Osborne法分級提取五味子蛋白及抗氧化活性比較

王海東，韓榮欣，張紅印，肖鳳琴，于 倩，龐會娜，李光哲，嚴(yán)銘銘,2, ，趙大慶

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春 130117；2.吉林省中藥保健食品科技創(chuàng)新中心，吉林長春 130117）

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill的干燥成熟果實(shí)，俗稱“北五味子”。五味子用藥歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效[1]。現(xiàn)代藥理研究表明，五味子具有改善代謝紊亂[2]，降低血糖[3?4]、保護(hù)肝臟[5]、鎮(zhèn)靜催眠[6?7]、抗氧化[8]等活性，此外，五味子還具有抗衰老[9]、抑制腫瘤生長[10]和免疫調(diào)節(jié)[11]等作用。

近年來，隨著生活水平的提高，人們對食品的營養(yǎng)健康的關(guān)注程度日益增加。蛋白質(zhì)作為人和動(dòng)物生命活動(dòng)主要的能源物質(zhì)，在人類健康中發(fā)揮重要作用。植物蛋白具有資源廣泛、安全穩(wěn)定、生產(chǎn)成本和毒副作用低等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)植物蛋白表現(xiàn)的一些生物活性也證明其具有較高的利用價(jià)值，在生化、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域得到了越來越多的認(rèn)可，因此植物蛋白也成為了當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一。諸多研究表明[12?13]，中藥的植物蛋白具有顯著的保健功能和藥用功效，如免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗疲勞、抗腫瘤等，吸引了諸多領(lǐng)域的研究工作者。許多學(xué)者對部分中藥蛋白進(jìn)行了相關(guān)研究，如黃芪[14]、苦杏仁[15]、遠(yuǎn)志[16]等，并取得了一定成果。目前，國內(nèi)外針對五味子的開發(fā)利用研究主要集中在木脂素類、多糖類、揮發(fā)油類[17?19]等有效成分。本課題組前期對五味子蛋白進(jìn)行了深入研究[20?24]，結(jié)果表明五味子蛋白具有優(yōu)良的抗氧化活性。

本文基于前期的研究基礎(chǔ)采用Osborne分級法對五味子分級蛋白進(jìn)行提取，分別研究四種組分蛋白（即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白）的體外抗氧化活性，以Vc作為陽性對照，分析比較同等條件下四種組分蛋白體外抗氧化活性的大小，以期為五味子中四種組分蛋白在健康食品中的廣闊應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

北五味子藥材 吉林省長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)姜大成教授鑒定為木蘭科五味子屬植物五味子（Schisandra chinensis）干燥成熟的果實(shí)；考馬斯亮藍(lán) R-250、甘氨酸（Glycine）、四甲基乙二胺（TEMED）、十二烷基硫酸鈉（SDS） 分析純，美國sigma公司；鄰啡羅啉（鄰二氮菲）、1,1-二苯基 -2-苦 基 肼 （ 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical，DPPH）、2,2-聯(lián)氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽 ABTS（diammonium salt）、維生素 C（抗壞血酸）、蛋白質(zhì) Marker（10~180 kDa） 分析純，北京索萊寶生物科技有限公司；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、濃鹽酸、氯化鈉、三氯乙酸、鐵氰化鉀、甲醇、乙醇、石油醚等 國產(chǎn)分析純。

Infinite M200 PRO酶標(biāo)儀 瑞士TECAN公司；MS303S千分之一分析天平、AL204萬分之一分析天平、AB135-S十萬分之一分析天平、S220-KCN標(biāo)準(zhǔn)型pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器有限公司；S82-2磁力攪拌器 上海志威電器有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市佳美儀器有限公司；PowerPacTMHC電泳儀 美國Bio-rad公司；iBright FL 1000凝膠成像儀 美國ThermoFisher公司；SCIENTZ-50F真空冷凍干燥機(jī) 寧波新芝凍干設(shè)備股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 五味子脫脂粉的制備 參考文獻(xiàn)[25]的方法，將五味子浸泡24 h，去除果肉后，所得種子清洗干凈放入烘箱內(nèi)低溫烘干，粉碎過65目篩，按料液比1:5的比例加石油醚（沸程：60~90 ℃），室溫?cái)嚢杳撝?4 h，5000 r/min離心10 min得沉淀，待石油醚揮干后過80目篩，得五味子脫脂粉。

