PD-1/PD-L1 信號通路在三陰性乳腺癌的表達(dá)及其意義

陳燕枝，張文，張可麗，魏穎，張建東，方義湖

(1.江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理教研室，江西 上饒 333400；2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科，江西 南昌 330000；3.上饒市人民醫(yī)院病理科，江西 上饒 333400)

0 引言

乳腺癌作為全球高發(fā)惡性腫瘤疾病之一，過去20 多年中，該病發(fā)病率上升1.4 倍，世界上多數(shù)國家及其地區(qū)乳腺癌發(fā)病率上升30%~40%[1]。免疫療法是指激發(fā)、調(diào)動機(jī)體免疫系統(tǒng)起到控制、消滅腫瘤細(xì)胞一種治療措施，作為現(xiàn)階段腫瘤領(lǐng)域研究重點問題。相關(guān)研究證實[2]，程序性死亡分子1(PD-1)和程序性死亡配體1(PD-L1)的單克隆抗體類藥物能增強(qiáng)機(jī)體T 細(xì)胞活性達(dá)到增強(qiáng)自身免疫力抗腫瘤目的。單克隆抗體PD-1/ PD-L1 抑制劑應(yīng)用于黑色素瘤、非小細(xì)胞癌治療中有相關(guān)報道，但對乳腺癌疾病相關(guān)報道較少。本文就探討PD-1/PD-L1 信號通路在三陰性乳腺癌(TNBC)表達(dá)情況及預(yù)后關(guān)系，為后期臨床治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取上饒市人民醫(yī)院和南昌市第二附屬醫(yī)院2016 年1月至2019 年12 月收入200 例三陰性乳腺癌(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)存檔石蠟標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者經(jīng)過病理組織檢查確診為原發(fā)性乳腺癌；②經(jīng)過家屬、患者同意后參與本次試驗；③無精神異常、抑郁癥疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①影響到本次試驗進(jìn)程疾病；②一般資料不全者；③合并其他惡性腫瘤。

選取同期于我院行手術(shù)切除的病理診斷為非三陰性乳腺癌的40 例患者的乳腺癌組織(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)石蠟標(biāo)本為對照。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法

所有患者病理切片均采用組織芯片儀制成，并制作成7×9 大小受體蠟塊，每個微孔直徑大小為0.9mm，間距為1mm，深度為3mm。本次試驗開展過程中免疫組織化學(xué)檢查采用Leica BOND-MAX 全自動免疫組織化學(xué)操作。本次試驗所采用試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)準(zhǔn)判斷，并以PBS 代替一抗作為陰性對照組，用內(nèi)對照作為陽性對照。ER(克隆號EP1)、PR(克隆號EP2)、HER2( 克隆號UMAB36)、CH5/6( 克 隆號D5/16B4)、CD8( 克隆號SP16)、CD4( 克隆號SP35)、Ki-67( 克隆號MIB1)、PD-1(克隆號MRQ-22)和PD-L1(克隆號SP142)。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

由我院2 名高年資乳腺病理專科醫(yī)師并對病理結(jié)構(gòu)進(jìn)行判斷，并依據(jù)2010 年美國腫瘤學(xué)會/美國病理醫(yī)師學(xué)院判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性：ER、PR 胞核陽性細(xì)胞≥1%。依據(jù)2014 年制訂的中國乳腺癌HER2 檢測指南判定：陰性：0~1+，陽性：3+，若結(jié)果為2+，為判定標(biāo)準(zhǔn)再次進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果HER2 基因無擴(kuò)增表示為陰性，陽性：PD-1/PD-L1 細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)棕黃或棕褐色。陽性：PD-L1 細(xì)胞數(shù)≥1%，陰性：＜1%，對腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)TILS 中PD-L1 表達(dá)情況評價。PD-1 表達(dá)于間質(zhì)TILS，陽性：陽性細(xì)胞數(shù)≥5%，陰性：＜5%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 PD-1/PD-L1 表達(dá)情況

腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)TILS 中PD-L1 陽性率為17.5%(35/200)和24.0%(48/200)，高于非三陰性乳腺癌組織的 15.0%(6/40，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜ 0.05)。間質(zhì)TILS 中PD-1 陽性率為26.0%(52/200)。高于非三陰性乳腺癌組織的7.5%(3/40)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見圖1。

