CDX2、HNF4α、SOX2蛋白聯(lián)合檢測對幽門螺桿菌感染相關(guān)高危胃癌的診斷價值

吳 丹， 曹 司， 黃 坤

(1.首都醫(yī)科大學電力教學醫(yī)院消化內(nèi)科，北京市100073；2.民航總醫(yī)院消化內(nèi)科，北京市100123)

胃癌發(fā)病率呈逐年攀升的趨勢[1]。幽門螺桿菌(helicobacter pylori，Hp)感染是導致胃黏膜上皮細胞炎性浸潤的主要原因之一，胃部長期Hp定植能夠誘導淺表性胃炎，引發(fā)萎縮性胃炎[2]。而萎縮性胃炎患者胃黏膜處于高危癌前病變階段，如未采取有效措施進行干預(yù)，可能進入非典型增生期，最終導致胃癌發(fā)生[3]。Hp感染可能對機體多條腫瘤相關(guān)信號通路起到促進作用，并與宿主部分蛋白表達關(guān)系密切[4]。尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2(caudal type homeobox transcription factor 2，CDX2)對胃癌及癌前病變具有一定指示作用[5]。肝細胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4a)對維持胃腸表型具有積極作用[6]。性別決定相關(guān)基因簇2(sex determining region Y-box 2，SOX2)在胚胎發(fā)育及惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色[7]。本文探討CDX2、HNF4a及SOX2蛋白對Hp感染相關(guān)高危胃癌的診斷效能，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年6月—2019年6月本院收治的87例胃癌患者(胃癌組)及136例萎縮性胃炎患者(胃炎組)為研究對象。胃癌組患者均為腺癌，其中男47例，女40例，年齡45～80歲，平均(61.17±10.88)歲；胃炎組男79例，女57例，年齡44～78歲，平均(60.44±11.15)歲；兩組一般資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，患者自愿參加并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準

入組標準：①經(jīng)過胃鏡活檢及術(shù)后組織病理確診的胃癌或萎縮性胃炎患者；②年齡18～80歲；③臨床資料完整。排除標準：①既往接受胃部手術(shù)者；②合并其他惡性腫瘤者；③合并其他消化系統(tǒng)疾病者；④接受過抗Hp治療者；⑤服用非甾體抗炎藥物者；⑥哺乳期、妊娠期婦女。

1.3 主要儀器及試劑

兔抗人CDX2單克隆抗體(貨號：abx358005)購自北京博蕾德生物科技有限公司；兔抗人HNF4α單克隆抗體(貨號：3121-100)購自艾美捷科技有限公司；兔抗人SOX2單克隆抗體(貨號：abx031506)購自北京柏奧易思生物科技有限公司。通用型二步法檢測試劑盒(PV-6000)購自北京欣興唐生物科技有限公司；DAB顯色試劑盒(貨號：AR1022)購自武漢博士德生物工程有限公司。CDX2、HNF4α、SOX2陽性對照為已知染色陽性的胃癌/萎縮性胃炎組織切片，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.4 免疫組化法測定CDX2、HNF4α、SOX2蛋白陽性表達

將手術(shù)切除的胃癌/萎縮性胃炎組織制備石蠟標本，制備成4 μm的組織切片；依次進行脫蠟、脫水、滅活內(nèi)源性過氧化物酶、胰蛋白酶抗修復(fù)液修復(fù)；采用胎牛血清封閉30 min，加入一抗兔抗人單克隆抗體(1∶150)于4 ℃條件下孵育過夜；于次日復(fù)溫后，加入標記生物素的通用性二抗PV-6000(1∶5 000)，于室溫條件下孵育30 min，顯色、充分沖洗后，采用蘇木精染色、脫水、透明、中性樹膠封固。結(jié)果判定：CDX2、HNF4α、SOX2陽性表達均為細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。染色強度：無著色記0分，淺黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分。陽性細胞計數(shù)：0%～5%記0分，5%～25%記1分，25%～50%記2分，50%～75%記3分，≥75%記4分。參照參考文獻[8]以染色強度、陽性細胞比例乘積為判定標準：0分為陰性；1～3分為弱陽性，4～6分為中度陽性，7～9分為強陽性。

1.5 13C-尿素呼氣試驗檢測Hp感染

患者空腹≥6 h，口服13C標記的尿素，搜集患者呼氣100 mL，將待測氣體與13C紅外線能譜儀(德國，格納分析技術(shù)有限公司)檢測孔連接，儀器自動檢測生成報告，以DOB≥2.5為Hp陽性(即Hp感染)[9]。