1.2.2 五味子蛋白分級提取 參考文獻(xiàn)[26?27]研究方法略作修改，采用Osborne法分級提取五味子蛋白，取揮干后的脫脂藥粉50 g，料液比1:20（w/v）對五味子中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分級提取。

1.2.2.1 清蛋白提取 取50 g五味子脫脂粉于1500 mL的大燒杯中，加入1000 mL的蒸餾水，室溫?cái)嚢杞? h，6000 r/min離心10 min，過濾上清液。合并沉淀再次提取，操作條件與前者相同。合并兩次所得的上清液，透析48 h，每間隔1 h換水一次，真空冷凍干燥，即得五味子清蛋白。

1.2.2.2 球蛋白提取 將提取清蛋白后的沉淀用1000 mL 1 mol/L的NaC1溶液室溫?cái)嚢杞? h，6000 r/min離心10 min，過濾得上清液。合并沉淀后再重復(fù)提取一次，操作條件與前者相同。合并兩次所得的上清液，透析48 h，每間隔1 h換水一次，真空冷凍干燥，即得五味子球蛋白。

1.2.2.3 醇溶蛋白提取 將提取球蛋白后所得沉淀用1000 mL70%（v/v）乙醇提取，室溫條件下攪拌浸提2 h，6000 r/min離心10 min，過濾得上清液。合并沉淀后再次浸提，操作條件與前者相同。合并兩次所得的上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥，即得五味子醇溶蛋白。

1.2.2.4 谷蛋白提取 將提取醇溶蛋白后的沉淀用1000 mL濃度為0.5 mol/L的NaOH溶液室溫?cái)嚢杞?，室溫條件下攪拌浸提取2 h，6000 r/min離心10 min，過濾得上清液。合并沉淀后再次浸提，操作條件與前者相同。合并兩次所得的上清液，透析48 h，每間隔1 h換水一次，真空冷凍干燥，即得五味子谷蛋白。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 原料成分含量測定 水分含量測定：參照GB 5009.3-2016《食品中水分的測定》（直接干燥法）；蛋白含量測定：參照GB 5009.5-2016《食品中蛋白質(zhì)的測定》（凱氏定氮法），考馬斯亮藍(lán)比色法；脂肪的測定：參照GB/T 5009.6-2006《食品中脂肪的測定》（索式抽提法）；灰分的測定：參照GB 5009.4-2016《食品中灰分的測定》（質(zhì)量法）。

1.3.2 組分蛋白含量測定 采用考馬斯亮藍(lán)Bradford比色法測定蛋白質(zhì)含量。牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：各取 0、10、20、30、40、50、60 μL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mg/mL），用 PBS 補(bǔ)足到 150 μL 后，加入2.85 mL考馬斯亮藍(lán)染液，混勻，室溫放置5 min，在可見-紫外分光光度計(jì)595 nm處測定吸光度值，以牛血清蛋白質(zhì)量（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。稀釋后的樣品溶液用上述方法測定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得其質(zhì)量濃度。根據(jù)回歸方程，計(jì)算4種組分蛋白質(zhì)的含量：

