宮頸癌組織中PGRMC1表達(dá)水平與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系

王巧妹，陳建紅

蘇州高新區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇蘇州 215129

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖系統(tǒng)腫瘤1/2以上，并且近年來其發(fā)病人群逐漸趨向年輕化[1]，同時(shí)根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，世界每年新發(fā)宮頸癌病例超53萬，死亡人數(shù)達(dá)27.5萬左右，嚴(yán)重威脅女性的生命安全[2]。既往有研究認(rèn)為，盡早診斷對(duì)于降低宮頸癌患者病死率、改善預(yù)后具有重要作用[3]。孕激素受體膜組分1(PGRMC1)是膜相關(guān)孕激素受體蛋白家族成員之一，并且參與多種細(xì)胞進(jìn)程[4]，既往研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1與乳腺癌預(yù)后存在密切關(guān)系[5]。目前國內(nèi)鮮見PGRMC1與宮頸癌的臨床特征、預(yù)后的相關(guān)性報(bào)道。本研究擬檢測(cè)宮頸癌組織中PGRMC1表達(dá)水平，探討其與宮頸癌患者臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，為宮頸癌的診斷與治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年11月至2017年11月本院收治并經(jīng)空心針活檢或術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診的96例宮頸癌患者作為研究對(duì)象，96份宮頸癌組織標(biāo)本作為研究組，96份宮頸癌旁組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣4 cm處)作為對(duì)照組。患者年齡20～66歲，平均(46.62±5.32)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2014年世界衛(wèi)生組織女性生殖器官腫瘤(宮頸癌)的分類標(biāo)準(zhǔn)[6]，并經(jīng)病理檢查已確診；(2)按照宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)[7]分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰa～Ⅱb期；(3)行廣泛性全子宮切除術(shù)聯(lián)合盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病者；(2)合并子宮內(nèi)膜癌等其他惡性腫瘤者；(3)術(shù)前接受放療、化療及生物治療的患者；(4)既往有精神病史者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。所有患者出院后經(jīng)電話、門診復(fù)診隨訪3年，隨訪截止時(shí)間為2020年11月30日或出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或死亡，隨訪率為100%。

1.2方法 采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)研究對(duì)象組織中的PGRMC1表達(dá)水平，首先將兩組織標(biāo)本經(jīng)60 ℃熔點(diǎn)石蠟包埋以及4 μm連續(xù)切片后，通過蘇木素(武漢谷歌生物科技有限公司)染色，確定病變區(qū)域，載玻片上制片后采用檸檬酸修復(fù)液高溫高壓修復(fù)抗原，隨后加入稀釋的兔抗人PGRMC1(1∶100)單克隆抗體(美國HBT公司)4 ℃孵育過夜，再加入二抗孵育20 min，隨后使用DAB盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)顯色，蘇木素復(fù)染，樹脂膠(武漢谷歌生物科技有限公司)封片，鏡下觀察染色情況。結(jié)果判定[8]：PGRMC1均定位于主要細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，腫瘤細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或黃褐色均勻顆粒為陽性細(xì)胞。結(jié)果判定主要是在10個(gè)高倍視野下觀察細(xì)胞染色情況，并根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行綜合評(píng)分，結(jié)果判定由2位高年資的病理醫(yī)師共同完成。細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細(xì)胞率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分(計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比<10%)，1分(計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比為10%～25%)，2分(計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比為>25%～50%)，3分(計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比為>50%～75%)，4分(計(jì)數(shù)陽性染色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比>75%)。最終得分=細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分×陽性細(xì)胞率評(píng)分，得分>2分判定為陽性，≤2分判定為陰性。

2 結(jié) 果

2.1宮頸癌患者組織標(biāo)本PGRMC1表達(dá)情況比較 宮頸癌組織中PGRMC1陽性表達(dá)率高于癌旁組織(67.71%vs.29.17%，P<0.001)，見表1、圖1。

表1 宮頸癌患者組織標(biāo)本PGRMC1表達(dá)情況比較[n(%)]

注：A為癌旁組織中陰性表達(dá)，B為癌組織中陽性表達(dá)。

2.2PGRMC1表達(dá)情況和宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 PGRMC表達(dá)情況與宮頸癌患者年齡、病理類型、肌層浸潤深度、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，但PGRMC表達(dá)情況與宮頸癌FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，且當(dāng)宮頸癌患者為FIGO分期Ⅱ期、腫瘤低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，PGRMC陽性表達(dá)率明顯升高(P<0.05)，見表2。

表2 PGRMC1表達(dá)情況與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系(n)

