淺談牛結節性皮膚病的實驗室診斷技術及疫情處置要點

張遲蕾，張靖蕾，張江波

（1.焦作市山陽區農業農村局，河南 焦作 454150；2.焦作市中站區龍翔街道辦事處）

牛結節性皮膚病，于2019年8月在我國新疆伊犁首次被報告，之后在廣東、安徽、浙江等地也陸續被發現，對我國的養牛業造成了極大損失。為了做好該病的防控工作，快速準確的確診和對疫情及時有效的處置至關重要。因此對該病的實驗室診斷技術、疫情確診程序及處置要點進行探討分析，具有十分重要的意義。

牛結節性皮膚病（LSD）是牛結節性皮膚病毒引起的牛全身性感染疫病，臨床以皮膚結節為特征，該病不會傳染人，不是人獸共患病。該病對養牛業危害極大，能夠導致牛只消瘦、品質降低、產奶量降低，母牛流產、公牛暫時性或永久性不育，并導致部分牛死亡，對養牛場、牛奶產業甚至出口外貿都會帶來嚴重影響，必須高度警惕和重視。本文重點梳理分析了牛結節性皮膚病的實驗室診斷技術、疫情確診程序及處置要點，從而為做好牛結節性皮膚病防治提供參考借鑒。

1 牛結節性皮膚病

1.1 流行情況

牛結節性皮膚病于1929 年首次在非洲贊比亞出現，1988 年，傳入埃及，1989 年傳至以色列，之后逐漸傳至土耳其和伊拉克、伊朗、沙特以及阿塞拜疆、亞美尼亞等國家，隨后逐漸傳至歐洲等國家，2019年8月，我國首次在新疆發現該病。

1.2 生物學特性及主要癥狀

牛結節性皮膚病屬于痘病毒科、山羊痘病毒屬，屬于DNA病毒，只有1個血清型，基因組穩定，很少發生遺傳變異，基因組比較大。臨床癥狀主要為發熱、皮膚（黏膜、器官）表面出現結節、消瘦、淋巴結腫大、奶牛產奶量下降，甚至引發死亡。

2 實驗室診斷技術

2.1 抗體檢測

牛結節性皮膚病毒侵入機體后，會在動物體內產生相應的抗體，因此通過檢測抗體，來間接判定動物是否患病。

常用的抗體檢測方法有：病毒中和實驗、間接熒光抗體試驗（IFAT）、瓊脂凝膠免疫擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等。但抗體檢測手段還存一些問題和不足，比如病毒試驗，由于需要活的病毒，因此存在一定的安全隱患，對實驗室防護能力和操作人員操作技術要求很高，操作不當，會造成病毒的擴散。另外抗體檢測手段，雖然是通過檢測抗體來判定動物是否患病，但對于疫苗免疫產生的抗體或者病毒產生的抗體卻無法區別診斷，因此，抗體檢測手段存在自身的瓶頸性，而抗體測的優勢主要在于群體抗體檢測，能夠大批量開展檢測，然而對于個體檢測，優勢不明顯，結果也不可靠。

2.2 病原檢測

由于抗體檢測存在的諸多問題和不足，因此，牛結節性皮膚病的首選檢測手段，應當是分子生物學檢測技術。分子生物學技術即病原學診斷，聚合酶鏈式反應技術，通過對牛結節性皮膚病核酸片段進行提取、擴增、分析，來診斷動物體內是否含有病毒，因此，相對血清學技術，更穩定、更科學、更準確，也是今后實驗室診斷技術的一個主要研究方向。

