薄層色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)中的運(yùn)用探討

彭嚴(yán)

（貴州神奇藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽(yáng) 550000）

薄層色譜技術(shù)是將中藥的測(cè)試品溶液點(diǎn)于薄層板中，用展開劑展開和分離中藥測(cè)試品的成分，并與色譜圖進(jìn)行比對(duì)，得出中藥的成分與含量。其可以用于中成藥的檢測(cè)和中藥材的含量測(cè)定，薄層色譜技術(shù)具有直觀性、靈活性、時(shí)效性的特點(diǎn)，因此在中藥的檢驗(yàn)中運(yùn)用非常廣泛[1]。研究薄層色譜技術(shù)在中藥檢測(cè)中的具體運(yùn)用，可以有效保證中藥檢測(cè)的質(zhì)量，提高中成藥的臨床運(yùn)用效應(yīng)。

一、薄層色譜技術(shù)的原理以及運(yùn)用

（一）薄層色譜技術(shù)的概念和原理解析

薄層色譜鑒別法最早在20 世紀(jì)20 年代起開始運(yùn)用，其在臨床實(shí)踐中，主要用于對(duì)中藥成分的分析和中藥品質(zhì)的鑒定。由于薄層色譜技術(shù)具有分離和鑒定的雙重功效，而且操作起來(lái)比較簡(jiǎn)單，因此可以廣泛應(yīng)用于各種中藥的臨床測(cè)試。隨著薄層色譜技術(shù)的發(fā)展，中藥的成分檢測(cè)可以利用薄層掃描儀進(jìn)行掃描或鑒定。薄層色譜技術(shù)根據(jù)固定相的支持物不同，可以分為薄層吸附層析法、薄層分配層析法、薄層離子交換層析法和薄層凝膠層析法，主要通過(guò)移動(dòng)相，也就是溶劑流過(guò)固定相的過(guò)程中完成吸附和分解，通過(guò)吸附和分解吸附達(dá)到中藥成分相互分離的目標(biāo)[2]。在中藥成分的實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用次數(shù)較多的方法是薄層吸附層析法，吸附性是薄層色譜技術(shù)中最重要的一個(gè)性質(zhì)，無(wú)論是哪種形式的中藥都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象，因此，運(yùn)用薄層色譜技術(shù)，中藥成分的確定和檢測(cè)結(jié)果是十分準(zhǔn)確的。

（二）高效薄層色譜法的應(yīng)用

高效薄層色譜法是采用顆粒較細(xì)的吸附劑，運(yùn)用噴霧法的方法進(jìn)行中藥的檢測(cè)，由于其具有涂層均勻、重現(xiàn)性良好的特性，因此可以準(zhǔn)確地鑒定中藥的成分和中藥的質(zhì)量。高效薄層色譜法的點(diǎn)樣配備了新的裝備，可以進(jìn)行自動(dòng)或者半自動(dòng)的操作，而且其對(duì)傳統(tǒng)的薄層色譜法進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，吸附劑具有疏水和清水兩方面的性能，既可以完成正相色譜分離，也能完成反相薄層色譜分離。色譜的選擇具有多樣化的特征，展開方式也有了新的變化，不僅可以完成圓心式展開，也能實(shí)現(xiàn)向心式展開。高效薄層色譜法除可以對(duì)藥材進(jìn)行定性分析，還可以對(duì)藥材進(jìn)行定量分析，對(duì)諸如生物堿、黃酮類物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。

在中藥藥物的分析和中藥材料的分離時(shí)，高效薄層色譜法可以采用更均勻、更細(xì)的硅膠和纖維素，將其作為固定相對(duì)藥材進(jìn)行色譜分離和分析，由于吸附劑的疏水和清水性有更改，因此，中藥的色譜分離可以實(shí)現(xiàn)正相和反相兩種分離，實(shí)現(xiàn)多樣化的色譜選擇。同時(shí)采用預(yù)制薄層板，展開短距離的分離，將顆粒細(xì)小的吸附劑進(jìn)行涂層，通過(guò)噴霧法制備進(jìn)行重現(xiàn)。目前運(yùn)用高效薄層色譜法檢測(cè)中草藥成分的例子不在少數(shù)，檢測(cè)的時(shí)間短，效率高是該方法最大的特點(diǎn)。而且測(cè)定中藥成分具有很多的優(yōu)勢(shì)，例如穩(wěn)定性良好、重現(xiàn)性良好、分離效率高等，可以廣泛應(yīng)用于中草藥的質(zhì)量控制研究中。楊小明等人在研究銀杏的提取物時(shí)，運(yùn)用高效薄層色譜法，對(duì)其中的聚戊烯醇同系物進(jìn)行提取，成功分離出銀杏中的幾種成分[1]。

