高原缺氧對(duì)氯沙坦鉀代謝動(dòng)力學(xué)的影響※

周 楊，朱俊博，，段雅彬，楊建鑫，白 雪，劉貴琴，王 倩，顧文琦，喇林立，李向陽，3*

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)部，青海 西寧 810001；2.青海大學(xué)高原醫(yī)學(xué)研究中心，青海 西寧 810001；3.青海大學(xué)三江源生態(tài)與高原農(nóng)牧業(yè)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016)

氯沙坦鉀(losartan potassium)口服吸收良好，在人體內(nèi)主要由肝藥酶CYP2C9(大鼠為CYP2C11)代謝為5-羧酸型活性代謝產(chǎn)物氯沙坦羧酸(EXP 3174)，由于代謝產(chǎn)物氯沙坦羧酸是比氯沙坦鉀更強(qiáng)的AT1受體拮抗劑且具有更長的半衰期，其形成對(duì)于氯沙坦鉀的藥理活性至關(guān)重要[1，2]。目前，氯沙坦鉀的高原用藥方案與平原別無二致。但基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，許多藥物在高原地區(qū)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征會(huì)發(fā)生變化?，F(xiàn)通過相關(guān)研究，明確高原缺氧對(duì)氯沙坦鉀的代謝動(dòng)力學(xué)是否存在影響。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

氯沙坦鉀對(duì)照品(上海麥克林生化科技有限公司，純度：99 %，批號(hào)：C10103850)，氯沙坦羧酸對(duì)照品(北京百靈威科技有限公司，純度：98%，批號(hào)：LH80T01)，厄貝沙坦對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，純度：100%，批號(hào)：100607-201804)，甲醇(美國Fisher Chemical試劑公司，純度：色譜醇，批號(hào)：205347)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

AU2700自動(dòng)生化分析儀(日本奧林巴斯株式會(huì)社)，MX-S可調(diào)式渦旋混勻儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器股份公司)，XFA6100自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(南昌普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司)，Eclipse Ci-L型正置白光拍照顯微鏡(日本尼康株式會(huì)社)，Ultimate 3000超高效液相色譜儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)，Q Exactive Focus靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)，Centrifuge 5418型離心機(jī)(德國Eppendorf生命科學(xué)公司)，ME204E型電子天平(上海梅特勒—托利多儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

72只SPF級(jí)雄性SD大鼠(180 ～220g)購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(陜)2018-001。大鼠常規(guī)飼養(yǎng)于陜西西安和青海果洛瑪多地區(qū)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵循青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)(批準(zhǔn)號(hào)：2017-15)的規(guī)定。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模方法

大鼠隨機(jī)分為常氧組[P，在陜西西安(海拔390m，大氣氧分壓20kPa)常規(guī)飼養(yǎng)]、急性缺氧組[AH，將常氧組大鼠運(yùn)送至瑪多(海拔4300m，大氣氧分壓12.5kPa)后常規(guī)飼養(yǎng)3d]、慢性缺氧組(CH，將常氧組大鼠運(yùn)送至瑪多后常規(guī)飼養(yǎng)30d)、慢性缺氧返回常氧組(CH-P，將常氧組大鼠運(yùn)送至瑪多后常規(guī)飼養(yǎng)30d，之后返回西安常規(guī)飼養(yǎng)7d)。每組各18只，10只用于取材，測定生理生化指標(biāo)及做組織病理學(xué)切片；8只用于單次給藥后做藥物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1.5 生理生化指標(biāo)測定、組織形態(tài)觀察及藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究方法

各組隨機(jī)取10只大鼠，用20%烏拉坦溶液麻醉，于腹主靜脈取全血，用自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞(RBC)等血常規(guī)指標(biāo)；同時(shí)分離血清，置自動(dòng)生物化學(xué)分析儀測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等生化指標(biāo)。

