呼吸道九聯檢聯合IL-6、IFN -γ測定在兒科支氣管肺炎中的應用

高海兵，牛彩紅，趙志宏，霍小琴，畢宇

（山西省陽泉市第一人民醫院，山西 陽泉 045000）

0 引言

支氣管肺炎是累及支氣管壁和肺泡的炎癥，為兒童時期最常見的肺炎，2歲以內兒童多發。一年四季均可發病，北方多發生于冬春寒冷季節及氣候驟變時。兒童因年齡因素造成溝通困難，加之病情變化速度快，而且由于兒童自身免疫系統的不完善及嬰幼兒的早期免疫特點，過早過度使用抗生素會對兒童免疫系統造成不必要的損傷，所以快速、準確判斷感染類型應對兒科上呼吸道感染性尤其重要。隨著醫療水平的發展與提升，呼吸道病原體九聯檢、細胞因子測定逐漸應用于該病癥的檢測中，本文對我院兒科85例支氣管肺炎病例的呼吸九聯檢和細胞因子檢測進行回顧性分析，以期得到對感染的早期鑒別。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2019年10月至2020年12月在我院兒科收治的診斷為支氣管肺炎患兒85例作為觀察組，男46例，女39例，年齡0.5-10歲，平均（6.42±1.94）歲。診斷標準以臨床有發熱、咳嗽、呼吸急促的癥狀。肺部聽診聞及中、細濕啰音和（或）胸部影像學有肺炎的改變可診斷為支氣管肺炎。對照組為同期健康體檢兒童30例，男15例，女15例，年齡1-10歲，平均年齡（6.35±2.02）歲，近期無感染病史、無過敏及免疫相關疾病，兩組年齡的差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

呼吸九聯檢采用間接免疫熒光法，西班牙VIRCELL.S.L.公司九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒，OLYMPUS-BX41型熒光顯微鏡；細胞因子檢測采用美國貝克曼公司FC-500流式細胞分析儀，運用流式熒光法，使用江西賽基生物技術有限公司TH1/TH2/TH17亞群檢測配套試劑。

1.2.2 分析方法

早晨空腹靜脈采集血液6mL，分別加入2支分離膠試管中，靜置20 min，1620g離心15min，取血清檢測，如不能立即檢測，保存于-20℃冰箱中，檢測前解凍（不可反復凍融）。將血清按說明書稀釋后加入熒光片中，孵育，洗滌，加熒光二抗，封片，在熒光顯微鏡下觀察，綠色熒光細胞為陽性細胞，200倍下每個視野＞5個陽性細胞為標本陽性，以此判斷肺炎衣原體（CP）IgM抗體、肺炎支原體（MP）IgM抗體、嗜肺軍團菌（LP）IgM抗體、腺病毒（ADV）IgM抗體、Q熱立克次體（COX）IgM抗體、人呼吸道合胞病毒（HRSV）IgM抗體、A型流感病毒（AIV）IgM抗體、B型流感病毒（BIV）IgM抗體、人副流感病毒（HPIV）IgM抗體是否陽性。吸取血清25ul加入試管中，加入離心后配制的捕獲微球25ul、熒光抗體25ul混勻，避光孵育2.5h后，加入1mL生理鹽水，200g5分鐘離心，棄去上清液，加入3mL生理鹽水，上機檢測細胞因子，在流式細胞儀測定出熒光強度，利用美國BD公司FCAP Array分析軟件中得出細胞因子白介素6（IL-6）、干擾素γ（IFN -γ）含量。

1.3 觀察指標

呼吸道九種病原體抗體至少有一種陽性表達即為陽性。IL-6按試劑盒說明推薦陽性臨檢值為20pg/mL,所以設＞20pg/mL為陽性；IFN -γ按試劑盒說明推薦陽性臨檢值為17.3pg/mL,所 以 設＞17.3pg/mL為 陽 性，IL-6和/或IFN -γ有一種陽性表達即為陽性。

1.4 統計學方法

計數資料采用以例數百分比(%)表示，組間比較用c2和Fisher精確概率法分析，P＜0.05差異有統計學意義，P＜0.01差異有顯著統計學意義。

2 結果

觀察組85例（由于存在雙重或多重混合感染，表中例數和占比存在重復計數）患兒中，7例呼吸九聯檢陰性，占8.2%；陽性結果中占比最高為肺炎支原體抗體，占44.7%，其次為B型流感病毒抗體，占42.4%，最少為嗜肺軍團菌抗體，未測出。見表1。

表1 85例支氣管炎呼吸九聯檢占比

單純檢測呼吸九聯檢敏感度為91.76%，特異度為76.67，正確率為87.83%；單純檢測IL-6+IFN-γ敏感度為83.53%，特異度為96.67，正確率為86.96% ；聯合檢測敏感度97.65%、特異度76.67%、正確率92.17%。見表2、表3。

在85例支氣管肺炎患兒中，有34例進行了≥3次IL-6+IFN-γ檢測,將其分為重癥組（11例）和普通組（23例），標準參照支氣管肺炎診療規范，重癥組為支氣管肺炎患者病情危重，表現為除呼吸系統改變外，還包括循環、神經、消化等系統功能障礙；普通組為支氣管肺炎主要癥狀患者。按其中一項或兩項檢測連續升高即為上升趨勢，連續下降即為下降趨勢。重癥組11例中9例呈上升趨勢，2例無規律，無下降趨勢；普通組中17例呈下降趨勢，1例呈升高趨勢，5例無規律，兩組比較P＜0.01,差異有顯著統計學意義。見表4。

