AFP、AFP-L3/AFP、PIVKA-Ⅱ聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

談艷芳，劉利洪，袁成良

德陽市人民醫院檢驗科，四川德陽 618000

肝癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，發病呈年輕化趨勢，由于發病隱匿，一旦診斷多數患者已屬晚期，失去了手術和治療的最佳時機[1-2]。目前，篩查原發性肝癌最常用的腫瘤標志物為甲胎蛋白(AFP),由于AFP的靈敏度和特異度較低，仍有30%～40%的肝癌患者確診時AFP水平在正常范圍[3]。同時，部分急、慢性肝炎及肝硬化等良性肝病患者AFP水平也升高，對肝癌的診斷造成極大干擾。因此，尋找一種早期肝癌標志物顯得尤為重要。OKUYAMA等[4]研究發現，甲胎蛋白異質體(AFP-L3)由肝癌細胞產生，是檢測原發性肝癌的新的腫瘤標志物。有研究發現，異常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)也是原發性肝癌的特異性腫瘤標志物[5-6]。本研究主要檢測本院原發性肝癌及良性肝病患者AFP、PIVKA-Ⅱ水平及甲胎蛋白異質體與甲胎蛋白比值(AFP-L3/AFP)，探討3項指標單獨及聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年4月至2020年4月在本院住院的原發性肝癌患者50例作為原發性肝癌組，男45例，女5例；年齡28～80歲；良性肝病患者50例作為良性肝病組，男34例，女16例；年齡25～78歲。原發性肝癌患者經病理學及CT、MRI、彩超等影像學檢查結合臨床診斷確診，并未行手術切除。良性肝病患者為經病理學及CT、MRI、彩超等影像學檢查結合臨床診斷確診的急、慢性肝炎，肝硬化，繼發性肝癌患者，均未進行治療。因華法林、抗菌藥物、維生素K等藥物會影響血清PIVKA-Ⅱ水平，排除正在使用這些藥物的患者，并排除妊娠女性。兩組患者年齡、性別等比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 采用德國西門子Centaur XP全自動化學發光免疫分析儀檢測血清AFP、AFP-L3水平，AFP試劑購自德國西門子股份有限公司，AFP-L3試劑購自北京熱景生物技術有限公司。采用日本富士Lumipulse G1200全自動免疫分析儀檢測PIVKA-Ⅱ水平，試劑為配套試劑。以上所有檢測項目均按照儀器說明書進行，所有質控在控。利用親和吸附微量離心柱法，經過離心去除保護液、清洗、吸附、洗脫等過程獲得AFP-L3分離液，上機測定血清AFP-L3水平。三者聯合診斷時AFP、PIVKA-Ⅱ和AFP-L3/AFP檢測結果只要有一項陽性即判定為陽性。血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP判斷原發性肝癌的臨界值分別為20 ng/mL、40 mAU/mL、>10%。

1.3統計學處理 采用SPSS22.0軟件進行統計分析，呈偏態分布的計量資料以M(P25,P75)表示，采用秩和檢驗；計數資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析AFP、AFP-L3/AFP、PIVKA-Ⅱ對原發性肝癌的診斷效能。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1原發性肝癌組與良性肝病組患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ和AFP-L3/AFP比較 原發性肝癌組患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP明顯高于良性肝病組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 原發性肝癌組與良性肝病組患者血清AFP、PIVKA-Ⅱ和AFP-L3/AFP比較[M(P25,P75)]

2.2血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP單獨及聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能 ROC曲線分析結果顯示，血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP單獨檢測及三者聯合檢測的曲線下面積分別為0.581、0.843、0.770、0.905，見表2。

表2 血清AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP單獨及聯合檢測對原發性肝癌的診斷效能

3 討 論

目前，原發性肝癌的診斷主要依賴于B超、CT、MRI、肝穿刺、血清AFP檢測等，AFP長期以來作為原發性肝癌的血清學腫瘤標志物，由于AFP靈敏度和特異度較低，慢性肝炎、肝硬化、畸胎瘤、卵巢癌等患者血清AFP水平通常也會升高[7]。近年來，AFP陰性的原發性肝癌患者出現上升趨勢[8]。難以早期發現是原發性肝癌治療效果差的主要原因[9]。通常中晚期肝癌常伴有肝內外及淋巴結轉移，導致手術無法切除，容易復發。

PIVKA-Ⅱ是在維生素K缺乏的情況下，存在于凝血酶原的氨基末端附近谷氨酸在不完全羧化時產生的不能保持凝血活酶活性的第二因子[10]。隨著蛋白質組學和分子生物學的快速發展,有研究顯示，PIVKA-Ⅱ的產生機制可能與患者肝臟維生素K代謝異常、γ谷氨酸羧化能力減弱有關[11]。目前，PIVKA-Ⅱ商品化的檢測試劑盒和全自動化學發光檢測儀器已上市，PIVKA-Ⅱ作為一種新的腫瘤標志物在原發性肝癌患者中陽性率較高[12]。本研究發現，PIVKA-Ⅱ單獨檢測診斷原發性肝癌的靈敏度和特異度分別為76.00%和84.00%，與朱宇等[13]研究一致。

AFP為一種單鏈糖蛋白，在重型肝炎、肝硬化等疾病患者中AFP水平也往往較高，因此，AFP診斷原發性肝癌的特異度較低。部分原發性肝癌患者AFP水平可出現略微增高，尤其是早期原發性肝癌。OKUYAMA等[4]研究發現，AFP-異質體分為3種類型，即AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，AFP-L1存在于良性肝病患者血清中，AFP-L2存在于孕婦血清中，AFP-L3為肝癌患者癌細胞所特有。AFP-L3較AFP有更高的特異度，是診斷肝癌的特異性指標。有研究報道，通過檢測AFP-L3水平能夠在良性肝病中發現腫瘤最大徑<2 cm的肝癌患者，比影像學提前9～12個月[14]。AFP-L3/AFP可作為原發性肝癌的靈敏指標。AFP-L3還與肝癌細胞的巖藻化有關，能客觀反映肝癌的性質，可鑒別良、惡性肝病[15-16]。尤其是AFP陰性，AFP-L3/AFP>10%應警惕潛在癌癥發生，注意后期隨訪[17]。

有研究報道，AFP與PIVKA-Ⅱ聯合檢測診斷原發性肝癌的靈敏度、特異度均明顯高于AFP單獨檢測[10]。另有文獻報道顯示，血清AFP-L3/AFP與腫瘤大小呈正相關，可輔助監測患者病情，AFP-L3/AFP>10%，有復發的可能[18]。而AFP單獨用于原發性肝癌診斷具有一定的局限性。

綜上所述，AFP、PIVKA-Ⅱ、AFP-L3/AFP 三者聯合檢測可提高原發性肝癌的診斷靈敏度和特異度,有利于患者早期診斷、早期治療、治療后隨訪及復發監測，提高患者的生存率和生活質量。