取各組大鼠心、肺、肝、腎組織(避免機(jī)械性損傷及擠壓)，固定在4%多聚甲醛溶液中，用由低到高濃度的無水乙醇進(jìn)行洗滌并脫水，用二甲苯做透明處理2 h后轉(zhuǎn)入石蠟溶液中，置溫箱過夜，用蘇木精—伊紅溶液染色后脫水，以中性樹脂封片，在顯微鏡下觀察病理變化。

取各組剩余8只大鼠，禁食12 h后稱重并灌胃(10.0mg·kg-1，氯沙坦鉀)，并在給藥后0.083、0.250、0.500和1、2、3、4、6、8、12、24 h 時(shí)間點(diǎn)從大鼠眼眶后靜脈叢取血0.3 mL置含有抗凝劑的離心管中離心(4000r·min-1，12min)，用移液槍吸取離心液上層血漿于另一離心管，置-20 ℃冰箱保存。

1.6 液質(zhì)測定條件

1.6.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil GOLD C18(2.1mm×50mm，1.9μm)；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣盤溫度：20 ℃。

流動(dòng)相：A相為 0.1%甲酸水；B相為甲醇。

梯度洗脫：0～3 min，B相保持10%不變；3～8 min，B相10%～90%；8～10 min，B相保持90%不變；10～14 min，B相90%～10%。

流速：0.3 mL/min。

進(jìn)樣量：4 μL。

1.6.2 質(zhì)譜條件

采用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式(MRM)，做正離子模式掃描，掃描范圍m/z：150～2000，分辨率：70 000。

離子源為加熱電噴霧離子源(HESI)，其參數(shù)如下，離子噴霧電壓：3 000 V；離子源溫度：300 ℃；離子傳輸管溫度：350 ℃；鞘氣流速：40 arb；輔助氣流速：10 arb；吹掃氣流速：1 arb；噴霧電壓：3.5 kv。

氯沙坦鉀、氯沙坦羧酸、厄貝沙坦的提取離子質(zhì)荷比[M+H]+(m/z)分別為461.1253、437.1487、429.2397。

1.7 標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品制備方法

稱取氯沙坦鉀和氯沙坦羧酸對(duì)照品各兩份，將其溶于甲醇中，混勻(渦旋)，獲得兩份質(zhì)量濃度均為1.00 mg·mL-1的氯沙坦鉀和氯沙坦羧酸母液，一份用于配制系列濃度的工作溶液，一份用于配制不同濃度的質(zhì)控溶液。精密量取氯沙坦鉀和氯沙坦羧酸的母液，用甲醇稀釋獲得氯沙坦鉀和氯沙坦羧酸質(zhì)量濃度分別為0.20/0.02、0.50/0.20、1.00/2.00、2.00/10.00、10.00/20.00、20.00/40.00、40.00/80.00、80.00/120.00 μg·mL-1的系列工作溶液以及濃度為0.20/0.02、0.40/0.04、35.00/60.00、60.00/90.00 μg·mL-1的系列質(zhì)控溶液。取大鼠空白血漿，將上述系列工作溶液和質(zhì)控溶液稀釋，獲得血漿濃度分別為10.0/1.0、25.0/10.0、50.0/100.0、100.0/500.0、500.0/1 000.0、1 000.0/2 000.0、2 000.0/4 000.0、4 000.0/6 000.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列樣品以及濃度為定量下限和低、中、高四種濃度的質(zhì)控樣品，其濃度分別為10.0/1.0、20.0/2.0、1 750.0/3 000.0、3 000.0/4 500.0 ng·mL-1。精密稱取厄貝沙坦對(duì)照品，用甲醇稀釋并定容，制得濃度為1.00 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)母液，將該母液繼續(xù)稀釋，得濃度為100.0 ng·mL-1的內(nèi)標(biāo)工作溶液。

1.8 血漿樣品處理方法

吸取100.0 μL血漿樣品，加入50.0 μL內(nèi)標(biāo)工作液和300.0 μL甲醇，渦旋30 s，離心(12000r·min-1)10 min，取上清液過0.22 μm的有機(jī)系濾膜，取過濾液4.0 μL用于UPLC-MS測定。