1.6 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

2.1 兩組CDX2、HNF4α、SOX2蛋白陽性表達的比較

胃癌組CDX2、SOX2陽性表達率低于胃炎組(P<0.05)，HNF4α陽性表達率高于胃炎組(P<0.05；表1)。免疫組化結(jié)果顯示：CDX2、HNF4α、SOX2蛋白均定位于細胞核，其強陽性表達見圖1。

表1 兩組CDX2、HNF4α、SOX2蛋白陽性表達的比較 單位：例(%)

圖1 兩組CDX2、HNF4α、SOX2蛋白免疫組化結(jié)果(SP，400×)

2.2 兩組不同Hp感染狀況CDX2、HNF4α、SOX2蛋白陽性表達的比較

胃癌組Hp陽性率(78.16%)高于胃炎組(38.97%；P<0.05)。

兩組Hp陽性者CDX2及HNF4α陽性表達率均高于Hp陰性者(P<0.05)，SOX2陽性表達率均低于Hp陰性者(P<0.05；表2)。

表2 兩組不同Hp感染狀況CDX2、HNF4α、SOX2蛋白陽性表達的比較 單位：例(%)

2.3 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表達及其聯(lián)合對Hp相關(guān)高危胃癌的診斷效能

以染色評分為變量繪制ROC曲線，各指標的AUC分別為0.781、0.829、0.788，三者聯(lián)合的靈敏度最高(表3、圖2)。

表3 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表達及其聯(lián)合對Hp相關(guān)高危胃癌的診斷效能

圖2 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白診斷Hp相關(guān)高危胃癌的ROC曲線

3 討 論

胃癌患者發(fā)病初期缺乏典型癥狀，首次確診時通常已進展為中晚期，預(yù)后欠佳，因此早期診斷尤為重要[10]。CDX2是一種與尾側(cè)相關(guān)的同源盒轉(zhuǎn)錄因子，參與正常和異常部位的腸道分化，Saito等[11]指出，CDX2的調(diào)節(jié)可能通過miR-181b參與IL-6/STAT3信號通路，進而參與microRNA相關(guān)的炎癥癌變過程。SOX2通過調(diào)節(jié)PTEN抑制胃癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移，與CDX2之間存在相反的表達模式[12]。HNF4a作為消化道早期發(fā)育的關(guān)鍵因子之一，被認為與腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)，可作為早期胃癌的潛在治療靶點[13]。本文胃癌組CDX2及SOX2陽性表達率低于胃炎組、HNF4α陽性表達率高于胃炎組(均P<0.05)，提示上述三種蛋白參與了萎縮性胃炎向胃癌進展的過程。

除遺傳因素以外，胃癌的發(fā)生還受吸煙、飲酒、不良飲食、缺乏體力活動、病毒感染和壓力增加等非遺傳因素的影響[14]。Hp感染在胃癌中的作用已被證實[15]。本文胃癌患者Hp陽性率高于萎縮性胃炎患者，與羅偉等[16]結(jié)果一致。胃癌患者Hp陽性組織中CDX2及HNF4α陽性表達率高于Hp陰性者，SOX2陽性表達率低于Hp陰性者(P<0.05)，原因可能包括以下方面：①Hp強毒性基因型可能通過對核因子-κB等信號途徑進行激活，以影響CDX2表達水平，促進癌前病變或胃癌發(fā)生；②HNF4α可能通過對Hp感染所引起的炎癥反應(yīng)進一步放大，從而發(fā)揮促癌作用；③當機體發(fā)生Hp感染后引起的炎癥反應(yīng)可能導致炎癥因子釋放量增加，進而誘發(fā)SOX2甲基化，最終下調(diào)SOX2表達水平。楊琴等[8]指出，相較于Hp陰性胃癌患者，Hp感染者具有更高的CDX2及HNF4α陽性表達率；沈玲等[17]發(fā)現(xiàn)，Hp感染的胃癌患者癌組織中SOX2陽性表達率明顯低于Hp陰性者，與本研究結(jié)果一致。本文CDX2、HNF4α、SOX2染色評分用于診斷Hp相關(guān)高危胃癌均具有較高的靈敏度及特異度，且三者聯(lián)合靈敏度更高，提示臨床中上述3種蛋白的聯(lián)合檢測作為Hp相關(guān)高危胃癌的輔助診斷，對胃癌的防治具有積極意義。

胃癌組織中CDX2、HNF4α、SOX2蛋白對Hp相關(guān)高危胃癌具有較高的診斷效能，且三者聯(lián)合可進一步提高靈敏度。