禽流感的診斷與防控

文│周金輝（宜春市科學院）

近年來，隨著家禽養殖業的不斷發展，禽流感的發生也呈現暴發的流行趨勢，一旦發生流行，會威脅家禽養殖業的安全，因此需要提高重視，切實做好禽流感的診斷和防控工作。

一、流行病學

野禽是禽流感病毒的儲存宿主，水禽可將病毒傳染給家禽。鴨，尤其是雛鴨，常感染禽流感病毒但很少表現出明顯癥狀。病毒在腸道內進行復制，隨糞便排放到環境。禽流感病毒可通過養殖人員和被污染的生產設備的移動而再次進行傳播。有些國家的活禽市場也是禽流感病毒傳播的重要途徑。

由高致病性禽流感（HPAI）病毒引起的雞和火雞疾病，歷史上稱之為“雞瘟”。現今，除了在過去一些毒株的命名，如Afowplague virus/Dutch.27（H7N7），“雞瘟”這一術語已不再被使用。高致病性禽流感病毒能夠導致動物不表現任何癥狀而突然死亡。如果發病家禽在48小時后能夠幸存下來，則會出現產蛋停止、呼吸困難、流淚、腹瀉、頭部與脖頸水腫、無羽毛部位皮膚發紺等癥狀。受感染家禽也可表現出神經癥狀，如頭頸震顫、不能站立、歪脖和其他不正常姿勢。

低致病性禽流感（LPAI）病毒的感染通常可導致動物出現厭食、精神沉郁、產蛋下降、呼吸道疾病和鼻竇炎等癥狀，LPAI病毒對養禽業同樣可造成一定的影響，尤其是火雞可造成較大程度的經濟損失。由于禽流感病毒常與其他病毒、細菌和支原體等發生混合感染，并且弱毒疫苗的使用或者是由于通風不暢和過度擁擠造成的環境壓力均能夠加劇家禽和火雞在發病時的臨床癥狀。禽流感病毒可以通過野鳥的糞便以高濃度排出，并且在寒冷環境可長時間存活。病毒主要通過種間傳播、周期性地感染易感宿主，也就是叢林野鳥尤其是野鴨，傳播給家禽和火雞。因此，野鳥棲息地將加速禽流感病毒的傳播。人們假設禽流感病毒在大群的野生鳥類中能維持著較低水平的流行狀態，甚至是在遷移和過冬期間，但目前仍然不能清楚地解釋A型禽流感病毒是如何長期存在于這些野生鳥類的體內。通過加拿大開展的野鴨研究發現，野鴨在大批往南遷徙之前，已有多達20%的幼禽輕微感染了禽流感病毒。盡管雀形目和鸚形目鳥類不是LPAI病毒的自然宿主，但是它們也可以在暴露環境中感染家禽，尤其是家養和籠養鴨。在許多國家也經常能從進口的籠養鳥中分離到禽流感病毒。活禽市場對禽流感的流行病學研究有著至關重要的作用。歐亞一非H5N1禽流感的流行明確證實了家禽與野鳥（尤其是野鴨）混合飼養的相關風險，流感病毒通過在一些品種的禽類體內進行適應和在進出市場禽類的無規律流動均能夠促使病毒迅速傳代。

二、致病機理

禽流感病毒在組織中傳播，依賴于特定組織中蛋白酶類型和病毒血凝素分子結構。血凝素前體（HA0）翻譯后裂解形成以二硫鍵相連的HA1-HA2兩個亞單位蛋白，產生具有感染性的病毒顆粒，獲得生物學活性。大多數禽流感病毒亞型，其血凝素可被宿主細胞特定蛋白酶裂解，如僅在呼吸道和消化道上皮細胞中發現的類胰酶蛋白酶。強毒亞型的HA裂解位點存在多個堿性氨基酸，如精氨酸或賴氨酸，易于被大多數宿主組織細胞內的蛋白酶識別并裂解，從而導致全身感染。經研究表明，低致病性禽流感病毒經自然野禽宿主傳播到家禽宿主后，可發生突變轉變成高致病性禽流感病毒，這種改變是不可預知的，可能發生在低致病性禽流感病毒在家禽中傳播后不久，也可能是傳播幾個月后。

