探究不同處理方法清除軟式內鏡生物膜的效果

彭顯茜

（鄭州人民醫院南部院，河南 鄭州450000）

0 引言

軟式內鏡，通常指的是消化內鏡或是呼吸內鏡，近年來廣泛應用于臨床，且數量持續走高。但在進行軟式內鏡檢查的過程中，也可能導致患者出現交叉污染而引發醫院感染，造成這一現象的原因，主要是由于內鏡早使用的過程中可能接觸到消化道的細菌，以及胃道之中分泌的黏液[1]。且軟式內鏡結構較為復雜、材質較為特殊，大部分無法耐受高溫消毒的操作，因而其使用后進行清洗消毒工作的難度也有顯著提升。本次研究主要探究重復使用的軟式內鏡生物膜應用不同處理方法的清除效果。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2020年5月至2021年4月期間內鏡中心使用的內鏡胃鏡以及腸鏡，共660件，其中包含390件胃鏡、270件腸鏡。將其隨機均分為2組，分別應用常規過氧乙酸處理以及戊二醛消毒劑處理，配套使用的內鏡清洗消毒機器為全自動消化內鏡消毒機，人工生物膜顯示細菌為細菌銅綠假單胞菌，所用培養基及其試劑均為國內市售產品。

1.2 方法

1.2.1 軟式內鏡污染生物膜

依據國家標準《醫院消毒衛生標準》（GB 15982-2012），對進行消毒或是滅菌處理后的內鏡進行檢測，采用無菌注射液抽取含有中和劑的采樣液約40-60mL，并經內鏡活檢管道進行諸如，同時采用100mL的無菌藍蓋試劑瓶對采樣液進行收集，對其中菌落計數進行記錄，記為α；另采用一次性無菌內鏡刷對內鏡腔面反復刷洗，隨后將刷頭放置于無菌藍蓋試劑瓶之中，另抽取含有中和劑的采樣液約40-60mL，對其中菌落計數進行記錄，記為β。如若α值為0，未檢出細菌，則表示消毒檢測合格，如若α合格但β值相較于α值有顯著提升，則說明內鏡腔體之中有生物膜形成。

1.2.2 清除軟式內鏡生物膜效果

將1.2.1檢驗結果之中感染生物膜的內鏡進行分組，分別應用一元過氧乙酸以及戊二醛消毒劑進行清洗消毒，并探究其清除效果。其中參照組應用多酶清洗液聯合戊二醛消毒劑對軟式內鏡生物膜進行清除，研究組則使用多酶清洗液聯合一元過氧乙酸對其進行清除。兩組均經《軟式內鏡清洗消毒技術規范》（WS 507-2016）之中的要求進行軟式生物內鏡生物膜處理，連續使用14d后，經1.2.1的方法進行采樣，檢測內鏡是否污染生物膜，評價兩種方法對生物膜的預防控制效果。

1.3 觀察指標

不同清洗消毒方法清除生物膜的效果。

1.4 統計學方法

以SPSS 22.0軟件進行數據分析，數值變量、無序分類資料以（±s）、%表示，t、檢驗；組間對比以P=0.05為界值，P＜0.05則表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 軟式內鏡生物膜感染情況

消毒水平：所有內鏡均經常規高水平消毒后，對其進行消毒效果檢測，結果顯示，消毒合格率為100%。

生物膜檢測：采用一次性無菌刷對軟式內鏡進行反復刷洗10次后，將刷頭進行保留并通過隨機取樣法進行采樣，共抽取198件進行監測（包含117件胃鏡以及81件腸鏡），結果發現，菌落指標超出常規標準的有63件，占比27.27%。。

去除內鏡生物膜試驗：參照組31件存在生物膜的樣本，采用多酶清洗液聯合戊二醛消毒劑清除方式，研究組32件存在生物膜的樣本則使用多酶清洗液聯合一元過氧乙酸方式，2種方式均經指導下進行6個循環，確保去除污染的生物膜，并對其進行2次鑒定后，將其菌落計數記為β1。由此可以得出生物膜效果可以通過清除率進行表示，清除率為（β-β1）/β*100%，其中（β-β1）代表的含義為生物膜中細菌清除數量，經對比分析后發現，研究組清除率為96.88%，相較于參照組80.65%具有顯著優勢（4.119，P=0.040＜0.05），差顯著具備統計學意義，說明一元過氧乙酸可以有效去除內鏡管腔生物膜，效果相較于戊二醛有顯著優勢。

2.2 長期使用的抑制作用

經高水平消毒后，將菌落計數記為α，另采用采用一次性無菌刷對軟式內鏡進行反復刷洗10次后，將刷頭進行采樣后得到的菌落計數記為β，2種數據之間呈現偏態分布的情況，因而本次研究之中另采用獨立樣本秩和檢驗對2組的α值、β值進行檢驗。研究組與參照組分別使用一元過氧乙酸以及戊二醛進行連續消毒14d后，菌落計數均有顯著下降。但通過秩和檢驗，對2組內鏡消毒后的菌落計數進行對比，發現差異具備較為顯著的統計學意義，該結果充分說明一元過氧乙酸對內鏡的消毒效果優于戊二醛且經過生物膜檢測試驗，發現一元過氧乙酸組內鏡β值均＜20CFU/件，而戊二醛組的均值則高達89CFU/件，通過秩和檢驗對一元過氧乙酸和戊二醛兩組的菌落計數β值進行對比，充分證明了一元過氧乙酸可有效去除內鏡管腔形成的生物膜，相較于戊二醛有顯著優勢，差異具備統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

