實驗用雪貂的飼養管理探析*

何滋林 姚敏樺 韋 濤 趙博厚 祁藝新 紀慶超 常雯雯 劉曉東 隋宏書

(山東第一醫科大學組織學與胚胎學教研室，泰安 271000)

雪貂(Mustelaputoriusfuro)，哺乳綱食肉目鼬科貂屬。成年雪貂平均體質量0.5～2.7 kg，平均體長33～41 cm，平均尾長7.6～10 cm，壽命為7～10歲。雪貂屬夜食性動物，性情溫和、行動敏捷且好奇心強。其消化系統短且缺乏盲腸，因此機體代謝快。

在普通條件下，雪貂生理狀況易受多種因素影響，容易患病。因此，建立一套科學的、可行的且規范的飼養方法非常重要。結合實驗動物管理規定和本實驗室雪貂飼養管理的經驗，總結出一套規范、實用及可行性高的操作程序。

1 生活環境

1.1 居住環境

根據王寧等[1]報道，動物生物安全實驗室與生活區的距離應符合《生物安全實驗室建筑技術規范》的要求，籠舍和設施的設計應充分考慮為動物提供舒適的環境和足夠的空間。籠-盆結合籠舍，籠和盆采用不銹鋼和聚乙烯材料，材料無毒、硬度大且耐磨性強；籠網格間距3 cm且網絲直徑2 mm，防止小雪貂逃逸。籠舍較大的空間滿足了雪貂愛群居和活潑好動的需要；塑料底盤內盛有由優質木屑和散砂按5∶1配成的墊料。墊料應該保證清潔、干燥、吸水、無蟲以及毒害物質不能超標，不能含有殺蟲劑和殺菌劑。分層飼養既能節約飼養面積，又利于通風。在分娩期，雪貂籠內放置內置產籠可以提高雪貂分娩成功率，同時也為幼崽提供安全舒適的環境。

1.2 外周環境

根據王寧等[1]報道，雪貂生活的適宜溫度是22～24 ℃，相對濕度是40%～60%，雪貂缺少汗腺，當溫度超過32 ℃，成年貂會焦躁、緊張不安，甚至出現熱虛脫的癥狀。雪貂主要通過呼吸系統散熱，所以要注意控制飼養間溫度。雪貂的呼吸道對異物敏感，過多的灰塵會刺激雪貂氣道，飼養間要定期進行除塵操作。空調處理比較簡單，按一般舒適性的空調系統進行設計，包括進風和除塵裝置、消毒設備以及處理室內溫度和相對濕度的設備。

2 飼養方式

飲用水要求：(1)煮沸消毒滅菌，無需蒸餾、離子交換和反滲透，以滿足動物對微量元素的需求；(2)溫度保持30 ℃左右，防止水溫過高或過低刺激雪貂消化道；(3)隨時注意水質變化，定期對水壺進行消毒處理，防止細菌滋生，消毒周期一般為3 d[ 1 ]。飲水裝置：動物專用滾珠水壺。

雪貂對營養要求比較高，飼喂市場上銷售的雪貂顆粒料，會出現營養不良，生長緩慢，分娩后的母貂甚至出現食仔的應激反應。根據馬建章等[2]報道，雪貂生長發育情況見表1所列，3月齡內的雪貂使用羊奶喂養；4月齡內雪貂生長旺盛，應該選用高蛋白質及高脂肪的飼料；4月齡后生長放緩，使用高蛋白質及高脂肪的飼料，雪貂會出現溢脂(貂毛變黃、脫毛，首先出現“老鼠尾”)。因此，改進飼料：將熟雞肉和貂哺乳期膨化混合飼料(愛得利都牌，主要成分見表2所列)使用攪拌機充分混勻，制成不同生長階段的肉粒狀飼料，為充分符合雪貂的肉食特性，投喂時適當添加羊奶，同時以雪貂顆粒料作為輔食。飼料保證蛋白質不低于38%，脂肪不低于18%。

表1 雪貂生長發育情況[2]

表2 愛得利都貂哺乳期用膨化混合飼料產品主要成分(%)

表3 不同生長階段雪貂飼料配方

3 雪貂的實驗操作

3.1 抓取保定

雪貂牙齒鋒利會帶來危險，抓取時必須佩戴防護手套。單手抓住雪貂的頸背部，將其四肢懸空進行固定，大多數雪貂在這種姿勢下比較放松和配合，可以進行皮下或腹腔藥物注射(圖1)。

圖1 雪貂抓取

3.2 雪貂體溫及體質量的測量

由于體溫及體質量變化是構建流感病毒模型后，病程進展變化的重要指標，因此，除了需在生物安全柜內進行測量外，也需要在每天的同一時刻進行測量以排除動物體溫和體質量在1 d內的波動。體溫測量時，將甘油潤滑后的電子體溫計插入雪貂直腸，保持體溫計讀數5～10 s無變化后進行記錄。雪貂的正常體溫范圍是37.8～40 ℃，平均體溫是38.8 ℃，電子體溫計檢測操作簡便快捷、數值穩定且記錄準確，對雪貂無影響。測量體質量時，將雪貂從籠具內取出放于電子秤上保持讀數靜止3 s以上再進行記錄，精確度0.01 kg。

