紅霉素腸溶片質量穩定性研究

余為，秦德松，劉洋，李琴芬

(重慶市黔江食品藥品檢驗所，重慶 409000)

0 引言

紅霉素是一類大環內酯類抗生素，因抗菌譜與青霉素相似，常作為青霉素過敏患者的替代用藥，主要用于溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌等所致的急性咽炎、扁桃體炎、鼻竇炎；溶血性鏈球菌所致蜂窩織炎、猩紅熱；白喉及白喉帶菌者；李斯特菌病等[1-7]。本文依照《中國藥典》2015年版四部原料藥與藥物制劑穩定性試驗指導原則考察紅霉素腸溶片制備工藝穩定性與科學性，為其儲存、供應、貯藏、使用等各環節中質量的穩定性提供依據。

1 儀器、藥品與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(1260美國安捷倫)，二極管陣列檢測器；METTLER TOLEDO分 析天平XP205型，感量0.00001g(美國梅特勒)；METTLER TOLEDO分析天平XP204型，感量0.0001g (美國梅特勒)；SHH-SSGD恒溫恒濕箱(重慶永生)；UV-2550紫外分光光度儀(日本島津)；5560抗生素測定儀(北京先驅威鋒)；RCZ-8M溶出儀(天大天發)

1.2 藥品與試劑

紅霉素腸溶片，規格0.125g；劑型：腸溶薄膜衣片；批號160501、160502、160503；生產日期：2016年5月；鋁塑板包裝儲存；以上均由重慶科瑞南海制藥有限責任公司提供。紅霉素標準品(批號130307-201417，每毫克相當于928單位)來源中國食品藥品檢定研究院；短小芽孢桿菌[CMCC (B)63202]；所用試劑除乙腈為色譜純，其他均為分析純。

2 方法與結果

2.1 方法學考察

2.1.1 溶出度方法學考察

線性關系：精密稱取約100mg的紅霉素對照品，加10mL乙醇溶解后，用磷酸鹽緩沖液(pH6.8)定量稀釋成約含30、40、50、60、70μg/mL溶液，測定吸光度(482nm)。以紅霉素質量濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=0.01174X-0.07782，r=0.9996(n=5)。結果表明，紅霉素質量濃度[0.28～0.81μg/mL]與吸光度線性關系良好。

穩定性試驗：取自批號為160501的供試液并將其置于室溫下，分別在0、2、4、6和8h測量吸光度(482nm)。結果是RSD為0.44%(n=5)，表明溶液在8h內穩定良好。

重復性試驗：取批號160501的供試品溶液，檢測人員依法平行制備6份，測定溶出量，結果溶出量為91%(平均值)，RSD為1.18%(n=6)，表明方法重復性良好。

中間精密度：照重復性試驗方法，由兩名分析人員在不同日期分別測定6份對照品、供試品溶液，共計12組數據。結果溶出量91%(平均值)。RSD為1.12%(n=12)，表明中間精密度良好。

加標回收試驗：按處方配置，照樣品濃度水平加入80%、100%、120%紅霉素對照液各三份，共9組數據，測定平均回收率99.53%，RSD=1.36%(n=9)。

2.1.2 紅霉素A組分方法學考察

線性關系：稱取約50mg紅霉素對照品加5mL乙醇溶解后，用磷酸鹽緩沖液(pH6.8)定量稀釋成約含3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mg/mL溶液，依法測定峰面積。橫坐標(X紅霉素質量濃度)，縱坐標(Y液相峰面積)進行線性回歸，回歸方程：Y=3.85921X-51.61577，r=0.9999(n=5)，結果表明紅霉素質量濃度[3.06～5.10mg/mL]與峰面積線性關系良好。

穩定性試驗：將供試液置于室溫下(批號160501)。分別在0、2、4、6和8h注入樣品，并測量峰面積變化。結果的RSD為0.25%(n=5)，表明測試溶液在8h內穩定。

重復性試驗：取樣品(批號160501)，依法平行制備6份供試品溶液和2份對照品溶液，按要求測定紅霉素A組分，結果紅霉素A組分(平均值)90.2%，RSD為1.05%(n=6)，表明方法有良好重復性。

中間精密度：依照重復性試驗方法，由不同分析人員在不同日期分別測定12組完整數據，結果紅霉素A組分平均值89.9%，RSD為1.26%(n=12)，表明中間精密度良好。