1.9 方法學(xué)考察方案

參照2020年版中國藥典生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則[3]，以及美國食品藥品監(jiān)督管理局頒布的相關(guān)指導(dǎo)原則[4]，對(duì)建立的UPLC-MS分析法從以下6個(gè)方面進(jìn)行考察。

1.9.1 選擇性

取6只大鼠的空白血漿混合樣本、含內(nèi)標(biāo)的血漿樣本、含氯沙坦鉀及氯沙坦羧酸的血漿樣本以及大鼠給藥1 h后的血漿樣品。將以上樣本處理后按“1.6.1”及“1.6.2”項(xiàng)下所示條件進(jìn)樣，提取離子色譜圖。結(jié)果表明，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)響應(yīng)值較低，不成峰型，不干擾待測物的測定，具體色譜圖見圖1。

1.9.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

取標(biāo)準(zhǔn)系列樣品按照“1.8”項(xiàng)下所示方法處理后進(jìn)樣并提取離子色譜圖，以每個(gè)待測物理論濃度為橫坐標(biāo)，待測物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，氯沙坦鉀和代謝物氯沙坦羧酸在10.0～4 000.0 ng·mL-1和1.0～ 6 000.0 ng·mL-1內(nèi)的線性范圍良好，其標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為Y=1.0×10-5X+1.0×10-4(R2=0.999 9，氯沙坦鉀)；Y=1.1×10-3X+1.3×10-2(R2=0.999 6，氯沙坦羧酸)。

1.9.3 精密度和準(zhǔn)確度

取氯沙坦鉀及氯沙坦羧酸定量下限和低、中、高濃度四種質(zhì)控樣品，按“1.8”項(xiàng)下所示方法操作，每一濃度分析5個(gè)樣本，連續(xù)測定3個(gè)分析批次，以此計(jì)算待測物的批內(nèi)、批間精密度和準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，各濃度水平氯沙坦鉀及氯沙坦羧酸質(zhì)控樣品的批內(nèi)精密度(RSD)均小于 11.71 %，批間精密度均小于14.43 %，準(zhǔn)確度(RE)均處于-8.89%～6.34%之間。質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間的精密度和準(zhǔn)確度均符合生物樣品測定相關(guān)要求。

圖1 氯沙坦鉀(Ⅰ)、EXP 3174(Ⅱ)和厄貝沙坦(Ⅲ)大鼠血漿中的典型色譜圖

1.9.4 基質(zhì)效應(yīng)

在6只大鼠的空白混合血漿中加入甲醇進(jìn)行蛋白沉淀處理，向上清液中分別加入待測物低、高濃度對(duì)照質(zhì)控溶液，使得氯沙坦鉀的最終濃度分別為20.0、4 000.0 ng·mL-1，氯沙坦羧酸的最終濃度分別為2.0、6 000.0 ng·mL-1，其余按“1.8”項(xiàng)下所示方法操作。另取水代替空白基質(zhì)進(jìn)行相同操作。結(jié)果顯示，氯沙坦鉀低、高濃度的基質(zhì)因子RSD值分別為7.86%、4.13%；氯沙坦羧酸低、高濃度的基質(zhì)因子RSD值分別為1.88%、4.10%。在本實(shí)驗(yàn)所選測定條件下，基質(zhì)效應(yīng)的影響可忽略不計(jì)。