1.3.3 五味子組分蛋白SDA-PAGE電泳分析 參考 Laemmli[28]、葛環(huán)宇等[29]的方法，SDS-PAGE電泳法采用12%分離膠、5%濃縮膠對五味子組分蛋白進(jìn)行分析，將10 mg/mL的五味子組分蛋白提取液與樣品緩沖液（甘油2 mL，10% SDS 2 mL，溴酚藍(lán)0.25 mg，1 mol/L Tris溶液 2.5 mL，β-巰基乙醇 0.5 mL和蒸餾水3 mL）按1:1的體積比例混合，100 ℃煮沸5 min，冷卻至室溫，上樣量10 μL。開始電壓70 V，進(jìn)入分離膠后140 V，待指示劑遷移至膠前沿1~2 cm處停止電泳。電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍(lán)R-250室溫?fù)u床染色2 h，脫色液脫色數(shù)次直至電泳條帶清晰，成像拍照。

1.3.4 體外抗氧化活性研究

1.3.4.1 羥基自由基（·OH）清除能力的測定 通過鄰二氮菲法測定對·OH的作用，樣品組取 1 mL 0.75 mmol/L鄰二氮菲溶液和2 mL0.2 mol/LPBS溶液（pH7.4）加入試管，隨后加入 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0和2.5 mg/mL的各組分蛋白樣品溶液1 mL，混勻后加入1 mL 0.75 mmol/L FeSO4溶液，立即混勻，最后加入1 mL 0.025% H2O2溶液，混勻。Vc為陽性對照組，于37 ℃水浴反應(yīng)1 h后在536 nm波長處測其吸光度值，空白對照組以1 mL蒸餾水代替樣品溶液，樣品對照組以1 mL蒸餾水代替0.025%H2O2溶液，每組試樣做3次平行實(shí)驗(yàn)后取平均值，根據(jù)以下公式計(jì)算其清除率：

式中：A0為空白對照組吸光度；A1為樣品組吸光度；A2為樣品對照組吸光度。

1.3.4.2 DPPH自由基清除能力的測定 五味子各級組分蛋白通過清除DPPH自由基而導(dǎo)致吸光度的減少程度可以測得抗氧化能力。將五味子各級組分蛋白樣品水溶液2 mL加入到具塞試管中，分別在各試管中加入2 mL 0.04 mg/mL DPPH溶液，渦旋混勻。室溫避光反應(yīng)30 min,于517 nm處測定吸光度值，以2 mL 甲醇代替DPPH溶液作為樣品對照組，以2 mL蒸餾水代替樣品液作為空白對照組。以Vc為陽性對照組，每個(gè)處理試樣均做3次平行實(shí)驗(yàn)，取平均值。通過以下公式計(jì)算其清除率：

式中：A0為空白對照組吸光度；A1為樣品組吸光度；A2為樣品對照組吸光度。

1.3.4.3 Fe3+還原能力的測定 參考文獻(xiàn)[30]的方法，取1 mL不同質(zhì)量濃度的五味子各級蛋白于具塞試管中，分別加入2.5 mL 0.2 mol/L磷酸緩沖溶液（pH6.6）和2.5 mL 1.0%鐵氰化鉀溶液，迅速混勻后于50 ℃水浴反應(yīng)20 min，冷卻，加入2.5 mL10%三氯乙酸，混勻，3000 r/min離心10 min，取上清2.5 mL，依次加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%三氯化鐵，充分混勻，以蒸餾水做空白調(diào)零，在最大吸收波長700 nm下測其吸光度值，以2.5 mL蒸餾水代替樣品溶液作為樣品對照組，以Vc為陽性對照，每個(gè)樣品重復(fù)3次,取平均值。通過以下公式計(jì)算其還原能力：