三、臨床癥狀

家禽感染禽流感潛伏期長短不等，個體自然感染為3天，全群感染為14天。潛伏期長短與病毒毒力、感染途徑等有關。臨床表現也有所不同，有些不明顯，有些比較溫和。在某些情況下，病情嚴重，病死率較高。在一些因素如過度擁擠、通風不良、并發感染等影響下，可能加速疾病的進程。高致病性禽流感亞型可引起禽群突然大量死亡。存活的病禽臨床癥狀比較明顯，表現出呼吸困難、腹瀉、頭部水腫、鼻竇炎和流淚等癥狀。蛋禽感染后會出現產蛋量急劇下降的現象。

四、診斷

對于嚴重的禽流感疫情，很難與嗜內臟型強致病力的新城疫或禽霍亂進行區分。溫和型禽流感與禽類其他的呼吸道疾病的區分可采用病毒分離和鑒定的方法進行實驗室檢測。咽部和泄殖腔拭子、糞便及內臟器官的混合樣品均可用于實驗室檢測。

1.組織懸浮液接種到9～11日齡雞胚，培養3～7天后，收集尿囊液，檢測血凝活性。

2.禽流感病毒可通過免疫擴散試驗來確定，方法是將急性發病期病料接種于雞胚絨毛尿囊膜，收集上清液，與所有禽流感病毒抗原性相同的核蛋或基質蛋白進行血清學反應。

3.廣泛的特異性抗血清可被用于血凝抑制試驗進行血凝抑制（HI）和神經氨酸酶抑制（neuraminidase inhibition，NI）試驗，特異性抗血清應由參考實驗室制備。

4.高致病性禽流感病毒亞型均為H5或H7型抗原。然而，也發現了許多低致病性的H5和H7型病毒。為測定其致病性，靜脈接種10羽4～8周SPF雞，8日內死亡率大于75%或靜脈接種致病指數（ intravenous pathogenicity index，IVPI）大于1.2的毒株，可判定為高致病性病毒。

5.RT-PCR和實時RT-PCR通常用于快速檢測及病毒亞型的鑒定，尤其是在感染的養殖場已經檢測并確定病毒的類型的情況下，對隨后疫情的暴發進行快速識別。病毒M基因保守序列引物可用于樣品中所有亞型流感病毒的篩選，如果檢測結果為陽性，再用H5或H7亞型特異性引物進行快速鑒定。

6.商品化抗原免疫測定法可用于家禽中禽流感病毒的快速檢測，通常以核蛋白單特異性抗體為基礎，一般可檢測出任何亞型的禽流感病毒。但是該方法敏感性較低，只限于群體檢測。

五、發病機制

禽流感的發病機制與哺乳動物流感有所不同，禽流感病毒可以在消化道和呼吸道內同時進行復制。大多數HPAI病毒的感染，還會出現病毒血癥、多灶性淋巴細胞和內臟器官的壞死，并導致胰腺炎、心肌炎、肌炎、腦炎的發生。在發病若干天后，可在病死雞和火雞的呼吸系統、消化系統和心臟發現點狀皮下出血和滲出液滲出。火雞也可能出現氣囊炎和肺充血。禽流感病毒感染的禽類，在發病的3～7內可以檢測到中和抗體，第二周達到高峰，并且會一直持續18個月。

六、防控

一旦發現禽流感應立即通報。暴發該病的國家，通過撲殺感染群體、限制活禽移動及實施嚴格的消毒程序來控制疫情的蔓延。對于進口禽類，應采取隔離檢疫措施。在水禽遷徙路線上的高風險區域，家禽應飼養在防鳥建筑物中。

由于國際貿易限制及非疫區的國家通常禁止使用疫苗進行免疫接種，而且實施疫病控制措施成本較高，一些國家接受溫和型致病亞型的存在。在這些國家中，為防控低致病性禽流感，商品化滅活疫苗是可以使用的，尤其是火雞。目前研究人員已經構建了流感血凝素蛋白重組疫苗及含HA基因的禽痘病毒重組疫苗。

針對某一特定禽流感病毒亞型有效的疫苗對于新出現的亞型可能會沒有免疫效果，而且考慮到疫苗存在毒力返強的風險，不允許使用活疫苗。目前，一種弱毒、冷適應的重組流感病毒疫苗已在人類臨床試驗中取得了良好的效果，大力推進了類似家禽疫苗的研制。