主要的病原學檢測技術有：普通PCR、qRNA（實時熒光定量PCR）、RT-PCR（反轉錄酶PCR技術）等，普通PCR檢測手段是最早的分子生物學診斷技術，在實驗室資源有限、專業人員技術水平不高的情況下，是最值得推薦的技術，在一些地方被廣泛應用。另外一種最常用的是qRNA，即實時熒光定量PCR，該方法既能定性，也能定量，靈敏度更高，與普通PCR相比，優勢明顯，在一些有條件的地方，已經逐步取代了普通PCR技術，但是無法有效區分山羊、綿羊痘病毒和結節性皮膚病病毒。而RT-PCR，即反轉錄酶PCR技術，有效地解決了這一問題，能夠有效區分山羊痘病毒、綿羊痘病毒和牛結節性皮膚病病毒，因此，RT-PCR技術相對前兩種技術，具有定量、定性、精確、穩定等諸多優點，也是今后診斷技術的一個主要研究方向，隨著技術的成熟，將越來越多地用于牛結節性皮膚病的診斷。

3 疫情的確診

依法科學地對疫情進行確診，是及時有效處置牛結節性皮膚病的前提，也是最大程度減小損失的關鍵。根據牛結節性皮膚病的病毒特點、流行規律及生物學特性，按照《牛結節性皮膚病防治技術規范》的要求，牛結節性皮膚病的確診，主要有“可疑疫情、疑似疫情、疫情確診”三個程序。其中“可疑疫情”，是指縣級畜牧獸醫主管部門接到有關疫情報告或者疑似病例后，立即組織人員到現場展開調查，通過臨床診斷初步判定為牛結節性皮膚病的，認定為“可疑疫情”，然后采集有關病料、拭子、血清等，送縣級動物疫病預防控制中心進行病原學檢測，經檢測病原陽性的，確定為“疑似疫情”，然后縣級畜牧獸醫主管部門采集樣品送省級動物疫病預防控制機構或者有資質的實驗室進行病原檢測，檢測結果陽性的，可認定為“確診疫情”。需要注意的是，各省份首次確認的牛結節性皮膚病疫情必須由中國動物衛生與流行病學中心實驗室確認。

4 疫情處置要點

4.1 封鎖的實施

目前，農業農村部暫時將該病列為二類動物疫病，按照《動物防疫法》規定，對二類動物疫病由縣級以上人民政府畜牧獸醫主管部門劃定疫點、疫區和受威脅區，同時采取隔離、撲殺、銷毀、無害化處理、緊急免疫接種、限制易感動物和動物產品及有關物品出入等控制、撲滅措施，并未強制要求采取封鎖措施。按照《防治技術規范》的規定，確診疫情后，要按照二類動物疫病的規定進行處置，一般不采取封鎖措施，如確實有必要的，由縣級政府發布封鎖令進行封鎖，禁止易感動物及動物產品出入。

4.2 疫點的處置

關于對疫點的處置，主要是對于確診陽性的病牛，立即進行隔離，并采取撲殺、銷毀等措施，對同群牛進行采樣檢測，一旦發現病原學陽性的，也立即撲殺并銷毀，檢測陰性的，可繼續飼養，建議提前出欄屠宰，對于環境，要強化生物安全措施，改善動物防疫條件，嚴格做好清洗、消毒、無害化處理等措施，加強對場區、生產區、生活區、周邊道路等清洗、消毒工作，消滅廠區內的蚊、蠅、蜱等媒介，切斷傳播途徑。

4.3 疫區及受威脅區的處置

首先是對疫區的處理措施。要禁止牛只出入，禁止未經檢疫的牛皮張、精液等產品調出。對吸血蟲媒進行控制，滅殺飼養場所昆蟲及幼蟲，清除滋生環境。對監測發現的病原學陽性牛只進行撲殺和無害化處理，同群牛只隔離觀察。對疫區實施封鎖的，還應在疫區周圍設警示標志，在交通路口設置檢查站。

其次，是對受威脅區的處置措施。禁止牛只出入和未經檢疫的牛皮、精液等產品調出。對牛只養殖場、牧場等場所進行監測排查和感染風險評估。疫情所在縣、相鄰縣可采用山羊痘疫苗按照山羊5倍的劑量要求，對所有牛只全部進行緊急免疫。