2.3PGRMC1表達(dá)情況與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系 所有患者出院后隨訪3～36個(gè)月，3年生存率為67.71%(65/96)。PGRMC1陽性、陰性患者3年生存率分別為58.46%(38/65)、87.10%(27/31)，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行分析，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.168，P<0.001)。

2.4影響宮頸癌預(yù)后的單因素分析 FIGO分期Ⅱ期、腫瘤低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PGRMC1陽性表達(dá)的宮頸癌患者3年生存率均顯著降低(P<0.05)，見表3。

2.5影響宮頸癌預(yù)后的多因素Cox回歸分析 腫瘤低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅱ期、PGRMC1陽性表達(dá)均為影響宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響宮頸癌預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

宮頸癌是主要由人乳頭瘤病毒感染導(dǎo)致的女性疾病。該疾病早期癥狀不明顯，一般出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)已處于中晚期，目前其發(fā)病機(jī)制尚不明確，但與病毒感染、多次人工流產(chǎn)、長期使用避孕藥等因素有關(guān)[9]。導(dǎo)致腫瘤病死率升高的重要因素是腫瘤出現(xiàn)侵襲和轉(zhuǎn)移，有研究發(fā)現(xiàn)，80%以上的宮頸癌死亡是由腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲導(dǎo)致的[10-11]。因此，早期診斷并防止腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲是改善宮頸癌預(yù)后的重要措施。近年來，隨著宮頸癌發(fā)病率逐漸升高，我國對(duì)宮頸癌分子生物學(xué)的研究也進(jìn)入更深的探索階段，已發(fā)現(xiàn)并證實(shí)多項(xiàng)分子指標(biāo)在宮頸癌的診斷、預(yù)后評(píng)估等方面具有重要作用[12-13]。

PGRMC1是近年發(fā)現(xiàn)的相對(duì)分子質(zhì)量為22×103～26×103的多蛋白孕酮復(fù)合物，廣泛存在于真核生物膜相關(guān)的孕激素受體蛋白家族，目前的研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1能夠結(jié)合并調(diào)節(jié)細(xì)胞色素17450酶，具有參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、P4信號(hào)通路和類固醇應(yīng)答等作用[14]。既往已有研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1的表達(dá)水平在多種腫瘤中升高[15-16]。

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中PGRMC1陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P<0.05)，提示PGRMC1在宮頸癌組織中表達(dá)水平升高。而既往也有研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1在交界性卵巢腫瘤與卵巢癌組織中的表達(dá)水平高于正常卵巢組織[17]。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1表達(dá)水平與宮頸癌FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，且當(dāng)宮頸癌為FIGOⅡ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，PGRMC1陽性表達(dá)率明顯升高(P<0.05)，表示PGRMC1表達(dá)水平與宮頸癌嚴(yán)重程度有關(guān)，并與疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系，其陽性表達(dá)提示患者預(yù)后不良。既往也有研究發(fā)現(xiàn)，PGRMC1表達(dá)水平與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)[18]。本研究經(jīng)隨訪以及單因素分析發(fā)現(xiàn)，PGRMC1陽性表達(dá)患者的3年生存率低于陰性表達(dá)患者(P<0.05)，提示PGRMC1表達(dá)水平能夠反映宮頸癌患者預(yù)后。同時(shí)本研究經(jīng)多因素Cox分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅱ期、PGRMC1陽性表達(dá)均為影響宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，進(jìn)一步證實(shí)PGRMC1對(duì)宮頸癌的發(fā)生、進(jìn)展有著重要的影響，能夠作為評(píng)估患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。可能是由于PGRMC1在介導(dǎo)孕激素的非基因組效應(yīng)中發(fā)揮重要作用，同時(shí)還能夠與血紅素直接結(jié)合激活細(xì)胞色素P450參與調(diào)節(jié)體內(nèi)類固醇、藥物代謝及性激素的合成，并且當(dāng)其表達(dá)水平升高時(shí)能夠?qū)е履[瘤對(duì)化療產(chǎn)生抵抗。而宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與雌孕激素相關(guān)，當(dāng)PGRMC1表達(dá)水平升高時(shí)能夠使性激素合成異常，從而導(dǎo)致宮頸癌患者病情逐漸加重，且預(yù)后不良。

綜上所述，PGRMC1的表達(dá)水平在宮頸癌組織中升高，且與宮頸癌患者臨床病理特征有關(guān)，PGRMC1陽性表達(dá)的宮頸癌患者預(yù)后相對(duì)較差，因此，PGRMC1有望作為宮頸癌病情判斷及預(yù)后預(yù)測(cè)的有效生物標(biāo)志物。