式中：A1為樣品組吸光度；A2為樣品對照組吸光度。

1.3.4.4 ABTS自由基測定 參考文獻(xiàn)[31]，稱取一定量的ABTS和過硫酸鉀，用去離子水配制成ABTS濃度為7.4 mmol/L，過硫酸鉀濃度為2.6 mmol/L的溶液，將5 mL ABTS儲備液與88 μL過硫酸鉀混勻作為工作液，室溫下避光靜置12~16 h，臨用前用0.01 mol/L pH7.4 PBS緩沖溶液稀釋至734 nm處吸光度值在0.7±0.2范圍內(nèi)，測定其吸光度作為空白對照組。將0.2 mL ABTS工作液與10 μL不同濃度的五味子各級蛋白樣品溶液混勻，室溫下避光放置6 min，于波長734 nm處測定吸光度。ABTS自由基清除能力計(jì)算公式為：

式中：A0為空白對照組吸光度；A1為樣品組吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)處理

以上所有試驗(yàn)至少重復(fù)3次，數(shù)據(jù)采用Excel 2016和Origin 2019軟件進(jìn)行計(jì)算繪圖，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 原料成分分析

根據(jù)表1顯示的測定結(jié)果，五味子種子中脂肪含量最多，其次是蛋白質(zhì)，含量為7.82%左右，水分含量相對較少。

表1 五味子種子基本成分分析Table 1 Basic composition analysis of Schisandra chinensis seeds

2.2 五味子4種組分蛋白含量

以牛血清白蛋白濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=0.0167X+0.0476，R2=0.9965。結(jié)果表明，此方程具有良好的線性相關(guān)性。由圖1可知，五味子4種組分蛋白中谷蛋白相對含量最高，達(dá)48.39%，高于綠豆中谷蛋白含量，但清蛋白含量遠(yuǎn)低于綠豆[25]，球蛋白含量次之（12.71%），醇溶蛋白含量最低，僅有1.75%。

圖1 五味子4種組分蛋白的百分含量Fig.1 Percentage of four components of Schisandra chinensis protein

2.3 五味子組分蛋白SDS-PAGE電泳分析

SDS-PAGE常用于反映蛋白質(zhì)的分子量（MW）和組成。由圖2知，五味子總蛋白和組分蛋白亞基條帶區(qū)別顯著，總蛋白在15~70 kDa內(nèi)亞基條帶分布明顯，主要有8個(gè)亞基，分子量大致為13、16、17、32、37、45、48、65 kDa；清蛋白兩個(gè)亞基的分子量大致為18 kDa和46 kDa，球蛋白亞基分子量主要分布在15~25 kDa和35~55 kDa，6個(gè)亞基條帶明顯，分子量大致為 17、18、23、25、37、45 kDa；醇溶蛋白在此分子量內(nèi)未出現(xiàn)條帶；谷蛋白條帶背景較深，在10~40 kDa分子量范圍內(nèi)條帶也有分布，3個(gè)主要亞基分子量大致為16、18和32 kDa。

圖2 五味子總蛋白和不同組分蛋白SDS-PAGE結(jié)果Fig.2 SDS-PAGE results of total protein and different components of Schisandra chinensis

2.4 抗氧化活性比較結(jié)果

對五味子分離得到的4種組分蛋白進(jìn)行羥基自由基（·OH）、DPPH自由基、ABTS自由基清除率和Fe3+還原能力進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示：

2.4.1 羥基自由基（·OH）清除率能力 ·OH是一種非常容易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的活潑自由基，在銅或鐵離子的存在的條件下，可由 O2?·和過氧化氫反應(yīng)形成?！H極易與氨基酸、蛋白質(zhì)、DNA等生物分子發(fā)生反應(yīng)，也可引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[32]，·OH清除率大小可作為評價(jià)抗氧化活性的重要指標(biāo)。