1.9.5 回收率

取低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，按“1.8”項(xiàng)下所示方法操作，每個(gè)濃度分析6個(gè)樣本。另取低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)控溶液，加入經(jīng)甲醇蛋白沉淀過的空白基質(zhì)上清液和內(nèi)標(biāo)工作液，同樣每個(gè)濃度分析6個(gè)樣本。將同一濃度兩種處理方法的待測物的峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值相除，即得回收率。結(jié)果表明，低、中、高濃度的氯沙坦鉀質(zhì)控樣品回收率分別為104.95%、95.13%、101.78%，回收率精密度均不大于8.99%；低、中、高濃度的氯沙坦羧酸質(zhì)控樣品回收率分別為96.89%、92.35% 、101.06%，回收率精密度均不大于3.49%。本實(shí)驗(yàn)所選處理方法回收率高、重現(xiàn)性好。

1.9.6 穩(wěn)定性

用空白血漿配制低、高兩個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，其濃度與基質(zhì)效應(yīng)的質(zhì)控樣品相同。樣品按“1.8”項(xiàng)下所示方法操作，每個(gè)濃度分析6個(gè)樣本。考察質(zhì)控樣品于室溫下放置8 h，在20 ℃自動(dòng)進(jìn)樣盤放置24 h，于-20 ℃下反復(fù)凍融3次后氯沙坦鉀和氯沙坦羧酸的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，氯沙坦鉀及氯沙坦羧酸血漿樣品的RE值均在-12.64%～11.86%之間，RSD值均不大于10.50%。氯沙坦鉀及氯沙坦羧酸血漿樣品在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定性良好，滿足測定要求。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 生理生化指標(biāo)測定結(jié)果

大鼠主要血常規(guī)指標(biāo)測定結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，與P組比，AH、CH、CH-P組的HGB分別升高了11.59%、38.62%、24.86%，HCT分別降低了34.56%、23.36%、18.89%，MCV分別降低了28.24%、29.89%、36.37%，MPV分別降低了29.56%、22.22%、15.11%。與P組比，AH、CH組RBC分別升高了9.32%、27.27%，CH-P組降低了8.62%；AH組的WBC增加了51.81%，CH組的PLT減少了19.60%。其他生理指標(biāo)無顯著變化。

表1 高原低氧對(duì)大鼠血常規(guī)的影響

大鼠主要生化指標(biāo)測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，與P組比，AH、CH、CH-P組的ALB分別升高了39.41%、30.34%、24.77%，A/G分別升高了168.70%、114.96%、107.44%，GLU分別升高了58.75%、96.65%、66.50%，LDL分別升高了114.77%、87.02%、93.05%。另外，與P組比，AH、CH、CH-P組的ALT分別降低了58.25%、51.32%、48.74%，AST分別降低了61.13%、58.00%、47.95%，TP分別降低了13.74%、11.41%、13.98%，GLO分別降低了48.27%、38.43%、39.15%，TC分別降低了17.64%、22.21%、80.44%。相比于P組，AH、CH組的HDL分別升高了92.76%、72.70%，UREA分別降低了25.61%、33.62%，TG分別降低了41.68%、17.60%，CH-P組的TG升高了8.97%。

表2 高原低氧對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

2.2 組織病理學(xué)觀察情況

2.2.1 高原缺氧對(duì)心肌組織的影響

高原缺氧對(duì)大鼠心臟組織會(huì)造成局部微小損傷。HE染色結(jié)果顯示，P組大鼠心肌實(shí)質(zhì)著色均勻，心肌細(xì)胞分界清楚，走形一致，心肌細(xì)胞橫紋清楚，明、暗相間；未見明顯間質(zhì)異常；未見明顯的炎性改變。AH組大鼠出現(xiàn)局部間質(zhì)毛細(xì)血管淤血，偶見炎性細(xì)胞浸潤小灶。CH組大鼠出現(xiàn)廣泛間質(zhì)毛細(xì)血管淤血。CH-P組大鼠局部心尖處輕微損傷，心肌纖維松解，正常結(jié)構(gòu)消失，橫紋消失，纖維細(xì)胞增生。具體情形如圖2所示。

圖2 缺氧對(duì)大鼠心肌組織的影響(200×)

