基于中藥質量常數的苦參飲片等級評價

孫福仁，張睿智，劉 沙，魯倩倩，韓宏建，劉 威，李 哲，李軍山,2

(1.神威藥業集團有限公司,河北石家莊 051430;2.楚雄神威施普瑞藥物研究有限公司，云南楚雄 675000)

苦參，別名苦骨、地槐、水槐，為多年生草本或灌木，在中國大多數地區均有分布，常生長在向陽山坡、山麓、郊野、路邊等地的草叢中，春、秋二季采收，除去根頭和小支根，洗凈，干燥，或趁鮮切片，干燥。苦參為中藥常用的清熱燥濕藥，《本草綱目》中記載：“主治熱病發狂，傷寒結胸，毒熱足腫大，遍身風疹”，現載于2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)[1]。臨床上用于治療皮膚病、肝炎、婦女濕熱下注所致的帶下色黃、濕熱痢疾等癥[2]。現代藥理作用顯示，苦參具有顯著的中樞鎮靜作用，還可以抗心率失常、平喘、抗炎、抗腫瘤等[3]。

苦參飲片傳統分級方法一般以長度、直徑、規定重量中的個數、色澤、純凈度等形態和質地作為依據。主要按照外形分類，以片大為優，其次是顏色、質地、雜質、含量等[4]。王惠娟等[5]通過TLC法與HPLC法建立質量標準，用于苦參飲片的質量控制。傳統的分級方法側重飲片性狀特征，而質量標準則以飲片的含量高低判斷優劣，故亟需一種將外在性狀與指標成分含量結合的評價方法。中藥飲片質量常數法是一種全新的分級方法，通過公式將性狀、含量參數量化，對飲片進行等級劃分，目前，已成功應用于首烏藤、川芎等藥材[6-7]，但尚未有以苦參飲片為研究對象的報道。本文引入中藥質量常數法，對不同產地苦參飲片的外在性狀、內在指標成分進行測定，通過數據處理，對苦參飲片進行了分類，為苦參飲片品質分級提供了一種新的評價方式。

1 儀器與材料

1.1 儀 器

CPA225D 電子分析天平(德國賽多利斯股份公司提供)；KH-7200E超聲波清洗器(昆山禾創超聲波儀器有限公司提供)；Agilent 1260液相色譜儀(安捷倫科技有限公司提供)；InertSustain NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm，日本島津公司提供)。

1.2 試 劑

苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110805-201007，純度：98.7%)；氧化苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110780-201909，純度：92.9%)；中性氧化鋁(100～200目(75～147 μm，下同)，天津市科密歐化學試劑有限公司提供)；甲醇(天津市科密歐化學試劑有限公司提供，色譜純)；乙腈(天津市科密歐化學試劑有限公司提供，色譜純)；其余試劑均為分析純；水為純化水。

1.3 原材料

15批苦參飲片分別采購于山西、內蒙古、甘肅、吉林、河南5個不同產地，經原河北省藥品檢驗所孫寶惠老師鑒定本品為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，具體來源情況見表1。

表1 15批苦參飲片來源及批號Tab.1 Sources and numbers of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

2 評價方法

2.1 中藥質量常數及百分質量常數的計算

中藥質量常數(A)被定義為單位藥材中指標成分質量與其飲片厚度平方之比，即A=M/H2[6]。苦參為藤莖類藥材，形狀為短圓柱形，其公式可按圓柱形模型進行簡化：

A=M/H2=(ρVc)/H2=(ρSHc)/H2=

(ρπR2c)/H，

(1)

飲片的質量m與半徑R呈正比，且更易于測定，故將式(1)再次簡化為

A=(mc)/H2，

(2)

式(1)和式(2)中：M為指標成分質量；m為單個飲片的平均質量；c為指標成分的含量；ρ為飲片密度；R為飲片半徑；S為飲片橫截面；H為單個飲片平均厚度。該常數包含了飲片的大小、厚度和指標成分含量3個關鍵因素，依據質量常數進行分級比較客觀科學。

將實驗樣品中質量常數的最大值記為100%，其他飲片質量常數與最大值的百分比值則為百分質量常數，即A%=Ai/Amax×100%(Ai為某批樣品的質量常數，Amax為當前樣品中的最大質量常數)[6]。規定A%≥80%為一等飲片；50%≤A%<80%為二等飲片；剩余的均為三等飲片[7]。

2.2 形態參數的測定

15批苦參飲片均為圓柱形片，見圖1，按式(2)要求，測定飲片的質量和厚度。為減少實驗誤差，使結果具有代表性，每批樣品隨機選取3組，每組隨機選擇50個飲片作為測量對象，記錄其厚度和質量，計算每批次單個飲片的平均厚度H和平均質量m。

圖1 15批苦參飲片的性狀特征圖Fig.1 Characteristic maps of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

2.3 指標成分含量的測定

1)色譜條件

色譜柱為InertSustain NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；以乙腈(A)-無水乙醇(B)-3%磷酸溶液(C)為流動相(φ(A)∶φ(B)∶φ(C)=80∶10∶10)等度洗脫；檢測波長為220 nm，柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min，理論板數按氧化苦參堿峰計算應不低于2 000。苦參飲片的色譜圖如圖2所示。

圖2 苦參飲片的色譜圖Fig.2 Chromatograms of Sophora flavecens decoction pieces

2) 對照品溶液的制備

精密稱定苦參堿、氧化苦參堿對照品適量，加乙腈-無水乙醇(80∶20，體積比，下同)混合溶液分別制成每1 mL含苦參堿49.5 mg、氧化苦參堿0.14 mg的對照品溶液。