圖1 表達(dá)情況

2.2 三陰性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

200 例三陰性乳腺癌患者中，病理結(jié)果診斷為：68 例患者出現(xiàn)1~24 枚不等的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，12 例患者出現(xiàn)腫瘤侵犯神經(jīng)，19 例患者出現(xiàn)脈管內(nèi)癌栓，46 例患者出現(xiàn)組織學(xué)II 級，154 例患者出現(xiàn)組織學(xué)III 級。腫瘤細(xì)胞PD-L1 陽性與組織學(xué)級別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，間質(zhì)TILS PD-L1 陽性與組織學(xué)級別有關(guān)，級別越高表達(dá)越強(qiáng)(P＜0.05)，間質(zhì)TILS PD-1 陽性與臨床各病例特征無相關(guān)性。見表1。

表1 三陰性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

PD-1/PD-L1 通路可能通過誘導(dǎo)T 細(xì)胞耐受、 抑制T 細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞因子分泌、阻礙抗原呈遞過程等方式來協(xié)助腫瘤免疫逃逸[3]。近些年來相關(guān)研究證實[4]，PD-L1 廣泛存在于人體多數(shù)腫瘤組織中，如乳腺癌、肺癌、胃癌以及宮頸癌等諸多腫瘤組織微環(huán)境中，能有效提高機(jī)體腫瘤反應(yīng)性T 淋巴細(xì)胞凋亡，起到一定調(diào)節(jié)免疫原性作用。PD-1 廣泛存在于胸腺細(xì)胞、成熟T 細(xì)胞以及B 細(xì)胞中，臨床相關(guān)研究證實[5]，間質(zhì)TILS 作為PD-1 等共同抑制信號，因此，當(dāng)機(jī)體T 細(xì)胞耗竭時，PD-1 作為反映信號之一，腫瘤細(xì)胞中當(dāng)PD-L1 表達(dá)會引起機(jī)體T 細(xì)胞功能障礙。因此，PD-1/PD-L1 為靶點腫瘤免疫治療為后期腫瘤疾病控制起著重要臨床意義，阻斷PD-1/PD-L1 信號通路，相對增強(qiáng)T 細(xì)胞免疫效應(yīng)的 方法成為抗腫瘤免疫治療的一個重要手段[6]。

本文研究表明，間質(zhì)TILS PD-L1 陽性與組織學(xué)級別有關(guān)，級別越高表達(dá)越強(qiáng)，而間質(zhì)TILS PD-1 陽性與臨床各病例特征無相關(guān)性。上述結(jié)果證實，PD-1/PD-L1 信號通路的PD-L1 與間質(zhì)TLI 相關(guān)，并非為腫瘤細(xì)胞本身。Muenst 等[7]的研究發(fā)現(xiàn) 650 例乳腺癌(TNBC 127 例)中PD-L1 陽性表達(dá)率為 23.4%，其表達(dá)與年齡，腫瘤大小、分期、分級，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)，雌激素受體(estrogen receptor，ER)缺失和增殖細(xì)胞核抗原 Ki-67 高表達(dá)相關(guān)。另有研究[8]亦支持 PD-L1 表達(dá)與高 TIL 水平及其他預(yù)后不良因素，如年輕、高組織學(xué)分級、ER 陰性、孕激素受體(progesterone receptor，PR) 陰性、HER-2 過表達(dá)、高增殖指數(shù)及侵襲性亞型(三陰性、基底細(xì)胞樣)等相關(guān)。

范鈺，錢震，蘇勤軍等[7]研究中表明，非小細(xì)胞癌中PD-L1 在癌細(xì)胞以及癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的表達(dá)陽性率高達(dá)48.93%、61.70%，結(jié)果證實，癌細(xì)胞和間質(zhì)淋巴細(xì)胞中PD- L1 的表達(dá)與癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞中 PD-1 的表達(dá)呈正相關(guān)。在楊芳，陳曉品[8]研究中，PD-L1 在胃癌中的表達(dá)與PD-1 陽性間質(zhì)TILS 的數(shù)量呈負(fù)相關(guān)。PD-L1 與其受體PD-1 陽性表達(dá)之間的相關(guān)性在不同腫瘤中表現(xiàn)形式不一致，但后期仍需臨床大樣本認(rèn)證。

綜上所述，PD-1/PD-L1 在TNBC 中具有較高的表達(dá)，對三陰性乳腺癌的預(yù)后具有一定的預(yù)測作用，以及為三陰性乳腺癌免疫治療帶來更多希望。