加標回收試驗：按處方配置，照A組分樣品濃度水平加入80%、100%、120%紅霉素對照液各三份，共9組數據，測定平均回收率100.04%，RSD=1.12%(n=9)。

耐用性試驗：按要求配置紅霉素系統適用性對照品，考察柱溫60℃、65℃、70℃；流動相pH6.8、7.0、7.2；流速0.95、1.00、1.05mL/min；雜 質C與 紅 霉 素A峰 分 離 度，分 離 度：1.24～1.73，基本達到系統要求。

2.1.3 紅霉素含量測定方法學考察[8-12]

線性關系：采用抗生素微生物測定一劑量法，精密稱取約10mg紅霉素于10mL容量瓶中，加乙醇1mL溶解后，用pH7.8磷酸鹽緩沖液定量稀釋成約含5.22、6.14、8.50、10.00、11.78、13.85、16.28、19.15μ/mL溶液，依法測定抑菌圈直徑。以紅霉素濃度對數值(X)為橫坐標，(Y：抑菌圈直徑-中心濃度)為縱坐標進行線性回歸，回歸方程：Y=3.85X-3.8458，r=0.9991(n=9)，結果表明紅霉素濃度在5.22～19.15μ/mL范圍內與Y值關系良好。

穩定性試驗：取批號160501供試液室溫放置，在0、2、4、6、8h分別測定，通過抑菌圈變化以抗生素微生物二劑量法計算含量，結果RSD為0.45% (n=5)，表明供試品溶液8h內穩定。

重復性試驗：依法取批號為160501的樣品，并行配制6份供試品溶液和1份對照溶液，并按兩劑量法測定紅霉素含量。紅霉素平均含量值為99.6%，RSD=0.98%(n=6)，表明該方法具有良好的重復性。

中間精密度：共12組數據——照重復性試驗方法，由兩名測試人員在不同日期分別測定供試品溶液6份，結果紅霉素含量平均值98.7%，RSD=1.92%(n=12)，表明中間精密度良好。

加標回收試驗：采用二劑量法，照樣品濃度水平加入80%、100%、120%紅霉素對照液各三份，測定平均回收率98.45%，RSD=1.86%(n=9)。

耐用性試驗：采用二劑量法，考察培養基pH值7.8、8.0、8.2；磷酸鹽緩沖液pH值7.6、7.8、8.0，含量測定值方面無明顯變化，表明本方法耐用性良好。

2.2 加速穩定性試驗

取3批次紅霉素腸溶片按(2015版)的《中國藥典》——原料藥與藥物制劑穩定性指導原則，調節恒溫恒濕箱：于(40±2)℃、(75±5)%RH的條件下放置6個月，在試驗的0、1、2、3及6月末分別取樣1次，按(2015版)《中國藥典》二部進行檢驗。

2.3 長期穩定性試驗

取3批次紅霉素腸溶片按(2015版)的《中國藥典》——原料藥與藥物制劑穩定性指導原則，調節恒溫恒濕箱：置(30±2)℃、(65±5)%RH的條件下放置24個月，在試驗的0、3、6、9、12、18、24月末分別取樣一次，按(2015版)《中國藥典》二部進行檢驗。

2.4 結果

考察項目：對紅霉素腸溶片性狀、鑒別、溶出度、重量差異、紅霉素A組分、含量測定進行檢驗。

紅霉素腸溶片依造2015版《中國藥典》進行了加速、長期穩定試驗考察，并觀察了直接同藥品接觸的包裝材料對本品穩定性的影響，其質量情況在考察期間未有顯著變化。3批樣品的性狀、鑒別、重量差異、溶出度、紅霉素A組分、含量測定等試驗結果均符合規定。加速穩定性試驗及長期穩定性試驗結果提示：在臨床用藥包裝條件下，本品在24個月內穩定，同時為有效期2年的制定提供參考。結果詳見表1～6。

表1 紅霉素腸溶片(160501)加速穩定性試驗結果

表2 紅霉素腸溶片(160502)加速穩定性試驗結果

表3 紅霉素腸溶片(160503)加速穩定性試驗結果

表4 紅霉素腸溶片(160501)長期穩定性試驗結果

表5 紅霉素腸溶片(160502)長期穩定性試驗結果

表6 紅霉素腸溶片(160503)長期穩定性試驗結果