3.3 雪貂麻醉

根據張濤等[3]報道，麻醉劑的配方和用量見表4所列，使用配制的麻醉劑為舒泰50和速眠新Ⅱ。將舒泰50和速眠新Ⅱ按照1∶5的體積比充分混合，每只雪貂使用劑量為0.05～0.08 mL/kg。按照上述方式抓取雪貂使其仰臥，使用75%乙醇棉球在雪貂大腿內側消毒，將麻醉劑注入其大腿肌肉組織中。每只雪貂注射0.08 mL麻醉劑后，觀察雪貂眼睛及四肢的松弛狀態和程度來確定是否完全麻醉。研究統計顯示,雪貂在該劑量下維持麻醉時間為45～90 min，該劑量能保證對雪貂有效的麻醉，同時不會過度麻醉導致雪貂長時間不能蘇醒。淺麻醉用在流感病毒經鼻造模，因為雪貂本身的噴嚏反射會影響造模的成功率；雪貂采血或處死時，需要深層麻醉，采取注射麻醉方法，保證對雪貂操作有足夠時間，同時嚴格控制麻醉劑的用量，降低過度麻醉給雪貂和實驗造成的影響。另外，麻醉劑需要專人負責管理，提前配制好足量的麻醉劑。由于存在個體差異，同質量雪貂會出現耐受性情況，可適當補充注射麻醉劑。實驗已通過山東省第一醫科大學福利倫理審查，編號：山東省醫動批：NO.2021-662。

表4 麻醉配方和用量[3]

3.4 雪貂心臟采血和分離血清

Matsuoka等[4]實際操作顯示，雪貂前腔靜脈血管較細，頸部皮膚較疏松，針頭容易滑落，所以采用易操作且成功率較高的心臟采血，且一次采血不能超過10%的動物血液量。將雪貂按上述方式抓取和麻醉，仰臥平放在生物安全柜內的操作盤中，使用剃毛器將雪貂胸前的體毛剪掉，用手探明心臟搏動最強部位，通常在胸骨左緣的正中，位于倒數第2～3肋骨中間。采血部位用75%乙醇擦拭消毒，使用1 mL一次性注射器垂直緩慢刺入心臟，緩慢拔針抽血，直到血開始填充注射器，收集所需血量后，拔出針頭，使用消毒脫脂棉輕壓注射部位止血。將血液轉移到血清分離管，室溫靜置25 min以上，12 000 r/min離心10 min，將分離血清轉移至另一干凈離心管中，-20 ℃保存。研究顯示雪貂每周一次心臟采血0.5～0.6 mL，連續采血不超過兩個月，對雪貂健康狀況和體征指標無明顯影響。

3.5 雪貂處死和組織取樣

雪貂在組織取樣及剖檢前需要執行安樂死。使用0.4 mL麻醉藥注射雪貂大腿肌肉，使其在1～2 min深度麻醉，可以通過心臟穿刺采集大量血液(50 mL左右)，然后心臟穿刺注射安樂死 Euthanasia Ⅲ 溶液(每毫升包含50 mg苯妥英鈉和390 mg戊巴比妥鈉)[4]。正確收集雪貂的組織樣本對于分析非常重要，需使用單獨的器械收集不同組織樣品，將要收集的組織所需要器具放在用75%乙醇消毒的燒杯中，每個組織單獨放入一個燒杯。用無菌紗布輕拭擦凈，將采集的組織放入預先稱質量和標記清晰的收集管內盡快凍存。根據Matsuoka等[4]報道，理論上，雪貂組織應優先收集病毒含量低的組織，如腦、心、肝、脾及腎組織，使高病毒含量器官(如肺)造成的污染降低到最小。

3.6 實驗結束廢棄物和動物的處理

實驗結束后，在不影響實驗結果的情況下，應選擇“仁慈終點”，避免動物延長承受痛苦的時間[1]。實驗產生的固體廢棄物主要包括實驗過程中使用的儀器、一次性器具、動物尸體、組織等。對于價值較高可以重復使用的儀器(如剪刀、解剖刀等)，使用高壓蒸汽滅菌法或微波消毒法進行滅菌消毒，這兩種方法具有穩定可靠的滅菌作用[5]。一次性器具用后必須毀型和無害化處理，嚴禁重復使用[6]。動物尸體和組織切片裝入專用醫療垃圾袋中，仔細消毒后放入冷柜中貯存，轉交專業公司進行無害化處理[5]。

4 小結與展望

建立一套科學、可行且規范的雪貂飼養管理方法，對從事實驗雪貂相關的科研有重要的指導作用和現實意義。飼養實驗雪貂時，應合理控制雪貂飼養間的溫度、相對濕度、噪聲、空氣質量等環境因素，提供較大的飼養空間，科學控制飼料及飲水。下一步，將繼續嘗試研究一種科學管理孕期雪貂的方法，以降低雪貂流產率。