2.2.2 高原缺氧對(duì)腎臟組織的影響

高原缺氧對(duì)大鼠腎臟也會(huì)造成一定損傷。HE染色結(jié)果顯示，P組大鼠皮質(zhì)、髓質(zhì)分界明顯；皮質(zhì)中腎小球分布均勻，腎小球中細(xì)胞數(shù)量以及基質(zhì)均勻，腎小管上皮細(xì)胞圓潤、飽滿，刷狀緣排列整齊規(guī)則，髓質(zhì)未見明顯異常；泌尿小管之間的結(jié)締組織為腎間質(zhì)，未見明顯結(jié)締組織增生，未見明顯的炎性改變。AH組大鼠局部間質(zhì)毛細(xì)血管出現(xiàn)擴(kuò)張。CH組大鼠間質(zhì)中有較多的毛細(xì)血管出現(xiàn)擴(kuò)張或淤血現(xiàn)象。CH-P組大鼠間質(zhì)中有較多的毛細(xì)血管出現(xiàn)擴(kuò)張。具體情形如圖3所示。

圖3 缺氧對(duì)大鼠腎臟組織的影響(200×)

2.2.3 高原缺氧對(duì)肝臟組織的影響

缺氧組大鼠肝臟組織病變情況較為明顯。HE染色結(jié)果顯示，P組大鼠被膜完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝板排列規(guī)則、整齊，肝細(xì)胞圓潤、飽滿，無明顯炎性改變。AH組大鼠少量肝細(xì)胞脂肪發(fā)生變性，胞質(zhì)中可見微小的圓形空泡；匯管區(qū)少量膽管細(xì)胞增生；肝小葉中偶見炎性細(xì)胞點(diǎn)狀浸潤。CH組大鼠較多肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，胞質(zhì)中可見大小不一的水泡。CH-P組大鼠個(gè)別肝細(xì)胞胞質(zhì)中可見小的圓形脂肪空泡。具體情形如圖4所示。

圖4 缺氧對(duì)大鼠肝臟組織的影響(200×)

2.2.4 高原缺氧對(duì)肺臟組織的影響

大鼠肺臟組織在低氧條件下存在病理學(xué)改變。HE染色結(jié)果顯示，P組大鼠組織被膜完整，氣道粘膜上皮未見明顯異常，整體肺泡壁無明顯增厚，無明顯炎性浸潤。AH組大鼠氣道腔中多見較多分泌物；較大范圍的肺泡壁增厚(程度不同)，肺泡腔狹窄，上皮細(xì)胞和纖維細(xì)胞增生。CH組大鼠少部分氣道腔中可見分泌物；大范圍的肺泡壁增厚(輕中度)，上皮細(xì)胞和纖維細(xì)胞增生，巨噬細(xì)胞數(shù)量變多，局部肺泡腔消失，可見少量小動(dòng)脈炎性細(xì)胞包繞。CH-P組大鼠較多肺泡壁增厚(輕度)，肺泡腔狹窄，上皮細(xì)胞和纖維細(xì)胞增生，血管周圍可見炎性細(xì)胞包繞。具體情形如圖5所示。

圖5 缺氧對(duì)大鼠肺臟組織的影響(200×)

2.3 藥物代謝動(dòng)力學(xué)測定結(jié)果

P組、AH組、CH組、CH-P組的平均血藥濃度—時(shí)間曲線圖見圖6～7。與氯沙坦鉀P組比，氯沙坦鉀AH、CH組的AUC0-t分別降低了40.13%、54.49%；MRT0-t分別降低了10.20%、15.00%；Cmax分別降低了57.18%、58.56%；t1/2分別降低了17.53%、21.65%；ke分別升高了20.83%、29.17%；Vd分別升高了21.54%、58.85%；CL分別升高了43.75%、87.50%。另外，相比氯沙坦鉀P組，CH-P組的t1/2升高了44.33%、Ke降低了25.00%。相較于P組，兩缺氧組的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)變化趨勢(shì)一致，主要表現(xiàn)為t1/2縮短、CL、Vd升高以及AUC降低，CH-P組的AUC、CL、Vd、t1/2變化趨勢(shì)與缺氧組相反，具體參數(shù)變化情況見表3。

