血小板功能檢測的研究進展

陳艷萍

（欽州市欽南區(qū)犀牛腳鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，廣西 欽州，535035）

血栓形成防治及控制出血風險平衡成為抗血小板藥物研發(fā)與疾病防治關(guān)注點。血管壁受損部位下，血小板迅速反應(yīng)造成黏附、擴散、形狀改變、聚集及釋放等，與凝血蛋白形成止血栓子堵塞受傷部位防范出血[1]。病理下血小板參與血栓形成、炎癥反應(yīng)及腫瘤轉(zhuǎn)移等病理狀況。近些年來血小板功能檢測被廣泛用于血小板疾病輔助診斷中，能有效監(jiān)測血栓前狀態(tài)及抗血小板治療療效，完善個性化治療方案。依據(jù)血小板多種功能研發(fā)出不同檢測方法，如光學比濁法測定血小板聚集功能、全血血小板聚集法、流式細胞術(shù)檢測血小板活化蛋白表達等[2]。血小板功能試驗對抗血小板治療監(jiān)測具有重要指導意義，但存在一定局限性。文章就對血小板功能檢測的研究情況如下分析，現(xiàn)報道如下。

1.血小板聚集功能測定

1.1 光學比濁法20 世紀60 年代光學比濁法提出并應(yīng)用至今，仍然作為血小板功能檢測金標準。原理為特定連續(xù)攪拌條件下，在富血小板血漿中添加誘導劑并促使血小板發(fā)生聚集，富血小板血漿濁度變小，光電管將濁度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娪嵦枺谟涗泝x上描繪出聚集曲線，計算血小板聚集程度。操作簡便且實用性較強，作為目前檢測血小板功能最為廣泛方法[3]。比濁法中常見誘導劑包括ADP、AA，膠原蛋白及腎上腺素，不同誘導劑能初步判斷血小板活化途徑，但仍然存在一定不足。步驟繁多，時間長無法用于床旁監(jiān)測，檢測結(jié)果受到多種外界因素影響，如血脂水平、血小板計數(shù)等。不同實驗室所得出結(jié)果可比性不強，無法完全模擬血小板所處的血流力學環(huán)境。

1.2 電阻抗法電阻抗法采取全血樣品，血小板經(jīng)誘導劑后發(fā)生凝集，浸泡在全血樣品中電極探針發(fā)生微小電流及電阻抗發(fā)生變化，并產(chǎn)生血小板聚集功能。全血環(huán)境下電阻抗法經(jīng)血小板誘導劑作用發(fā)生聚集，真實反映血小板在機體內(nèi)活動及黏附功能[4]。優(yōu)點為直接應(yīng)用抗凝全血，用血量少，無需離心及制備，反映血小板在全血環(huán)境中功能狀態(tài)。不足之處為往往結(jié)果受到紅細胞壓積、血小板數(shù)量影響，檢測期間需鑒別輕度血小板功能障礙方面，敏感度不足，難以滿足臨床工作需求。

1.3 Verify Now POCT 檢測Verify Now POCT 檢測利用全血床旁快速檢測方法，原理為促使血小板激活劑激活血液中個血小板，當激活后血小板與包被纖維蛋白原珠子發(fā)生聚集反應(yīng)，可用于檢測血小板活動，而聚集活性與血小板功能呈現(xiàn)正比。目前Verify Now POCT 檢測被用于藥物檢測，包括阿司匹林、P2Y12 受體拮抗劑等，優(yōu)點為全血作為標本，操作方式簡單易行，檢測結(jié)果重復(fù)良好，缺點為成本高，普及難度較大。

1.4 血栓彈力圖動態(tài)對血液體外凝固全過程加以監(jiān)測，從血凝塊生成至纖維蛋白溶解，全面評估及檢測凝血因子、纖維蛋白原、血小板聚集功能以及纖維蛋白溶解等。血栓彈力圖分析儀包括一次性反應(yīng)杯、金屬探針以及其上扭力絲組成，一旦形成血栓則反應(yīng)杯中金屬探針會受到樣本中切變力影響，左右旋轉(zhuǎn)[5]。金屬探針與扭力絲將凝血過程中凝血塊機械抗阻變化記錄在電腦上，與時間對應(yīng)繪制成圖像，稱之為血栓彈力圖。加入不同血小板誘導劑可繪制出血栓彈力圖，用于評估抗血小板藥物療效，指導個體抗血小板治療，預(yù)測患者出血及血栓風險。而實際應(yīng)用過程中，價格昂貴無法作為常規(guī)手段。

2.剪切力下血小板黏附和聚集功能測定

2.1 血小板功能分析儀PFA 應(yīng)用血流動力學原理對體內(nèi)血管損傷下高剪切應(yīng)力下血小板黏附和聚集能力模擬并分析。試劑盒組成包括毛細管、樣本池以及帶有中央孔的生物活性膜[6]。枸櫞酸鈉抗凝全血注入試劑盒貯存器內(nèi)，在復(fù)雜作用下抽吸全血，毛細管和生物膜中央孔在搞剪切應(yīng)力下暴露血小板，黏附、聚集在膠原包被的生物活性膜，隨后血小板接觸到激動劑，高剪切力、激動劑共同作用凝結(jié)血小板高剪切力、激動劑共同作用促使血小板凝結(jié)成塊，孔膜形成血小板血栓堵塞生物膜孔道。全血負壓抽吸至生物活動膜的孔被凝塊全部堵塞，血流停止時間定義為封閉時間。PFA 血小板功能分析儀模仿機體一期止血設(shè)計檢測裝置，初期止血功能缺陷血小板數(shù)量及功能異常等檢測價值高。

2.2 椎板式分析主要組成為椎板、自動染色裝置及圖像分析軟件。旋轉(zhuǎn)錐向聚苯乙烯平板血液施加層流剪切力，導致血小板黏附與聚集，實時采集黏附聚集圖像并經(jīng)過計算機軟件分析，包括2 個參數(shù)：血小板覆蓋平板百分比即表面覆蓋率、表面結(jié)合物的平均尺寸[7]。基于血小板在聚苯乙烯基板覆蓋標準平板上的體外黏附、聚集并反映血小板功能，血小板與底物相互作用，取決于多種因素，如紅細胞、凝血因子等。優(yōu)勢為少量血液，檢測快速，與體內(nèi)生理流動條件相似。不足為價格昂貴，需要專業(yè)人員操作。

3.小結(jié)

血栓性疾病最為重要手段為抗血小板治療及預(yù)防，然而治療過程中不同個體差異性會導致抗血小板治療不足及過度現(xiàn)象，引發(fā)血栓或出血不良事件發(fā)生。因此，監(jiān)測血小板功能尤為重要，可為臨床個體化抗血小板治療提供一定數(shù)據(jù)支持，為防范出血及血栓等不良事件發(fā)生提供一定幫助。但血小板在體內(nèi)參與凝血反應(yīng)為一項復(fù)雜過程，受到多種因素影響，血小板功能檢測方式多種多樣，實驗原理各不相同，檢測結(jié)果重復(fù)性、可比性差，缺乏公認權(quán)威抗血小板治療診斷標準，為此對抗血小板治療監(jiān)測方法及療效評估存在較大困惑。后續(xù)隨著對血小板功能實驗研究深入及新技術(shù)不斷研發(fā)，未來對抗血小板藥物監(jiān)測能實現(xiàn)規(guī)范化和標準化，實現(xiàn)個體化抗血小板治療，保障治療安全性和有效性。