混合系激酶區域樣蛋白與冠心病的相關性研究

徐靜，蔡芬

（廣州市中西醫結合醫院檢驗科，廣東 廣州 510800）

0 引言

隨著社會經濟的不斷發展，人們生活水平逐步提高，人口老齡化日趨嚴重，冠心病(CHD）發病率逐年遞增，且年輕化趨勢明顯。我國冠心病的平均發病率為6.5%，多見于40歲以上的中老年人，男性多于女性，腦力勞動者多于體力勞動者，城市多于農村[1]。因此，CHD早診斷、早發現和早治療顯得尤為重要。

近年來，大規模臨床試驗已證實，炎癥反應和氧化應激在冠心病的發生、發展中起著重要作用[2-4]。程序性壞死是近年來發現的一種新的死亡模式，由死亡受體介導，通常在凋亡被抑制的情況下發生，具有壞死細胞的形態學特征，引起炎癥反應加重，并釋放大量炎癥介質和損傷相關分子，參與神經退行性疾病和缺血性心血管疾病等的發生[5]。

混合系激酶區域樣蛋白（MLKL）在人體多個器官中廣泛存在，在不少腫瘤組織中，如卵巢癌[6]等呈現低表達狀態，并參與多種腫瘤的程序性壞死，干預腫瘤細胞的自噬和凋亡[7]，抑制腫瘤化療耐藥[8]。MLKL已被證明在TNF誘導的程序性壞死下游通路中起著重要作用[9]，然而國內外關于MLKL蛋白與心血管疾病的研究并不多見。C反應蛋白（CRP）是一種由肝臟合成的非特異性炎癥標志物，而心肌標志物在心血管疾病中有著重要作用。本研究檢測CHD患者血清MLKL、CRP和心肌標志物（cTnT, MYO,CK-MB,NT-ProBNP）水平，分析其相關性，旨在了解MLKL與CHD之間的關系，為CHD診斷、病變程度及預后提供新的實驗室依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年2月至2021年2月在我院心內科住院的CHD患者100例。其中AMI組30例，男22例，女8例，年齡44～78歲；UA組35例，男27例，女8例，年 齡43～78歲；SA組35例，男26例，女9例，年齡34～76歲。以上患者均排除嚴重的肝腎疾病，結締組織病、風濕性心臟病、腫瘤、血液系統疾病，曾接受經皮冠脈介入治療（PCI）,并在近一個月未服用抗炎藥及阿司匹林等NSAID。以上患者均簽署知情同意書。本研究經我院倫理委員會批準。

1.2 方法

收集各組患者的既往病史、臨床資料和輔助檢查結果。既往史包括：吸煙史、家族史、高血壓病史、糖尿病病史、PCI史、冠脈旁路移植術等；臨床資料包括：出院診斷、年齡、性別等；輔助檢查結果包括：心電圖、肝腎功能、血脂、心肌標志物等。患者入院后6h內采集靜脈血8～10mL,分離血清后在我院檢驗科使用Olympus AU5400全自動生化分析儀（日本）和ROCHE cobas601（瑞士）及配套試劑統一檢測。采用江蘇晶美生物試劑公司生產的ELISA試劑盒檢測血清MLKL水平，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學處理

數據采用SPSS 21.0進行統計分析。計數資料采用例數（%）表示，組間比較采用卡方檢驗；正態分布的計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；非正態分布的計量資料采用中位數（四分位間距）表示，多組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AMI組、SA組、UA組及正常對照組MLKL水平比較

AMI組、SA組、UA組三組的MLKL水平高于正常對照組（P均＜0.05），并且呈現AMI組＞UA組＞SA組的趨勢，見表1。

2.2 AMI組、SA組、UA組三組的cTnT, MYO, CKMB, NT-ProBNP, TCHO, TG, HDL-C, LDL-C, CRP水平的比較

cTnT, CK-MB水平在AMI組最高，在SA組最低，并且呈現AMI組＞UA組＞SA組的趨勢（P均＜0.05），MYO水平在UA組高于SA組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 各組血清MLKL水平比較(±s)

表1 各組血清MLKL水平比較(±s)

注：**P＜0.01，#表示與AMI組比較P＜0.05,△表示與SA比較P＜0.05,※表示與UA比較P＜0.05

?