表3 高原低氧對(duì)氯沙坦鉀藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響

圖6 四組氯沙坦鉀血漿濃度-時(shí)間曲線

圖7 四組EXP 3174血漿濃度-時(shí)間曲線

與氯沙坦羧酸P組比，氯沙坦羧酸AH、CH組的AUC0-t分別降低了43.32%、53.94%；MRT0-t分別降低了19.14%、20.22%；Cmax分別降低了37.62%、45.31%；CL分別升高了57.02%、101.65%。另外，相比于氯沙坦羧酸P組，CH-P組的t1/2升高了38.28%，CL、Vd、ke等參數(shù)降低，但無顯著性差異。與氯沙坦鉀一致，氯沙坦羧酸缺氧組藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)生變化，主要表現(xiàn)為CL升高以及AUC、MRT降低，具體參數(shù)變化情況見表4。

表4 高原低氧對(duì)EXP 3174 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響

3.討論

本研究結(jié)果顯示，急性和慢性缺氧組大鼠的WBC數(shù)均升高，提示機(jī)體可能會(huì)在缺氧條件下產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而促使炎癥反應(yīng)的發(fā)生。與課題組前期研究不一致的是[5]，模擬低氧造模使大鼠機(jī)體內(nèi)WBC數(shù)目降低，反而顯示出機(jī)體在模擬低氧條件下免疫功能出現(xiàn)負(fù)面調(diào)節(jié)情況。這可能是由于模擬低氧與現(xiàn)場缺氧的差異以及低氧造模時(shí)間的長短引起的不同，其原因有待進(jìn)一步研究。機(jī)體進(jìn)入低氧環(huán)境中會(huì)增加供氧能力從而滿足原本的耗氧需求。與文獻(xiàn)報(bào)道一致的是[6]，本研究中發(fā)現(xiàn)缺氧導(dǎo)致HGB含量增高，可能是由于在低氧環(huán)境中，體內(nèi)血紅素濃度升高，從而運(yùn)輸更多的氧氣來應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激。另外，大鼠從長期缺氧地區(qū)再次返回平原地區(qū)后，其血常規(guī)指標(biāo)較缺氧組雖有所回調(diào)但仍與平原區(qū)差異較大，提示缺氧環(huán)境對(duì)機(jī)體生理及機(jī)體功能影響深遠(yuǎn)。

藥物在機(jī)體內(nèi)的代謝和排泄與肝腎功能密切相關(guān)。結(jié)果表明，與P組比，除CH-P組的UREA與HDL外，其余各組所有指標(biāo)均有顯著性差異，且慢性缺氧返回常氧組的變化趨勢(shì)與兩缺氧組一致，說明缺氧對(duì)大鼠的血脂、肝腎功能存在顯著影響。肝臟是藥物代謝主要器官，在高原缺氧條件下，肝功能的異常會(huì)對(duì)肝藥酶的活力和轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能產(chǎn)生影響，從而改變藥物在體內(nèi)的代謝特征[7]。與羅冰鋒[8]等的研究不一致的是，本研究發(fā)現(xiàn)缺氧組ALT、AST均顯著降低，其原因仍有待進(jìn)一步闡釋。腎功能指標(biāo)顯示進(jìn)入高原后UREA水平下降，說明進(jìn)入高原后藥物的排泄能力會(huì)受到顯著影響，導(dǎo)致不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)增加。不僅如此，缺氧組大鼠伴隨著GLU水平升高，其TG、CHOL水平降低。

