木棗不同發育時期總黃酮含量測定研究

梁曉娟

(山西省畜牧獸醫學校，山西 太原 030024)

黃酮類物質是一種天然的植物次生代謝產物，廣泛存在于各種植物的果實、葉片、花等器官中。其具有較高的營養價值和較強的抗氧化性，是很多營養保健品和化妝品的主要功效成分。棗味甜可口、營養豐富，含有多種功能營養成分，且具有藥用保健功效。黃酮類物質作為紅棗重要的活性成分之一，近年來被很多學者分析研究，但多集中在干棗黃酮成分測定，不同品種、不同器官中黃酮含量比較及棗黃酮的分離純化等方面。筆者以山西呂梁地區主栽品種木棗為材料，建立了一種棗果中總黃酮含量的測定方法，探索了木棗不同發育時期棗果總黃酮的動態變化規律，旨在為今后棗產品的開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗材料采自山西省農科院果樹研究所國家棗種質資源圃，分別在木棗果實膨大期、白熟期、半紅期和全紅期采樣。采回后立即切片置于60 ℃烘箱中烘干，再用粉碎機粉碎后儲存備用。

試驗試劑為蘆丁、無水乙醇、亞硝酸鈉、亞硝酸鋁、氫氧化鈉等，均為分析純。

1.2 試驗儀器

試驗儀器有電熱鼓風干燥箱(上海博迅9076MBE)，植物樣品粉碎機(上海標本XJA-100A)，電子分析天平(奧豪斯PR2247ZH/E)，超純水儀(北京普析GWA-UN3-F40)，超聲波清洗器(鄭州博大KQ-500DB)，紫外雙光可見分光光度計(上海元析UV-8000S)，高速冷凍離心機(德國Eppendorf 5810R)。

1.3 試驗方法

1.3.1 蘆丁標準溶液的配制

參考聶靜苑等的研究方法加以改進，準確稱取蘆丁標準品10 mg，加95%的乙醇溶液，超聲溶解10 min(功率90 W，水溫28 ℃)，冷卻后定容至50 mL容量瓶中，即得濃度為0.2 mg/mL的蘆丁標準溶液。

1.3.2 標準曲線繪制

分別吸取蘆丁標準溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL于6個25 mL的比色管中。各加入95%的酒精溶液至10 mL，加5%的NaNO2溶液1 mL搖勻，靜置6 min；加10%的AlNO2溶液1 mL搖勻，繼續靜置6 min；再加4%的NaOH溶液10 mL；最后加95%的乙醇溶液至刻度線，搖勻，絡合反應15 min.用紫外分光光度計測500 nm處吸光度，繪制蘆丁標準曲線，并對總黃酮測定方法進行驗證。

1.3.3 總黃酮含量測定

1) 總黃酮提取液制備。分別稱取各待測樣品粉末1 g于15 mL離心管中，用70%的酒精溶液定容至10 mL，超聲提取30 min(功率40 W，水溫70 ℃)，5 000 rpm離心10 min.收集上清液作為總黃酮提取液，試驗重復3次。

2) 總黃酮含量測定。取不同樣品的提取液各1 mL分別置于25 mL比色瓶中，按照繪制標準曲線的方法進行測定操作，測定中使用的乙醇濃度為70%.絡合反應結束后，測500 nm處吸光度，計算黃酮含量，以mg/g的蘆丁為單位。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線

以吸光度(A)為縱坐標(y)，蘆丁溶液濃度為橫坐標(x)，繪制出蘆丁標準曲線，見圖1.

由圖1可知，回歸方程為y=0.011 3x+0.005 8，相關系數R2=0.009 2.表明蘆丁標準品的濃度為8 μg/mL～64 μg/mL時，與吸光度線性關系良好。

圖1 蘆丁標準曲線

2.2 精密度試驗

取蘆丁標準溶液2 mL，按照標準曲線繪制方法，在500 nm處重復測定吸光度5次，得到平均吸光度x為0.2，標準偏差SD為0.003 7，相對標準偏差RSD為1.85%，說明此方法所用儀器的精密度良好。

2.3 重現性試驗

分別稱取重量約1 g的半紅期棗樣品干粉置于5個不同的離心管中，制備總黃酮提取液并測定總黃酮含量。測定結果見表1.

表1 總黃酮重現性試驗結果

由表1可知，計算得到RSD值為0.76%，表明本試驗重現性很好。

2.4 木棗不同發育時期總黃酮含量比較

根據建立的總黃酮測定方法，分別取樣測定不同發育時期棗果樣品中的總黃酮含量。結果如圖2所示。

圖2 呂梁木棗不同發育時期總黃酮含量

由圖2可知，木棗中總黃酮含量隨著果實的發育呈先升高后降低的趨勢。膨大期和白熟期的總黃酮含量較高，特別是白熟期，含量高達63.75 mg/g；從白熟期以后棗果中的總黃酮含量急劇下降，半紅期含量為14.19 mg/g；全紅期降到最低，僅2.06 mg/g.

3 討論與結論

黃酮類物質是植物代謝過程的轉化產物，可以影響果蔬的氣味、顏色，具有多種保健功效。黃酮類物質的積累與植物生長發育的過程和環境密切相關。鄒玲等發現，新疆駿棗棗葉中黃酮含量隨著物候期的變化由高逐漸降低，盛花期黃酮含量較高。王忠忠等研究表明，寧夏枸杞中黃酮類物質隨果實發育呈下降趨勢，原因可能是因為枸杞在色變期和成熟期光合產物較少，影響了黃酮的積累。本試驗結果也顯示，木棗果實中黃酮含量大小依次為白熟期>膨大期>半紅期>全紅期；黃酮在果實成熟期下降較快，可能是由于此階段果實中各物質轉化消耗了較多的光合產物，黃酮也隨之降解或合成了其它營養物質，致使黃酮含量降低。而木棗在白熟期總黃酮含量很高，可能因為此時光照強度高，光合作用強，黃酮合成所需底物充足。因此，為開發黃酮含量較高的棗產品，可以考慮在木棗白熟期采摘棗果。此外，本研究所建立的棗果黃酮測定方法操作簡單、精密度高、重復性好，可為今后其它棗樹品種黃酮成分的測定研究提供參考。