隨著內鏡診療應用逐漸廣泛，內鏡消毒質量問題也逐漸受到臨床重視。軟式內鏡管腔較為狹小，清洗效果并不十分良好，該材質往往不耐高溫或是高壓，因而大部分軟式內鏡無法接受高溫高壓消毒。在此情況下，可能導致很多消化道之中的細菌、黏液、組織、血液甚至是糞便等殘留于管腔之中。在對其進行清理的過程中，往往需要通過毛刷，對內鏡管腔進行反復刷洗，但僅通過流動水或是常規清潔劑、消毒劑進行沖洗，并不足以將內鏡管腔沉積的物質進行清除[2]。以往研究之中發現，即便是通過無菌毛刷對內腔鏡進行反復沖洗后，仍舊可能存在腔鏡生物膜污染風險，本次研究之中的結果也充分證實了這一結果，同時該結果可能導致高水平消毒后，監測采樣的結果成纖維假陰性，不利于后續研究的開展。

內鏡生物膜的形成主要受到多種因素的影響，包括未及時進行內鏡預處理或是內鏡手工清洗不到位，如若內鏡使用后并未30min內進行預處理，則可能導致生物膜的形成，需要進行強化手工清洗。如若內鏡存留的污染物大小較大，則可能導致細菌對消毒劑的消毒情況產生一定抵御效果，導致消毒效果并不十分強。如若一旦形成生物膜，則可能導致消毒劑的作用減小至1/1000左右，由此可見，生物膜是導致軟式內鏡消毒滅菌失敗最為重要的原因，因而臨床之中尋找一種較為高效的生物膜去除方式，是當前內鏡診療、消毒工作較為重視的工作。近年來，如何清除軟式內鏡生物膜已經逐漸成為內鏡診療之中需要直面的問題，臨床既往的研究發現，經過乙酰半胱氨酸能夠起到較好的抗菌且對生物膜造成破壞的效果，因而如若在臨床之中在軟式內鏡進行清洗前，使用乙酰R半胱氨酸進行浸泡，能夠更好地降低細菌含量，經檢測發現菌落數目有顯著降低。當前條件下生產的生物膜清洗劑，能夠保障生物膜與水進行較為緊密的結合，充分保障水流動或是生物膜清洗劑流動的情況下，將生物膜帶動，并將其中的菌落以及有機物急性較為全面的分解，充分保障殺菌效果的提升[3]。而在銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、分枝桿菌形成的生物膜時，臨床研究之中發現，鄰苯二甲醛以及過氧乙酸的清除效果相較于戊二醛更為顯著。同時如若構建3中內鏡生物膜模型，分別使用上述消毒劑進行殺菌、消毒，能夠得出與上述實驗結果相同的結論，且如若對溫度條件進行控制，還能夠發現，溫度越高，則清洗劑對生物膜的清除率越高，如若溫度超過40℃，則各類清洗劑的生物膜清除率均超過95%。

本次研究主要對比內鏡專用過氧乙酸與戊二醛清除生物膜的效果，研究結果說明研究組一元過氧乙酸的清除生物膜的效果較好，且內鏡消毒效果也較為突出，并無細菌檢出，在6循環后生物膜清除率達到95%以上，相較于參照組戊二醛的生物膜清除效果與消毒效果，具備顯著優勢（P＜0.05）。分析其原因，主要是由于過氧乙酸能夠更好地殺滅多種微生物，主要包括真菌、細菌、病毒和芽孢等，其應用效果較好。生物膜主要指的是依附于內鏡管腔之中的表面被細菌胞外大分子包裹的有組織的細菌群體，隨著臨床醫療技術的不斷發展進步，導尿管、動靜脈導管甚至是人工支架等表面均有生物膜形成的可能，該情況會導致醫院感染率有顯著提升。且如若生物膜形成，會使得細菌的耐藥性大幅提升，在生物膜存在的前提下，抗菌藥物往往無法更好地滲透，導致滲透不全或是滲透緩慢等情況發生。生物膜之中的細菌微環境發生改變，對抗菌藥物的敏感性逐漸減弱，同時如若部分基因，誘導生物膜逐漸變厚，可能導致其更加適應環境、更為難以進行治療。當前臨床之中主要通過超聲、機械摩擦、點擊等方式對生物膜進行去除，也可利用噬菌體穿透細菌細胞膜繁殖的特性控制生物膜，部分細菌真菌等微生物可以分QS酰基高絲氨酸內酯、蔗糖脂肪酸、多糖解聚酶、酯酶抑制生物膜的形成，或者使用金屬離子、光敏劑、抗菌生物材料、藥物等防治生物膜。本次研究之中還發現，且經連續14d的使用后，研究組的所有內鏡均未二次形成生物膜，對其菌落計數進行對比，結果相較于參照組同樣具備顯著優勢，差異具備統計學意義（P＜0.05）。該結果充分證明了一元過氧乙酸的應用效果，同時臨床之中對于生物耐藥機制以及對其進行預防控制方式的研究不斷深入，日后研究之中能夠取得更為良好的進展。

總而言之，內鏡應經過徹底的清洗才能夠接受有效的消毒，如若長期未得到及時有效的清洗會導致細菌滋生，逐漸對消毒劑的殺菌作用產生抵抗。因而在進行內鏡消毒前應對其進行徹底的清洗，并使用一元過氧乙酸進行消毒。該消毒方式能夠更好地保障軟式內鏡生物膜的清除效果，同時在實際應用中進行長期使用，能夠充分抑制內鏡生物膜的形成，保障患者檢查過程中的安全性，應用效果良好，值得進行臨床推廣應用。連續使用一元過氧乙酸14天后，并未再次形成生物膜，更好地保障了一元過氧乙酸消毒液的應用價值，同時如若想要徹底消除軟式內鏡管道內的生物膜，盡可能選擇一元過氧乙酸并采取手工刷洗的方式，充分保障消毒效果，利于患者檢查過后院內感染率的降低。