腦脊液HIF- 1α、AQP4 水平變化與缺血缺氧性腦病新生兒NBNA 評分的關聯性及動態監測臨床意義

盧山，閆風林

(1.信陽市平橋區中醫院兒科;2.信陽市中心醫院新生兒科，河南 信陽 464000)

新生兒缺血缺氧性腦病（Hypoxie-ischemic encephalopathy，HIE） 是圍生期缺血缺氧所致的神經系統損傷。 HIE 是新生兒科常見疾病之一，近年隨醫療技術進步, 此類患兒病死風險得到顯著控制,但部分患兒仍存在腦癱、癲癇等后遺癥，而積極完善其病情程度及預后評估系統以強化對癥治療對改善患兒預后具有重要意義[1]。 目前中國20 項新生兒行為神經測定（NBNA）評分檢查法及臨床癥狀是評估新生兒HIE 病情程度，盡管具有一定參考價值，但存在一定的主觀性，導致結果偏畸。缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）作為缺氧應答整體性調節因子能激活眾多與缺氧相關生理反應基因，并精準調節細胞缺氧耐受程度[2]； 水通道蛋白4（AQP4）是器官、組織內具高度特異性的一種膜蛋白，能維持機體器官組織水平衡。 有報道顯示，AQP4 生成異常與腦組織水腫有關[3]。 本研究通過探討腦脊液HIF-1α、AQP4 水平變化與HIE 新生兒NBNA 評分間關系，旨在為臨床完善HIE 新生兒病情評價機制提供參考。 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月-2020年7月我院118 例HIE 新生兒作為研究對象，根據癥狀分為輕度組62 例，中度組34 例，重度組22 例。 納入標準：符合HIE 診斷標準[4]；胎齡37～41 周；無先天代謝性疾病；單胎；出生體質量＞2500g；家屬知情理解，簽署同意書。 排除標準：母親有自身免疫性疾病者；先天畸形者；顱內感染者；有心肺功能缺陷者。

1.2 方法 ⑴生化指標檢測： 患兒出生后1d、14d、28d 進行進行腰椎穿刺抽取腦脊液標本2ml，置硬質塑料管內（注意： 整個過程需嚴格執行無菌操作），所采集腦脊液標本保存至-20℃冰箱，待測。檢測時取出腦脊液標本于室溫下解凍，離心（半徑8 cm，轉速3200r/min，時間10min），采集上清液，采用上海長島生物技術有限公司酶聯免疫試劑盒測HIF-1α、AQP4 水平。 ⑵NBNA 評分：由同1 名資深專科醫師對患兒出生1d、14d、28d 的NBNA 進行評價，評分內容包括新生兒行為能力6 項、被動肌張力4 項、主動肌張力4 項、原始反射3 項、一般評價3 項，每項評分0～3 分，20 項評分項總分40分，評分越高提示病情越輕。 ⑶治療：首先去除病因治療，積極糾正缺血缺氧，維持良好通氣功能，同時予以對癥治療，處理驚厥、腦水腫、腦干癥狀等。 治療效果評價標準：a、神經癥狀、體征消失；b、生命體征穩定，脈搏、呼吸正常，瞳孔反射正常；c、可正常進乳；d、原始反射正常；e、肌張力正常。符合b 項及其他項1 條以上者為預后良好，否則為預后不良。

1.3 觀察指標 ⑴對比三組出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA 評分。 ⑵分析生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA 評分間關系。 ⑶對比不同預后患兒出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA評分及一般資料。 ⑷多元線性回歸分析出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平與預后關系。

1.4 統計學處理 采用SPSS21.0 統計分析軟件，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；計數資料以率表示，兩組間比較采用χ2檢驗；Pearson、多元線性回歸分析變量間關系。 P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對比三組出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA 評分 三組出生后不同時間腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA 評分經單因素方差分析，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩兩對比，隨病情加重，腦脊液HIF-1α、AQP4 水平升高，NBNA 評分降低（P＜0.05），見表1。

表1 對比三組不同時間生化指標及NBNA 評分（±s）

表1 對比三組不同時間生化指標及NBNA 評分（±s）

注：與同期輕度組比較，aP＜0.05；與同期中度組比較，bP＜0.05；與同組出生后1d 比較，cP＜0.05；與同組出生后14d 比較，dP＜0.05。

組別 例數輕度組中度組重度組62 34 22 FP HIF- 1α（ng/ml）出生后1 d 出生后14 d 出生后28 d 出生后28 d 出生后1 d AQP4（g/L）出生后14 d NBNA 評分（分）出生后1 d 出生后14 d 出生后28 d 0.37±0.06 0.75±0.35a 1.13±0.20ab 114.633＜0.001 0.30±0.04c 0.59±0.22ac 0.91±0.25abc 123.377＜0.001 0.25±0.03cd 0.46±0.19acd 0.57±0.18abcd 61.129＜0.001 15.08±2.38 18.70±2.49a 21.41±3.05ab 57.372＜0.001 14.30±1.03c 16.29±1.84ac 19.30±2.71abc 72.541＜0.001 13.61±1.57cd 14.81±1.26acd 16.72±2.33abcd 29.163＜0.001 36.98±2.07 33.57±1.96 29.86±1.88ab 109.556＜0.001 38.29±1.05c 35.82±1.73c 32.25±1.71abc 154.602＜0.001 39.35±0.43cd 38.58±1.06cd 35.28±1.40abcd 174.138＜0.001

