jìn)行不完全的互補(bǔ)配對，以達(dá)到抑制基因表達(dá)，在細(xì)胞的生長發(fā)育、凋亡分化當(dāng)中起到重要的作用[14]。miR-141屬于miR-200的一種，是人類的12號(hào)染色體，在腫瘤組織內(nèi)容易出現(xiàn)突變、染色體缺失以及易位等[15]。有研究表明，miR-141在前列腺癌組織內(nèi)表達(dá)上升，同時(shí)在前列腺癌患者血清內(nèi)也能夠檢查到[16]。miR-141-3p是miRNA-141剪切后生成的成熟產(chǎn)物，能夠靶向表皮生長因子受體進(jìn)而對游途徑蛋白進(jìn)而對骨肉瘤細(xì)胞的生長與轉(zhuǎn)移進(jìn)行抑制。本研究表明，與對照組比較，前列腺癌組和良性前列腺病變組血清miR-141-3p水平顯著更高；與良性前列腺病變組比較，前列腺癌組血清miR-141-3p顯著更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明，前列腺癌患者體內(nèi)miR-141-3p水平會(huì)顯著提高，而在良性前列腺病變當(dāng)中也會(huì)有所提高。本研究結(jié)果表示，miR-141-3p診斷前列腺癌陽性率91.46%(75/82)。說明，miR-141-3p對于前列腺癌的診斷價(jià)值較高。miR-141-3p在前列腺癌中表達(dá)提高，對KLF9的表達(dá)進(jìn)行抑制從而促進(jìn)前列腺癌的增殖與分化[17]。IL-35是一新的趨化因子，已被證實(shí)在肺癌、胰腺癌和咽癌當(dāng)中發(fā)揮著作用。IL-35是通過人體特殊的信號(hào)通路與T細(xì)胞表面的受體相結(jié)合，進(jìn)而分泌新的免疫細(xì)胞。本研究結(jié)果表示，相比于對照組，前列腺癌組和良性前列腺病變組血清IL-35水平顯著更高；相比于良性前列腺病變組，前列腺癌組血清IL-35顯著更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明IL-35是能夠作為篩查前列腺疾病的血清指標(biāo)，尤其是前列腺癌最為敏感。本研究結(jié)果表示，IL-35診斷前列腺癌陽性率陽性率為87.80%(72/82)。因?yàn)镮L-35是屬于IL-12的一種，是由T淋巴細(xì)胞分泌而成，所以IL-35是能夠被當(dāng)做腫瘤免疫的首要因子[18]。IL-10是一種Th2類因子，是人類免疫反應(yīng)中較為重要的炎癥抑制細(xì)胞因子的一種，主要由單核巨噬細(xì)胞分泌，同時(shí)又主要作用于單核巨噬細(xì)胞[19]。本研究表示，與對照組比較，前列腺癌組和良性前列腺病變組血清IL-10水平顯著更高；與良性前列腺病變組比較，前列腺癌組血清IL-10顯著更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有研究報(bào)道，惡性腫瘤能夠促使患者自身合成并分泌免疫抑制因子，使Th1逐漸傾向于Th2型免疫，進(jìn)而使IL-10劇烈升高[20]。本研究結(jié)果表示，IL-10對前列腺癌的檢出率為85.36%(70/82)。說明IL-10對于前列腺癌的診斷價(jià)值較高。本研究結(jié)果表示，3個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測明顯優(yōu)于單個(gè)檢測的檢出率，3個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測前列腺癌的靈敏度、特異度，AUC線下面積均顯著高于聯(lián)合檢測良性前列腺病變。說明，3種指標(biāo)的聯(lián)合檢測適用于前列腺腫瘤的檢測。

綜上所述，血清miR-141-3p、IL-35、IL-10聯(lián)合診斷前列腺癌的靈敏度、特異度均較高，適合臨床上對于前列腺癌的早期診斷。