表2 各組相關指標比較

3 討論

近年來，隨著人民生活水平的提高和飲食習慣的改變，冠心病的發病率呈逐年上升的趨勢，嚴重威脅人民身體健康，給社會造成極大的負擔。因此，加強CHD防控，提高CHD診治水平成為醫務人員面臨的重要任務。

冠心病的病理生理學特征為炎癥，動脈粥樣硬化（AS），血栓形成。單核細胞粘附到易發生AS部位的內皮細胞上，穿過內皮細胞層遷移到內皮下分化成巨噬細胞，攫取了氧化低密度脂蛋白而成泡沫細胞，在管壁上形成脂肪條，繼而在此基礎上形成AS斑塊[10]。MLKL是目前研究發現的程序性壞死最重要的下游效應器。MLKL激酶結構域的第357位蘇氨酸和358位絲氨酸在細胞程序性壞死啟動后被PIP3磷酸化，磷酸化的MLKL由單體狀態向寡聚體狀態轉化，寡聚化的MLKL結合磷酸肌醇和心肌磷脂，在細胞膜上形成通透性孔道，破壞膜的完整性，引發細胞壞死[11]。壞死的細胞裂解釋放出內含物，引起炎癥反應。炎癥細胞粘附在血管內皮上，激活單核細胞和T淋巴細胞，從而啟動和加速動脈粥樣硬化發展。本文研究結果顯示CHD患者中AMI組、SA組、UA組三組的MLKL水平高于正常對照組（P均＜0.05），并且呈現AMI組＞UA組＞SA組的趨勢，表明MLKL水平與CHD患者的診斷和分型有關。

大量研究表明，炎癥反應與AS密切相關。CRP是一種由肝細胞產生的急性時相反應蛋白，具有較好的敏感度。有研究表明，CRP通過增大斑塊內脂質核心，加強斑塊內炎癥活動，減少AS斑塊纖維帽厚度，促進AS的不穩定性[12]。NTProBNP是一種心臟神經激素，臨床上通過檢測靜脈血中NTProBNP 的水平來反映心功能情況，cTnT是目前公認的心肌壞死標志物，是心肌的一種調節收縮性蛋白，是AMI診斷的金標準[13]，有研究顯示，cTnT累積釋放量不但能反映心肌梗死面積大小，且上升程度與死亡風險存在量效關系，并能評估心肌梗死患者的風險及預后[14]。肌紅蛋白(Myoglobin，MYO)是一種小分子蛋白，由珠蛋白與正鐵血紅素(Heme)結合而成。肌紅蛋白存在于肌肉中，心肌中含量特別豐富。心肌受損后2～4h，MYO在血中濃度開始升高，6～10h后，幾乎所有AMI患者MYO都升高。CK-MB一直是診斷AMI重要指標之一。CK-MB并不是心肌所特有的，當骨骼肌損傷或腎功能衰竭時，血清CK-MB濃度也會升高。由于多數CHD患者臨床癥狀不明顯，心電圖改變不典型，而冠脈造影檢查費用昂貴，故心肌標志物的應用為CHD的診斷和治療提供了有力的證據。本次研究結果顯示CHD患者中cTnT、CK-MB水平增高，呈現AMI組＞UA組＞SA組的趨勢，MYO水平呈現UA組＞SA組的趨勢，更有力證明了上述4項心肌標志物的水平與CHD發生和發展有著密切關系，并且對CHD患者的預后判斷及病情的隨訪有著重要的價值。

綜上所述，血清MLKL水平與CHD的發生有關。MLKL水平對CHD病情的診斷有一定的臨床意義。但本研究樣本量較少，并且受限于研究周期等多方面原因，其參與CHD的具體機制并沒有得到充分的闡述，今后還需加大樣本量進行研究。