由圖3可知，除總蛋白外，五味子各組分蛋白對·OH自由基的清除能力較弱，雖然各組分蛋白對·OH的清除能力具有濃度依賴性，即隨著濃度的增加，清除能力逐漸增強(qiáng)，但是清除·OH 的能力依然低于總蛋白。Vc在1.0 mg/mL濃度時(shí)對·OH自由基的清除能力趨于平衡，清除率為接近95%。球蛋白和總蛋白在2 mg/mL時(shí)對羥基自由基的清除能力趨向于平緩。其中，五味子總蛋白清除能力最高可達(dá)59.78%，清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白清除率最高能達(dá)到5.99%、16.22%、24.24%和25.54%。因此，五味子中各組分蛋白和總蛋白對·OH清除能力大小為：總蛋白>谷蛋白>醇溶蛋白>球蛋白>清蛋白，表明除清蛋白外，五味子其它組分蛋白具有一定·OH自由基清除活性。

圖3 四種組分蛋白對羥基自由基的清除能力Fig.3 Hydroxyl radical scavenging ability of the four component proteins

2.4.2 DPPH自由基清除能力 DPPH自由基清除能力測定簡便、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于評價(jià)各種天然化合物的自由基清除能力?？寡趸瘎PPH自由基清除的作用被認(rèn)為是由于它們的氫化能力，當(dāng)DPPH遇到供氫物質(zhì)時(shí)，自由基被清除，吸光度降低。

五味子各組分蛋白和總蛋白質(zhì)量濃度為0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL 的 DPPH 自由基清除率測定結(jié)果見圖4。由圖4可見，在測定濃度范圍內(nèi)，4種組分對DPPH自由基的清除能力隨著樣品濃度的增大而增強(qiáng)。在樣品濃度為2 mg/mL時(shí)，總蛋白和醇溶蛋白清除率趨向于平緩。在4種組分蛋中，醇溶蛋白的清除能力最高，當(dāng)濃度為2.5 mg/mL時(shí)最大值為92.38%，接近于Vc的清除能力。因此，五味子中總蛋白和各組分蛋白對DPPH自由基清除能力大小為：醇溶蛋白>總蛋白>清蛋白>谷蛋白>球蛋白，上述結(jié)果表明，五味子組分蛋白中清蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白中可能含有大量供氫物質(zhì)，能與自由基反應(yīng)生成更穩(wěn)定的產(chǎn)物，終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。表明五味子組分蛋白，尤其是醇溶蛋白，可作為一種很好的DPPH自由基清除劑。

圖4 四種組分蛋白對DPPH自由基的清除能力Fig.4 DPPH free radical scavenging ability of four component proteins

2.4.3 Fe3+還原能力 抗氧化劑使鐵氰化鉀被還原成亞鐵氰化鉀，F(xiàn)e3+與亞鐵氰化鉀可以發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生普魯士藍(lán)，普魯士藍(lán)在700 nm處有強(qiáng)吸收峰，還原力與抗氧化劑的能力成一定正比例，所以吸光度值越大，產(chǎn)生的普魯士藍(lán)越多，說明其抗氧化能力越強(qiáng)。

由圖5可以看出，清蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白中醇溶蛋白對Fe3+的還原能力最強(qiáng)，且其還原能力隨蛋白濃度的增大而增大，球蛋白在濃度為2 mg/mL的吸光值為1.143，繼續(xù)增加濃度，曲線開始趨于平穩(wěn)，總蛋白在濃度為0.5 mg/mL時(shí)吸光度已經(jīng)趨向于平緩。Vc對Fe3+還原能力的作用，隨著濃度的增大其還原能力不斷增強(qiáng)?？梢钥闯?，F(xiàn)e3+還原力的作用效果中，醇溶蛋白還原能力最強(qiáng)，總蛋白還原能力最弱。五味子中總蛋白和各組分蛋白對Fe3+還原能力大小為：醇溶蛋白>清蛋白>谷蛋白>球蛋白>總蛋白。

圖5 四種組分蛋白的總還原能力Fig.5 Total reducing power of four component proteins

2.4.4 清除ABTS自由基能力 ABTS法用于測定親水性和親脂性物質(zhì)的抗氧化能力。硫酸鉀可以催化ABTS生成穩(wěn)定的綠色自由基。生物活性物質(zhì)的抗氧化活性可以通過ABTS自由基清除率來評估[33]。