表2 呼吸道九聯檢、IL-6+IFN-γ與臨床診斷比較（例）

表3 呼吸道九聯檢、IL-6+IFN-γ、聯合檢測指標比較

表4 34例支氣管肺炎 IL6 + IFN-γ檢測結果

3 討論

小兒支氣管肺炎是累及支氣管壁和肺泡的炎癥，為兒童時期最常見的肺炎，2歲以內兒童多發，一年四季均可發病，主要由各種病原體引起，常見為支原體、病毒、細菌、衣原體等感染，發病后會引發機體內多種細胞因子升高，而導致免疫功能下降，不利于患兒的健康成長[1]。另外由于小兒支氣管管腔狹窄，肺彈力組織發育差，發病后分泌物會增多，阻塞肺部，導致通氣功能受限，引起呼吸困難、氣促等癥狀[2-3]，易造成肺功能障礙。支氣管肺炎感染診斷的金標準為病原體培養，但由于兒童取樣困難，易感菌較多、培養陽性率低、時間長、特殊病原體普通醫院不易開展，具有一定的漏診、誤診率[4-5]等因素，嚴重制約該疾病的早期診斷與治療。呼吸九聯檢為測定血清中病原體IgM抗體，通常在感染后1～2周出現，2～4周達高峰，是急性感染早期敏感的生物學指標。IL-6、IFN-γ是TH1/TH2細胞分泌介導細胞免疫和體液免疫應答效應的促炎因子，IL-6可促進T、B淋巴細胞的增殖分化，是輔助診斷細菌感染的有效指標；IFN-γ可激活巨噬細胞，具有抗病毒及促進主要組織相容復合體分子表達和抗原提呈作用，是病毒感染的輔助診斷指標。IL-6和/或IFN-γ升高提示機體存在炎癥反應。

本研究發現觀察組85例支氣管肺炎患兒呼吸九聯檢肺炎支原體感染占比最高，達44.7%，依次為B型流感病毒、人副流感病毒、A型流感病毒、腺病毒、人呼吸道合胞病毒、肺炎衣原體、Q熱立克次體、嗜肺軍團菌，與賈紅麗、王鳳美[6-7]研究相一致，說明支氣管肺炎患兒肺炎支原體感染最高，其次為B型流感病毒。觀察組中有7例呈陰性，占8.2%，分析原因為呼吸道九聯檢均檢測病原體IgM抗體，其在感染2～4周內達到峰值，當在峰值前或峰值后檢測時，由于抗體濃度較低或者檢測試劑靈敏度低、檢測下限較高等所致。所以這與患兒感染后出現IgM的時間段和采血時間節點、試劑等相關，提示檢測時，應在發病后2～4周內采血分析，并注意試劑質量，避免出現假陰性現象。

對支氣管肺炎患兒單純使用呼吸九聯檢檢測,其敏感度為91.76%，特異度為76.67%,正確率為87.83%。IL-6+IFN-γ檢測敏感度為83.53%，特異度為96.67，正確率為86.96%。兩者相比呼吸九聯檢敏感度大于IL-6+IFN-γ檢測，這是由于IL-6主要對細菌感染敏感，而IFN-γ對病毒感染敏感，對支原體、衣原體等病原菌敏感性較差原因。但特異度呼吸九聯檢遠低于IL-6+IFN-γ檢測。提示臨床在支氣管肺炎輔助診斷時，呼吸九聯檢優于IL-6 + IFN-γ檢測，但誤診率高于IL-6 + IFN-γ檢測。篩查時IL-6 + IFN-γ檢測優于呼吸九聯檢。兩者聯合檢測其敏感度和正確率分別達97.65%、92.17%，高于周燕等[8]研究的呼吸九聯檢與痰培養聯合檢測。三種檢測方法比較敏感度P＜0.01,特異度P＜0.05,差異有統計學意義,但正確度差異無統計學意義。提示呼吸九聯檢、IL-6+IFN-γ聯合檢測可有效提高支氣管肺炎患兒病原菌感染類型的準確度，對疾病診斷具有良好的指導意義，但特異度欠佳，三種方法比較，正確度無差異。

研究結果顯示，支氣管肺炎重癥組有9例IL-6+IFN-γ檢測呈上升趨勢，占重癥組81.8%,普通組有17例呈下降趨勢，占73.9%。經統計學分析IL6+IFN-γ檢測呈上升趨勢變化者重癥率明顯高于下降趨勢者。提示支氣管肺炎時，IL-6或/和IFN-γ升高，病情有加重傾向，而IL-6或/和IFN-γ下降時，病情減輕或轉歸。

綜上所述，呼吸道九聯檢聯合IL-6、IFN -γ測定在支氣管肺炎鑒別診斷中有重要意義，有助于臨床醫生全面分析病原菌類型，判斷疾病嚴重程度，指導醫生及早干預，為臨床對該病的研究、治療、預后提供客觀的參考依據。