3) 供試品溶液的制備

取苦參飲片粉末，粉碎后過3號篩，精密稱定0.3 g，轉移至具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液0.5 mL，再次加入三氯甲烷20 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率為250 W，頻率為40 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用三氯甲烷補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內徑1 cm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3，體積比，下同)混合溶液各20 mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量溶解，轉移至15 mL容量瓶中，加無水甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

4) 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按1)項下色譜條件測定，計算苦參堿、氧化苦參堿總和，色譜圖見圖2。

3 結果與分析

1) 外在形態參數測定

15批苦參飲片平均質量為0.66～1.86 g，質量最大者約為最小者的3.0倍。飲片的平均厚度為2.49～4.72 mm，ks-13飲片平均厚度是ks-7飲片的2倍左右，已超出“厚片”的規定范圍，見表2。

2) 內在指標成分含量

按2.3項下色譜條件分別測定15批飲片中苦參堿及氧化苦參堿的含量，結果表明，15批飲片均符合2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)中苦參項下的含量要求(即苦參堿及氧化苦參堿總和不得少于1.0%)，見表2。

表2 苦參飲片性狀參數、質量常數、百分質量常數的測定結果Tab.2 Results of character parameters, quality constants and percentage quality constants of Sophora flavescens decoction pieces

3) 苦參飲片等級劃分

按式(2)計算15批飲片的質量常數及百分質量常數，見表2。為了更加直觀地表示出15批苦參飲片的等級差異，將計算的百分質量常數做柱狀圖，見圖3。由圖3可知，ks-2，ks-6，ks-7批飲片的質量常數大于等于34.22，百分質量常數大于等于80%，為一等品； ks-3，ks-4，ks-5，ks-8，ks-12批飲片的質量常數為21.39～34.22，百分質量常數為50%～80%，為二等品；余下飲片的質量常數小于21.39，百分質量常數小于50%，均列為三等品。

圖3 15批苦參飲片百分質量常數分布Fig.3 Distribution of percentage quality constants of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

4 討 論

4.1 指標成分的選擇

苦參為豆科植物苦參的干燥根，功效為清熱燥濕、殺蟲、利尿。苦參中主要成分為苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、三葉豆紫檀苷、4-羥基-3-甲氧基-8,9-二亞甲基二氧紫檀素、異去氫淫羊藿素、三葉豆紫檀苷-6’-單乙酰酯、7-甲氧基香豆素、降脫水淫羊藿素、苦參酮、高麗槐素、β-谷甾醇等[8-11]。

本研究選取苦參堿及氧化苦參堿總和為苦參等級評價的內在指標，主要從以下2個方面考慮：1)苦參堿及氧化苦參堿為2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)苦參項下的法定指標成分；2)苦參堿及氧化苦參堿為苦參中含量較高的生物堿類代表性化合物，具有抑制巨噬細胞及TNF-α[12]、抑菌活性[13]、解熱、鎮痛、抗病毒[14]的功效，是苦參發揮清熱燥濕作用的重要藥效成分。因此，選擇苦參堿及氧化苦參堿總和作為內在指標較為合理且具有代表性。

4.2 苦參堿及氧化苦參堿的影響因素

結合本文研究和文獻[15—16]對不同產地的苦參進行含量分析，發現河南、河北、云南、湖南、山東、四川、內蒙古等產地的樣品指標成分含量存在差異。僅貴州產區的21個產地樣品的苦參總生物堿含量就存在明顯差別，其中，畢節市大方縣和銅仁市思南縣所產的苦參中總生物堿含量高于其他產區[17]。苦參藥材栽培前3年的側根和主根中5種生物堿含量增長快速，隨后放緩，以9月底到11月底采挖的苦參中生物堿含量最高[18-19]。同時，苦參側根的生物堿類含量大于主根，蘆頭、莖、葉依次遞減[20]。因此，產地、采收期、藥用部位可能是影響苦參飲片中指標成分含量的主要因素。

4.3 傳統鑒別法與質量常數評價法的對比

2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)苦參項下飲片性狀規定：“本品呈類圓形或不規則形的厚片”。本研究收集到的飲片中ks-3的H=4.23 mm，m=1.85 g，從外觀形狀上，超過厚片的規定范圍，但其內在指標成分含量高。因而，分級被列為二等品。說明傳統鑒別方法僅以外觀形狀進行評價，無法全面反映飲片的內在質量，易忽視飲片的內在品質。本研究中所論述的中藥質量常數評價方法既兼顧了傳統鑒別方法所注重的外在性狀，又結合了指標成分含量高即品質優的觀點。最終分級結果顯示，15批苦參樣品中一等飲片的平均厚度與二等、三等飲片存在一定差異，也符合厚片為宜的鑒別特征，提示該方法合理且可行[21-22]。

5 結 語

本文豐富了苦參飲片的品質評價方法。應用質量常數法對苦參飲片評價能夠更加科學、準確地體現飲片品質，具有很大的實用價值。研究發現，僅有3批苦參飲片符合一等品，4批苦參飲片為二等品，其余8批為三等品。以內蒙古產地為例，巴彥淖爾的ks-4為二等品，相同產區的ks-1為三等品；而內蒙古索倫、錦山的樣品均為三等品，說明產地、加工方式對苦參飲片的品質有一定影響，單獨以性狀或者指標成分含量評價飲片品質過于片面。

本文所提出的質量常數法對飲片品質進行了較好的分級評價，對苦參飲片的市場流通具有一定指導意義。由于本研究中樣品批次的限制，并未收集到更多其他產地的樣品，因此，在今后的研究中需要擴大研究的樣品量，以完善該評價方法。