CLIA法在AFP檢驗中的診斷價值及準確性分析

農三妹

（廣西壯族自治區田東縣中醫醫院，廣西 百色 531500）

0 引言

甲胎蛋白（AFP）是國外學者Ahelev發現的，隨著研究的深入臨床上逐漸認識到原發性肝癌（PHC）患者可見明顯得血清AFP水平上升現象，并認識到AFP在PHC患者的檢測中能夠發揮積極參考價值，為該病的重要標志物之一[1-3]。既往臨床上通常采用酶聯免疫法來檢測患者血清AFP水平，隨著檢驗醫學的發展，化學發光免疫法逐漸被應用于血清AFP的檢測中，同時依靠其檢測準確度高、檢測速度快、重現性好、安全性高等特點而得到眾多醫患人員的認可[4]?；诖耍瑸楦玫牧私狻⑻骄炕瘜W發光免疫法在血清AFP檢驗中的價值，我院對收治的60例受檢者進行了分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

取2020年1月到2020年10月期間在我院就診的60例原發性肝癌（PHC）患者為受檢者；患者均知曉研究內容，簽署知情同意書；患者臨床資料完整；患者均經檢查確診為原發性肝癌；排除不同意參與研究者，排除伴有精神疾病配合度不佳者；排除合并有其他嚴重臟器疾病者。

將患者隨機分為兩組，30例為放射免疫組，其中男性病患18例，女性病患12例，年齡最小36歲，最大55歲，平均（44.3±3.0）歲；30例為化學發光組，其中男19例，女11例，年齡最小35歲，最大57歲，平均（44.7±3.2）歲；兩組一般資料具有同質性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

所有受檢者均取周靜脈血，行血清分離后，取血清置于-20℃的冰箱內保存待檢。酶聯免疫組以酶聯免疫法檢測，儀器選用廣東固康生物科技有限公司提供的ST-360酶標儀及陪到試劑進行檢測；化學發光組以化學發光免疫法進行檢測，儀器選用京中西遠大科技有限公司提供的KL1- e411 型全自動電化學發光儀和配套試劑；兩種檢測方式均嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2 具體檢測方法

分析比較化學發光免疫法與酶聯免疫法在線性關系、回收率、靈敏度等方面的情況；線性試驗操作時取不同濃度的標準液進行，標準液濃度分別設置為每升12.5μg、25.0μg、50.0μg、100.0μg、200.0μg、400.0μg、800.0μg；稀釋后實施檢測，行線性回歸分析。

回收實驗操作時分別在已知濃度的血清中加入3.0ng/mL、18.6ng/mL、26.7ng/mL、35.0ng/mL等不同濃度的AFP，然后分別開展CLIA與AFP檢測，對回收率進行計算。以CLIA與AFP分別行受檢血清標準定量分析，并開展不同濃度質控品（低、中、高）的靈敏度試驗，分析CLIA與AFP對批內、批間的靈敏度。

1.3 統計學分析

數據以SPSS 20.0處理，對定量、分類資料行t與c2檢驗，并開展相關及回歸分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 線性實驗

對不同濃度的標準稀釋檢測后，顯示CLIA與ELISA檢測分別在（12.5-800）ng/mL及（12.5-450）ng/mL范圍內呈良好線性關系。

2.2 回收實驗

以CLIA與ELISA兩種方式對不同濃度的混合血清行回收實驗顯示CLIA回收率為91.3%-109.0%，平均回收率為97.6%；ELISA的回收率為90.5%-109.2%，平均回收率為95.3%，平均回收率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 靈敏度實驗

對不同水平質控品開展靈敏度實驗結果顯示批內、批間CV值均低于6%，且CLIA各CV值均低于ELISA（P＜0.05），見表1。

表1 靈敏度實驗

3 討論

原發性肝癌屬于臨床上發生率較高的一種惡性腫瘤疾病，我國原發性干死的發生率、死亡率均非常高[5]。有數據顯示[6-7]，我國肝癌患者人數占據了全球范圍內的55%左右，其危害已經不容忽視。AFP屬于癌胚糖蛋白的一種，主要存在于胚胎早期血清中，在胎兒出生后通常會自動消息。然而，在原發性肝癌換則會中則可見AFP表達，且可隨肝細胞再生而呈現出升高趨勢，故而臨床上通常將其作為臨床上診斷原發性肝癌的首選血清腫瘤標志物[8]。臨床研究顯示[9]，對于原發性肝癌患者而言，早期明確診斷及治療對改善患者預后、降低患者死亡率有積極作用。

既往臨床上通常將ELISA法作為檢測AFP的常用方法，該檢測方法因具有操作簡單、用量少、敏感度高等特點而逐漸得到廣泛推廣使用。但同時該檢測方式也具有一定不足之處，ELISA法定量AFP試劑盒的線性及標準問題是影響測定結果準確性的重要因素，其測定顯色通常會隨著待檢測標本中抗原濃度的增加而升高，但升高至一定程度后，測定吸光度則會隨著抗原濃度的增加而呈現出下降狀況，直至不顯色，這一局限性極易影響檢測結果。此外，該檢測方式對與小分子抗原的敏感度也相對較低。故而，探究更為穩定、可靠的檢測方式仍然十分必要。

CLIA作為一種新型檢測方式，多被應用于血清樣品激素、蛋白質濃度檢測中，并取得了較為理想的檢測效果[12]。近年來，也逐漸被應用于原發性肝癌患者的檢測中。本研究對比了CLIA與RIA兩種檢測方法在AFP檢測中的應用價值，結果顯示CLIA與ELISA檢測分別在（12.5-800）ng/mL及（12.5-450）ng/mL范圍內呈良好線性關系，同時CLIA回收率為91.3%-109.0%，平均回收率為97.6%；ELISA的回收率為90.5%-109.2%，平均回收率為95.3%，平均回收率比較差異無統計學意義（P＞0.05）；兩種檢測方式的CV值均低于6%，且CLIA各CV值均低于RIA（P＜0.05）；提示兩種檢測方法具有較好的重復性，且CLIA對AFP檢測的靈敏度更高。其主要是由于CLIA主要是通過發光劑直接進行抗體標記的一種分類免疫法，相對于其他檢測方式而言，該檢測方式試劑的穩定性更好，且檢測期間以機器自動加樣處理，相對于手工加樣而言誤差更小、準確度更高[13]。同時本研究結果顯示CLIA檢測在AFP800ng/mL時仍可保持較好的線性關系，也提示其檢測范圍更廣，準確度性高。

綜上所述，與酶聯免疫法相比化學發光免疫法在甲胎蛋白測定中的靈敏度更高、準確度更高，有較高推廣價值。