梔榆洗劑質量標準研究

呂鎖忠 朱衛萍 吳安飛 曹昌娥 鄧 祎 鮑云惠

云南省曲靖市中醫醫院,云南 曲靖 655000

梔榆洗劑是根據曲靖市中醫醫院皮膚科診治尋常型銀屑病經驗處方開發的院內制劑，組方中包含地榆、梔子、苦參、防風等。作為院內制劑研究開發過程中，對方中主要藥味展開研究，為有效控制梔榆洗劑的質量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津，LC-2040C)；電子天平(島津，AP225WD，0.1mg/0.01mg)；超聲波清洗器(南京壘君達，UP250YHE)

1.2 試劑 試藥苦參對照藥材(121019-201407)、防風對照藥材(120947-201409)、梔子苷(110749-201919，供含量測定用，含量97.1%)均來源于中國食品藥品檢定研究院；甲醇[霍尼韋爾(上海)有限公司，Lot：T8LG1H]、乙腈(霍尼韋爾(上海)有限公司，Lot：T84A1H)均為色譜純；水為純化水。

1.3 供試品 梔榆洗劑3批樣品(配制批次分別為S2020002、S2020003、S2020004)及陰性樣品由曲靖市中醫醫院制劑室提供。

2 方法與結果

2.1 苦參TLC鑒別方法

2.1.1 供試品溶液 制備取梔榆洗劑3批樣品各30 mL，分別濃縮至流浸膏狀，加1 mL濃氨溶液,30 mL三氯甲烷攪拌，30 min超聲提取后過濾，取三氯甲烷液蒸干為殘渣，加三氯甲烷1 mL使溶解，制備為供試品溶液。

2.1.2 陰性樣品溶液 制備按處方比例取除苦參的梔榆洗劑所有中藥飲片粉碎混合均勻，取10 g，加2 mL濃氨溶液，60 mL三氯甲烷攪拌，30 min超聲提取后過濾，取三氯甲烷液，蒸干為殘渣，加0.5 mL三氯甲烷使溶解為陰性對照品供試溶液。

2.1.3 對照藥材溶液 制備取1 g苦參標準對照藥材，加3 mL濃氨溶液，80 mL三氯甲烷，30 min 超聲處理后過濾，濾液蒸成殘渣，加1 mL三氯甲烷溶解為對照藥材溶液。

2.1.4 鑒別方法 吸取各5～10 μL供試品溶液和陰性樣品溶液、1～3 μL對照藥材溶液，點于同一硅膠G板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇-濃氨溶液(5∶0.6∶0.3)放置10 ℃以下的下層溶液，展開，噴以碘化鉍鉀溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置顯相同顏色的斑點，陰性樣品溶液無干擾，如圖1所示。

1 2 3 4 5 1～3.供試品溶液;4.苦參對照藥材溶液;5.陰性樣品中溶液圖1 苦參TLC鑒別

2.2 防風TLC鑒別方法

2.2.1 供試品溶液 制備取梔榆洗劑三批樣品各30 mL，分別蒸干，殘渣加20 mL甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干成殘渣，加2 mL乙醇使溶解為供試品溶液。

2.2.2 陰性樣品溶液 制備按處方比例取除防風的梔榆洗劑所有飲片粉碎混合均勻，取5 g粉末，20 mL加甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干為殘渣，加2 mL乙醇使溶解為陰性對照藥材溶液。

2.2.3 對照藥材溶液 制備取2 g防風對照藥材粉末，加40 mL甲醇，30 min超聲提取后過濾，濾液蒸干為殘渣，加3 mL乙醇使溶解為防風對照藥材溶液。

2.2.4 鑒別方法 吸取各5～10 μL供試品溶液和陰性對照溶液、2～5 μL對照藥材溶液，分別點于同一硅膠GF254板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇(4∶1)溶液，按《中國藥典》薄層色譜法試驗，噴以10%硫酸乙醇溶液，于365 nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品溶液無干擾，如圖2所示。

1～3.供試品溶液;4.防風對照藥材溶液;5.陰性樣品溶液圖2 防風TLC鑒別

2.3 含量測定方法

2.3.1 色譜條件 色譜柱：GL Science C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，柱溫：40 ℃，流動相：0.1%磷酸-乙腈(90∶10)，流速：1.0 mL/min；檢測波長：238 nm，理論板數按梔子苷峰計算應不低于3000；進樣量10 μL。

2.3.2 溶液制備

2.3.2.1 供試品溶液的制備 取梔榆洗劑供試品，混勻，精密量取10 mL定量至50 mL容量瓶中，混勻過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.3.2.2 對照品溶液的制備 取梔子苷標準對照品8.43 mg，精密稱定，加甲醇溶液定量至10 mL量瓶中，得0.8186 mg/mL的梔子苷標準對照品溶液。