（三）假相薄層色譜法

假相薄層色譜法主要使用的流動(dòng)相是低濃度的表面活性劑，還有環(huán)糊精水溶液，固定相一般為聚酰胺薄膜，在假相薄層色譜法中，表面活性劑和其他溶劑可以共同組成塑膠溶液，對(duì)中藥材進(jìn)行選擇性的溶解。通過(guò)梯度洗脫光學(xué)檢測(cè)進(jìn)行流動(dòng)相的檢測(cè)，假相薄層色譜法具有流動(dòng)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、處理方便的優(yōu)勢(shì)，既可以使一些不溶于水的中草藥材進(jìn)行較好的分離，還可以對(duì)中藥材中的微量雜質(zhì)進(jìn)行限量檢查，或者對(duì)患者體內(nèi)的中藥成分進(jìn)行分析和測(cè)定。假相薄層色譜法不僅可以用于中草藥的檢查，還可以在臨床實(shí)踐中展開測(cè)驗(yàn)。在中草藥的檢測(cè)和分離中，戈早川成功通過(guò)假相薄層色譜法分離出黃連和制劑的組分，按照九比一的比例配制醋酸乙酯，并采用聚酰胺薄膜建立薄層掃描法，同時(shí)測(cè)定中草藥中含有的四種成分，這也就說(shuō)明假相薄層色譜法的檢測(cè)效率和檢測(cè)質(zhì)量比較優(yōu)良[2]。

（四）反相薄層色譜

反相薄層色譜法就是運(yùn)用化學(xué)鍵和相，完成藥物的檢測(cè)和分離。在反相薄層色譜法中，流動(dòng)性一般大于固定相的極性，這種方法具備擴(kuò)散面積小的特點(diǎn)，但由于制備比較復(fù)雜，因此可以運(yùn)用于復(fù)合性的中草藥物的分離，對(duì)混合物進(jìn)行分離測(cè)驗(yàn)[3]。反相薄層色譜法中的化合鍵和相的硅膠一般選擇硅烷程度較高的材料，反相色譜法可以為分離提供更多的可能性和選擇性，根據(jù)具體的固定材料，選用水、甲醇等溶劑，或者采用兩種以上的溶劑進(jìn)行混合制作成展開劑，根據(jù)中草藥的性能挑選合適的展開劑進(jìn)行測(cè)定。在中草藥的含量測(cè)定和質(zhì)量控制中，反向薄層色譜法一般可以采用甲醇與水進(jìn)行比例性的配合，制作成展開劑對(duì)中草藥的有效成分進(jìn)行檢測(cè)，分離其中所包括的具體化學(xué)成分和植物成分，對(duì)每一種成分進(jìn)行技術(shù)鑒定。

（五）微乳薄層色譜法

微乳薄層色譜法是運(yùn)用有機(jī)溶劑作為展開劑的一種方法，其屬于經(jīng)典的薄層色譜法，主要所用的工具是乳化劑和水性以及油相，這些成分可以幫助中藥材構(gòu)成光學(xué)同性微乳薄層色譜，通過(guò)合理搭配不同的穩(wěn)定體系和展開劑，使穩(wěn)定體系呈現(xiàn)均勻透明的狀態(tài)，或者形成穩(wěn)定的微呈乳光的體系。這種方法由于需要按照既定量制成微乳，因此，檢測(cè)工藝比較復(fù)雜，而且容易受多種因素的干擾，但由于對(duì)藥材的檢測(cè)具有靈敏度，因此也可以對(duì)中成藥的成分進(jìn)行分離測(cè)定，大眾熟知的雙黃連口服藥就是通過(guò)這種方式進(jìn)行成分鑒定和分離測(cè)定的。

