氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定白花蛇舌草中10種有機磷農(nóng)藥殘留量

羅 琳，盧任杰，盧文杰

（1.汕頭市食品檢驗檢測中心，廣東汕頭 515041；2.汕頭市中心醫(yī)院，廣東汕頭 515031）

白花蛇舌草（Hedyotis diffusa），又名蛇舌癀、羊須草、蛇針草、節(jié)節(jié)結(jié)蕊草、蛇總管，含有車葉草甙、車葉草甙酸、雞屎藤次甙、熊果酸、β-谷甾醇、豆甾醇和對-香豆酸等[1]成分；全草可入藥，性味微苦、微甘，具有清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕、活血止痛等功效，廣泛分布于廣東、廣西、云南、福建等省份。在潮汕地區(qū)，白花蛇舌草常被當(dāng)?shù)鼐用癞?dāng)做清熱消暑，解渴止咳的涼茶食用。但在白花蛇舌草種植過程中，常使用高效廣譜殺蟲劑有機磷農(nóng)藥(Organophosphorus Pesticide, OPPs)進行病蟲害防治，導(dǎo)致草藥中發(fā)生不同程度的OPPs殘留。

目前關(guān)于OPPs殘留量測定方法包括氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）等[2-5]。其中GC法和LC法特異性差、重復(fù)性低；GC-MS/MS具有靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，但儀器價格動昂貴而推廣普及率低；GC-MS法具有分析速度快、特異性強、準確度高、精密度好，儀器價格適與推廣普及率高等特點，因此GC-MS已成為檢驗檢測機構(gòu)測定OPPs殘留主要檢測技術(shù)。為評估白花蛇舌草中OPPs殘留水平及其種類，本研究利用QuEChERS法提取，采用GC-MS檢測技術(shù)，擬建立10種有機磷農(nóng)藥（對硫磷、乙酰甲胺磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、三唑磷、敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、氧樂果和聯(lián)苯菊酯）同時檢測方法，分析汕頭市白花蛇舌草中OPPs殘留水平及其種類，為其質(zhì)量控制提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

10種OPPs（對硫磷、乙酰甲胺磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、三唑磷、敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、氧樂果和聯(lián)苯菊酯）標準品，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷和乙腈，均為色譜純，購自美國天地公司；氯化鈉、無水硫酸鈉，均為分析純，購自西隴科學(xué)股份有限公司；石墨化炭黑（GCB），購于江蘇先豐納米材料科技有限 公司。

OPPs標準儲備液：分別準確稱取適量的每種OPPs標準品，用丙酮分別配置成濃度為100～1 000 mg/mL的標準儲備溶液。OPPs混合標準工作溶液：根據(jù)需要再用丙酮逐級稀釋成適用濃度的系列混合標準工作溶液。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 8890A/5977B型氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；BSA124S型電子天平，德國Sartorius公司；BUCHI R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI公司。

1.3 GC-MS/MS條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱為DB-5MS毛細管氣相色譜柱（30 m×0.25 mm× 0.25 μm）；進樣口溫度280 ℃；進樣方式：無分流進樣， 1.5 min后開閥；載氣為氦氣，流速為1.0 mL/min；進樣量 1 μL；溶劑延遲時間5 min。

程序化升溫程序：初始溫度50 ℃，保持2 min；以 30 ℃/min的速度升溫至180 ℃，保持10 min，再以30 ℃/min的速度升溫至270 ℃，保持10 min。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源（EI）；色譜-質(zhì)譜接口溫度270 ℃；離子源溫度200 ℃；檢測方式：選擇離子監(jiān)測（SRM）；10種OPPs化合物的保留時間、定量和定性選擇離子見表1。

表1 OPPs化合物的保留時間、定量和定性選擇離子表

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取

將白花蛇舌草粉碎后過80～100目篩，貯于棕色瓶中。準確稱取白花蛇舌草粉末2.0 g置于50 mL離心管中，加入4 mL水和20 mL丙酮，均質(zhì)提取10 min；將提取液過濾，殘渣再用50 mL丙酮重復(fù)提取1次，合并濾液于250 mL分液漏斗中；加入150 mL氯化鈉水溶液和50 mL二氯甲烷，振搖3 min，靜置分層，收集二氯甲烷相；水相再用50 mL二氯甲烷重復(fù)提取兩次，合并二氯甲烷相；經(jīng)無水硫酸鈉脫水，待凈化。

1.4.2 凈化

將石墨化炭黑固相萃取柱用6 mL乙酸乙酯-正己烷預(yù)淋洗，棄去淋洗液；將2 mL待凈化液傾入上述連接柱中，并用3 mL乙酸乙酯-正己烷分3次洗滌濃縮瓶，將洗滌液傾入石墨化炭黑固相萃取柱中，再用12 mL乙酸乙酯-正己烷洗脫，收集上述洗脫液至濃縮瓶中，于40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用乙酸乙酯溶解并定容至1.0 mL，供氣相色譜-質(zhì)譜測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 氣相-質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將標準工作溶液和試樣依次注入色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，在正負離子模式下，分別對10種OPPs進行選擇離子監(jiān)測，并采用多段程序升溫方式對10種OPPs進行有效分離。由圖1可知，在多段程序升溫方式下，DB-5MS色譜柱可同時實現(xiàn)10種OPPs完全分離，且各化合物的色譜峰響應(yīng)值高、峰形對稱尖銳；經(jīng)微調(diào)質(zhì)譜參數(shù)，優(yōu)化后的10種OPPs質(zhì)譜條件見表1。

圖1 白花蛇舌草中10種OPPs的GC-MS選擇離子色譜圖（DB-5MS色譜柱）

2.2 線性關(guān)系、檢出限和加標回收率

結(jié)果顯示，10種OPPs在1.0～20.0 ng/mL濃度范圍內(nèi)，各OPPs定量離子峰面積與質(zhì)量濃度之間呈良好的線性關(guān)系，且相關(guān)系數(shù)（r2）在0.996 3～0.999 1；白花蛇舌草中10種OPPs的檢出限為0.02～0.10 mg/kg，定量限為0.07～ 0.4 mg/kg；10種OPPs的加標回收率在89.2%～96.4%，相對標準偏差為1.7%～3.6%。

2.3 實際樣品測定

采用本文所建的GC-MS法對汕頭市隨機采樣的10份白花蛇舌草進行10種OPPs殘留水平和種類篩查。結(jié)果顯示，所檢測樣品中均未檢測到10種OPPs殘留，該OPPs均為被我國明令禁止使用的農(nóng)藥，可能在白花蛇舌草種植過程中均未使用。

3 結(jié)論

利用QuEChERS法提取，采用GC-MS檢測技術(shù)，成功的建立10種有機磷農(nóng)藥同時檢測方法，可為檢驗檢測白花蛇舌草中OPPs殘留水平及其種類提供檢測方法。