2.3.2.3 陰性樣品溶液的制備 按梔榆洗劑處方比例，稱取除梔子外其它全部飲片，照梔榆洗劑供試品生產工藝條件，制備缺梔子陰性對照樣品，再照供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液。

2.3.3 線性關系 考察取梔子苷對照品溶液適量，精密量取，分別制成含梔子苷8.185、 16.33、 40.84、 81.67、408.4 μg/mL 的系列對照品溶液，照“2.3.1”項下色譜條件實驗，橫坐標(X)為對照品濃度，縱坐標(Y)為峰面積，結果：在8.185～408.4 μg/mL范圍內梔子苷濃度具有良好線性關系r2=0.9997。

圖3 標準曲線圖

2.3.4 精密度考察 取同一梔子苷對照品溶液(含梔子苷40.92 μg/mL)，精密量取，在“2.3.1”項下色譜條件連續進樣6次，測定峰面積值。RSD為0.6%，表明儀器的精密度良好。結果見表1。

2.3.5 重復性考察 取梔榆洗劑(批號S2020004)6份，按“2.3.2.1”供試品制備方法處理，記錄峰面積，計算梔子苷含量，結果每1 mL樣品中的平均梔子苷含量為0.08229 mg，RSD為1.8%，表明本方法的重復性良好。結果見表2。

2.3.6 穩定性考察 取梔榆洗劑(批號S2019004)供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h按“2.3.1”項下色譜條件進行分析，記錄峰面積。結果梔子苷的RSD為0.26%。表明在24 h內供試品溶液質量穩定。結果見表3。

2.3.7 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批梔榆洗劑(批號S2020004)5.00 mL共6份，精密量取，再分別精密加入濃度為0.0409 mg/mL的對照品溶液5.0 mL，按“2.3.2.1”項下的方法處理，制備供試液，分別測定，計算回收率，結果見表4。

表1 精密度考察結果

表2 重復性考察結果 (n=6)

表3 穩定性試驗測定結果 (n=6 )

表4 加樣回收率試驗結果 (n=6)

2.3.8 專屬性試驗 取陰性對照樣品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進樣分析，色譜圖如圖3所示。結果色譜圖中在梔子苷相應出峰位置未出現干擾峰。

A.梔子苷標準對照品圖;B.陰性樣品圖;C.供試品圖圖4 高效液相色譜圖

2.3.9 樣品測定 取不同批次的供試品3批，精密量取，分別制備成供試品溶液，制備方法見“2.3.2.1 ”項下，測定色譜條件見“2.3.1”項下。按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標法計算梔子苷含量。通過試驗確定3批梔榆洗劑中每1 mL梔榆洗劑中含梔子以梔子苷計(C17H24O10)計，結果見表5。

結果分析：通過對梔榆洗劑中梔子苷的含量測定的方法學研究，可以看出采用的高效液相色譜法具有強專屬性、高靈敏度、重現性好、高準確度的特點。

3 討論與結論

梔榆洗劑是由11味中藥飲片以水為溶媒經滲漉、煎煮提取制成的醫院制劑，成份復雜。經系統性預試驗考察表明該制劑主要含有生物堿、黃酮類成分。

表5 樣品含量測定結果 (n=3)

定性試驗結果僅有苦參和防風成分供試品與對照品在相應位置上主斑點顯色清晰、陰性對照無干擾的。在此基礎上對有苦參、防風薄層色譜方法的展開系統、供試品提取和前處理方法、點樣方式和點樣量進行篩選優化，再對方法的耐用性進行考察。如苦參，參考文獻[1-2]分別用乙酸乙酯、甲醇、鹽酸加乙酸乙酯、濃氨加三氯甲烷共4種方法進行前處理提取，結果以三氯甲烷提取實驗結果最理想。防風參考文獻[3-4]分別用丙酮、乙酸乙酯、水飽和正丁醇、甲醇、乙醇對供試品蒸干殘渣進行提取，實驗結果以甲醇提取效果最好。最后根據實驗綜合結果確認了本次的實驗方法。

定量檢測選擇梔子苷作為含量控制指標。梔榆洗劑中君藥經查詢文獻沒有特征性成分，梔子做為處方中的臣藥，其有效成份梔子苷[5]易溶于水，與梔榆洗劑以水為溶媒提取的工藝相適應，故以梔子苷為控制梔榆洗劑的含量指標進行考察。通過方法學研究，結果表明，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1%磷酸-乙腈(90∶10)為流動相，檢測波長為238 nm。結果梔子苷在濃度范圍內呈現良好的線性關系，精密度、重復性、穩定性、平均加樣回收試驗結果符合要求。

梔榆洗劑的薄層色譜鑒別方法和含量測定方法專屬性強、簡單易行、節約時間和成本，可用于梔榆洗劑的質量控制。