不同組分蛋白和總蛋白ABTS自由基清除能力如圖6所示，4種組分蛋白和總蛋白對ABTS自由基均具有一定的清除作用，且隨著濃度的增加，清除能力逐漸增強(qiáng)。清蛋白與醇溶蛋白清除效果相當(dāng)，球蛋白與總蛋白的清除效果相當(dāng)，其中谷蛋白對ABTS自由基的清除能力最優(yōu)，在2.5 mg/mL濃度時(shí)，其清除率已達(dá)89.20%，非常接近同濃度的Vc。表明五味子總蛋白和各組分蛋白中谷蛋白是非常優(yōu)良的ABTS自由基清除劑。

圖6 四種組分蛋白對ABTS自由基的清除能力Fig.6 ABTS free radical scavenging ability of the four component proteins

3 討論與結(jié)論

本研究以五味子為原料，采用Osborne分級提取法對五味子4種組分蛋白進(jìn)行分級提取后進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分析，并對其進(jìn)行體外抗氧化活性比較研究。SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果中清蛋白和球蛋白條帶分離清晰[34]；醇溶蛋白在此分子量范圍內(nèi)沒有出現(xiàn)條帶，可能是由于醇溶蛋白采用70%（v/v）乙醇提取，所提取出的成分主要是低分子量的肽類成分；谷蛋白由于采用堿液提取，故背景比較深，其主要含有三個(gè)亞基，其分子量分布在15~20 kDa和30~40 kDa，這三個(gè)亞基也是組成總蛋白的三個(gè)主要亞基。

氧化應(yīng)激反應(yīng)對人體衰老和健康具有非常重大的影響，各種因素導(dǎo)致的過量自由基可以引發(fā)和加劇多種疾病，因此應(yīng)用抗氧化劑來維持人體健康具有廣泛的需求。近年來，諸多研究結(jié)果表明人工合成抗氧化劑副作用多，影響人體健康，對人體肝、脾、肺均會產(chǎn)生不利作用，甚至?xí)T發(fā)惡性腫瘤等疾病[35]。天然抗氧化劑成分毒性遠(yuǎn)低于人工合成的抗氧化劑。因此，天然抗氧化劑的研究受到研究者的青睞，尤其是中草藥提取物的抗氧化作用受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。而抗氧化劑其抗氧化作用方式主要為兩種，一種為直接抗氧化作用方式，另一種為通過還原能力達(dá)到抗氧化作用的方式。本文抗氧化活性比較研究結(jié)果表明，作為直接抗氧化作用方式的羥基自由基和DPPH自由基活性試驗(yàn)中，總蛋白較分級蛋白擁有較強(qiáng)的清除能力，表明五味子總蛋白在直接抗氧化作用方面具有良好的抗氧化活性；在通過還原力達(dá)到抗氧化作用的Fe3+還原能力的測定試驗(yàn)中，四種分級蛋白均較五味子總蛋白具有良好的還原能力，綜合比較上述兩種抗氧化方式的抗氧化活性檢測，四種分級蛋白中以谷蛋白較佳；本文通過ABTS自由基清除率的測定發(fā)現(xiàn)，谷蛋白對ABTS自由基具有明顯的清除效果，在一定的濃度下其清除效果與Vc接近，同時(shí)四種分級蛋白含量測定表明谷蛋白含量最高，為48.39%，綜上表明在五味子組分蛋白中，谷蛋白會是一種具有良好前景的潛在抗氧化劑。

本文通過對五味子分級蛋白抗氧化活性的研究，初步闡明了四種分級蛋白的體外抗氧化活性，為五味子分級蛋白抗氧化作用進(jìn)一步研究奠定了一定的試驗(yàn)基礎(chǔ)，為該植物蛋白的深入開發(fā)以及在健康食品中的應(yīng)用提供了理論數(shù)據(jù)。