二、薄層色譜新技術(shù)的應(yīng)用發(fā)展

（一）薄層色譜技術(shù)的儀器與材料支持

薄層色譜技術(shù)的儀器與材料主要有三種不同的類型，第一種是支持物與固定相，支持物主要包括玻璃板、塑料板、鋁板等，固定相主要包括硅膠、氧化鋁、聚酰胺等物質(zhì)。第二種是點(diǎn)樣器與展開容器，點(diǎn)樣器主要包括微升毛細(xì)管，點(diǎn)樣器可以是手動(dòng)的，也可以是半自動(dòng)或自動(dòng)；展開容器主要有平底展開缸和雙槽展開缸，根據(jù)中草藥檢測(cè)的實(shí)際情況，在一般情況下會(huì)選用雙槽展開缸進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[3]。第三部分是顯色與檢視，一般顯色器具有玻璃噴霧和空氣壓縮機(jī)，而檢視器是暗箱和攝影設(shè)備。薄層色譜技術(shù)可以以直觀的彩色圖像表達(dá)中草藥的成分更方便判斷中藥中的中草藥成分和中草藥元素，而且薄層色譜技術(shù)各單元的操作相對(duì)獨(dú)立，互不干涉、互不影響，因此掃描比較可信，可以根據(jù)具體的中成藥檢測(cè)方式進(jìn)行靈活的調(diào)整。色譜的生成根據(jù)選擇技術(shù)的不同有不同的時(shí)間，但一般來(lái)講，同一中草藥成分可以在同時(shí)產(chǎn)生18 個(gè)左右的樣品色譜。

（二）薄層色譜檢測(cè)的操作要點(diǎn)以及常見問(wèn)題

薄層色譜檢測(cè)的主要步驟是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇，中草藥檢測(cè)品的制備，薄層板的選擇。在基礎(chǔ)物品到位之后進(jìn)行點(diǎn)、展開、顯色，而具體來(lái)說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇需要有對(duì)照品和對(duì)照藥材，由于有一些中草藥的共存植物比較多，沒有專屬性的物質(zhì)，因此，單純利用對(duì)照品進(jìn)行分離純化的成本比較高。要加入對(duì)照藥材，與對(duì)照藥材進(jìn)行分析和鑒定，在選擇供試品時(shí)，一般可以采用溶劑提取法，也就是選擇合適的提取溶劑對(duì)多種藥材或者處方藥進(jìn)行提取。有一些成分復(fù)雜的藥材有多味中成藥，需要利用多種提取方法聯(lián)合。薄層板的選擇中，硅膠的運(yùn)用范圍最廣，但由于不同中草藥檢測(cè)品的酸堿性不同，因此還需要適當(dāng)考慮氧化鋁和聚酰胺這兩種物質(zhì)[4]。在點(diǎn)樣時(shí)需要注意樣品要根據(jù)半自動(dòng)或自動(dòng)的點(diǎn)樣機(jī)進(jìn)行定量，在展開時(shí)，根據(jù)具體中藥成分的鑒定選擇不同樣式的展開缸，針對(duì)不同測(cè)定成分的性質(zhì)，在操作時(shí)需要選擇適合的顯色方式，諸如某些含有顏色成分的藥材，黃酮類、苯丙素類成分的藥材，或者大青葉、紅花這類顏色成分比較濃烈的藥材在紫外線下有熒光，因此，選擇顯色方式是需要根據(jù)測(cè)定的成分進(jìn)行具體的選擇。在測(cè)定中藥成分時(shí)，需要注意各種影響因素如溫度、濕度、用量等，有效控制外界因素和內(nèi)生因素，保證色譜檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

結(jié)束語(yǔ)：總之，薄層色譜技術(shù)本身就是對(duì)中藥進(jìn)行分析的一種方法，隨著高科技產(chǎn)業(yè)的興起，薄層色譜新技術(shù)的研發(fā)力度會(huì)逐漸加大，技術(shù)要領(lǐng)會(huì)更加規(guī)范，更具有針對(duì)性。因此，在未來(lái)，薄層色譜新技術(shù)的操作會(huì)更加簡(jiǎn)單快捷，在未來(lái)，隨著中藥檢測(cè)技術(shù)的不斷成熟，相關(guān)設(shè)備的不斷改進(jìn)，薄層掃描法可以廣泛應(yīng)用于中藥和中藥材的含量鑒定中，根據(jù)鑒別的含量測(cè)定，對(duì)某些中藥材和其同屬近緣的植物進(jìn)行指紋圖譜的鑒定。