2.2 分析腦脊液生化指標與NBNA 評分間關系經Pearson 相關系數分析，出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平與NBNA 評分呈負相關（P＜0.05），見表2。

表2 分析腦脊液生化指標與NBNA 評分間關系

2.3 對比不同預后患兒腦脊液生化指標水平、NBNA 評分及一般資料 經系統治療，118 例HIE新生兒預后良好92 例，預后不良26 例。 不同預后患兒性別、出生體質量、出生方式、母親妊娠并發癥對比，差異無統計學意義（P＞0.05）；不同預后患兒胎齡、 出生后1d、14d、28d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平、NBNA 評分對比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 對比不同預后患兒腦脊液生化指標水平、NBNA 評分及一般資料

2.4 分析出生后腦脊液生化指標與預后關系 采用多元線性回歸校正胎齡、NBNA 評分后，出生后1 d、14 d、28 d 時腦脊液HIF-1α、AQP4 水平仍與預后有關，且隨時間推移二者偏回歸系數逐漸升高（P＜0.05），見表4。

表4 多元線性回歸分析

3 討論

新生兒HIE 發生后可出現腦部水腫、軟化等，甚至出現腦萎縮，是造成腦癱、死亡的重要病因。輕度新生兒HIE 一般預后良好，但中、重度患兒多存在不同程度后遺癥，而有效評價新生兒HIE 病情及轉歸，積極完善干預方案是改善預后的關鍵環節。

NBNA 評分主要通過出生后2～3d、12～14d、26～28d 神經行為功能評價新生兒NBNA 病情特征，是及時發現新生兒神經行為發育異常的一種重要手段，但其評估內容繁多且易受評價者主觀因素影響[5]。 基于缺氧及腦水腫是新生兒HIE 主要病理生理特征，其相關生化調節因子水平變化（HIF-1α、AQP4）或可為臨床評估新生兒HIE 病情提供新視角。 其中HIF-1α 是HIF 家族主要成員，是介導哺乳動物細胞在缺血/缺氧條件下產生適應性反應的重要調節因子。 大量實驗證實，正常情況腦、肝組織可生成HIF-1α，但低氧狀態，其可在1h 內反應增加，約36h 達峰值[6,7]。 AQP4 是分布在不同組織、器官內的一種高度特異性膜蛋白。 有研究檢測腦缺血再灌注腦水腫大鼠腦組織提出，AQP4參與腦缺血所誘發的腦水腫形成過程,同時可調節水平衡，影響中樞神經系統發育[8,9]。 武偉[10]研究中發現，HIF-1α、AQP4 在HIE 新生兒呈現異常升高狀態，與病情呈現明顯相關性。本研究發現，HIE 新生兒隨病情加重，腦脊液HIF-1α、AQP4 水平呈升高趨勢，NBNA 評分呈降低趨勢, 且呈明顯負相關（P＜0.05）,與上述研究相似。 因此說明腦脊液HIF-1α、AQP4 水平變化與NBNA 評分關系密切，或可作為NBNA 評分評估新生兒HIE 病情及預后的補充。 分析主要是因NBNA 評分越低提示HIE 新生兒神經功能損害越嚴重，同時HIF-1α、AQP4 參與腦缺血缺氧及腦水腫形成過程，機體為適應此病理性改變，隨病情加重HIF-1α、AQP4 生成呈升高趨勢。

還有研究顯示，新生兒HIE 病情轉歸是多因素、 多過程參與的結果，胎齡等均是其影響因素[11,12]。 本研究進一步采用多元線性回歸校正胎齡、NBNA 評分，結果顯示，HIF-1α、AQP4 水平仍與預后有關（P＜0.05），說明腦脊液HIF-1α、AQP4 水平是HIE 新生兒預后的重要影響因素且隨時間推移二者降低程度越低，患兒預后不良風險越大。 因此，臨床可通過動態監測HIE 新生兒脊液HIF-1α、AQP4 水平變化以及時調整干預方案，確保患兒能最大化獲益。 但本研究不足之處在于僅作為臨床觀察研究，未對HIF-1α、AQP4 在新生兒HIE發生發展中的具體作用機制進行深入探究，尚需后期基礎研究進一步從多角度進行分析，以期為HIE 診治提供新思路。

綜上可知，腦脊液HIF-1α、AQP4 水平變化與HIE 新生兒NBNA 評分關系密切，且是預后的重要影響因素，動態監測便于臨床及時評價此類患兒病情轉歸，以積極完善干預措施。