病理結(jié)果顯示，P組大鼠各臟器組織結(jié)構(gòu)正常、清晰，無明顯的炎性改變。缺氧組大鼠肺臟組織出現(xiàn)不同程度增厚且肝臟組織少量肝細(xì)胞脂肪發(fā)生變性，心肌、腎臟組織均出現(xiàn)細(xì)微損傷。高海拔環(huán)境中，各臟器相對(duì)缺氧，產(chǎn)生大量的活性氧物質(zhì)，導(dǎo)致臟器細(xì)胞損傷，出現(xiàn)微循環(huán)障礙[9]，同時(shí)由于機(jī)體的抗氧化功能下降，肝損傷、急性腎衰竭等多種疾病的發(fā)生幾率大大增加[10]。另外，機(jī)體經(jīng)過長期缺氧后返回平原地區(qū)仍見其心、肝、肺、腎組織有輕微損傷，如心肌纖維松解，肝細(xì)胞胞質(zhì)中仍存在圓形脂肪空泡，肺泡血管周圍仍可見炎性細(xì)胞包繞等。提示從缺氧環(huán)境回到平原地區(qū)后，機(jī)體仍存在一定程度的損傷，在用藥時(shí)需要將機(jī)體的實(shí)際情況納入到考慮范疇之中。

近年來，高原缺氧對(duì)機(jī)體藥物代謝動(dòng)力學(xué)的影響備受關(guān)注。大鼠進(jìn)入高原地區(qū)后，部分藥物吸收速率減慢且吸收程度降低，如芍藥苷和羅紅霉素[11]等，本研究結(jié)果與其一致，主要表現(xiàn)為AUC、Cmax降低，Tmax延長。藥物與血漿蛋白結(jié)合后無法通過毛細(xì)血管，只有游離型藥物才能通過屏障，完成代謝和排泄。ALB作為與藥物結(jié)合的主要蛋白，其數(shù)值的變化會(huì)影響藥物濃度[5]。氯沙坦鉀的蛋白結(jié)合率在常氧情況下已經(jīng)超過98%。因此，當(dāng)體內(nèi)藥量未曾發(fā)生改變的情況下，ALB數(shù)變化對(duì)血漿蛋白結(jié)合率的影響程度猶未可知。另外，低氧條件下，藥物血漿蛋白結(jié)合率是否會(huì)受到影響也需進(jìn)一步探討。肝、腎是藥物的消除器官，高原缺氧條件下，肝腎器官的損傷會(huì)導(dǎo)致藥物t1/2及ke值異常。研究發(fā)現(xiàn)缺氧使氯沙坦鉀Vd升高，且t1/2縮短，因此CL升高，消除加快。另外，大鼠體內(nèi)CYP2C11是氯沙坦鉀的主要代謝酶，該酶在低氧條件下的mRNA活性及表達(dá)會(huì)直接影響氯沙坦鉀的代謝情況，目前大鼠體內(nèi)的CYP2C11在缺氧條件下的表達(dá)變化存在爭議，需進(jìn)一步研究證實(shí)[7]。此外，代謝產(chǎn)物EXP 3174在缺氧條件下同樣表現(xiàn)為AUC、Cmax降低，t1/2縮短，CL及Vd升高，從而證實(shí)了氯沙坦鉀在高原缺氧環(huán)境下口服吸收減慢、程度降低、消除加快這一結(jié)論。

目前針對(duì)高原缺氧對(duì)機(jī)體藥物代謝動(dòng)力學(xué)影響的研究主要集中于機(jī)體進(jìn)入缺氧狀態(tài)后藥物代謝及排泄的變化。本研究在此基礎(chǔ)上，將缺氧大鼠運(yùn)回平原地區(qū)并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)相比缺氧組大鼠，其藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)特征的變化有所回落，但與P組大鼠相比仍有差異，主要表現(xiàn)在MRT及t1/2延長，提示CH-P組大鼠消除減慢。此現(xiàn)象出現(xiàn)的機(jī)制仍就可能與代謝酶活性和表達(dá)的改變，以及其核受體[12，13]和細(xì)胞因子[14]的調(diào)節(jié)相關(guān)，具體原因需進(jìn)一步研究探討。