骨肽類制劑的降壓物質檢查

王瑤，吳殷囡，汪玉馨，孟長虹

(1.江蘇省食品藥品監督檢驗研究院藥理毒理研究中心，南京 210029；2.徐州醫科大學藥物分析教研室，徐州 221004)

多組分生化藥多采用生物提取工藝制備，制備過程中，組胺或類組胺等物質可能混入，導致血壓下降、變態反應等不良反應，影響臨床用藥安全性[1-2]。骨肽是一種具有刺激成骨細胞增殖、促進新骨形成的多組分生化藥，用于治療骨質疏松癥、骨折及類風濕關節炎等疾病。近年來，骨肽類制劑的不良反應報道逐漸增加，其中變態反應、血壓下降等不良反應報道較為頻繁[3-5]，目前已被列入國家重點監控合理用藥藥品目錄[6]?，F行質量控制標準中，僅有骨瓜提取物注射液、注射用骨瓜提取物等部分制劑設定了降壓物質檢查項[7]。為了完善骨肽類制劑的質量標準，筆者依據《注射劑安全性檢查法應用指導原則》和《降壓物質檢查法》[7]，對骨肽類制劑及其原液進行降壓物質研究，為確定骨肽類制劑的降壓物質檢查限值提供參考。

1 儀器與材料

1.1儀器 離體器官儀ALC-MPA2000(上海奧爾科特生物科技有限公司)。

1.2動物 貓，雄性，體質量約3.0 kg。實驗動物使用許可證號：SYXK(蘇)2017-0062。使用環境：溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%，每小時換氣8次，光照≥200 lx。

1.3試藥 磷酸組胺(中國食品藥品檢定研究院，批號：150510-201313)；戊巴比妥鈉(上海Sigma-Aldrich 公司，批號：20140221)；肝素鈉注射液(南京新百藥業公司，批號：1180204)。供試品中骨肽類注射液11批，注射用11批，骨肽原液5批，具體信息見表1。

表1 骨肽類制劑樣品信息Tab.1 Information of osteopeptide preparation sampleS

2 方法與結果

2.1動物麻醉及手術 參照《降壓物質檢查法》，對實驗貓腹腔注射5%戊巴比妥鈉進行麻醉后固定于保溫手術臺上，分離氣管及頸動脈，在一側頸動脈插入連接離體器官儀的動脈插管，使插管內充滿肝素鈉0.9%氯化鈉溶液(1000 U·mL-1)，以記錄血壓；同時在一側分離股靜脈，插入靜脈插管，供注射藥液用。實驗中注意保持動物體溫。全部手術完畢后，將儀器調節到和動物血壓相當的高度[一般為99.8～150.0 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]，開啟動脈夾，待血壓穩定后，進行藥液注射。各次注射速度基本相同，每次注射后立即注入一定量的氯化鈉注射液，每次注射應在前一次反應恢復穩定后進行，且相鄰兩次注射的間隔時間盡量保持一致。

2.2靈敏度實驗 經靜脈插管依次注入組胺對照品稀釋液，劑量按照動物體質量調整，給予組胺0.05，0.10，0.15 μg·kg-1，給藥前后分別給與組胺進行靈敏度驗證，具體結果見表2。

表2 靈敏度驗證結果Tab.2 Sensitivity verification results

由表2可知，在0.10 μg·kg-1劑量下血壓下降值均≥20.0 mmHg，且各劑量所致反應有所差別，因此降壓實驗用動物均符合《中華人民共和國藥典》規定[7]，靈敏度驗證成立。

2.3降壓物質檢查預實驗 取制劑各品種各1批，采用3個劑量(劑間比為1：3)進行預實驗。由于骨肽制劑在靜脈注射時有一定降壓作用，將起始劑量定為臨床劑量的1/5。具體給藥劑量及結果詳見表3。

表3 骨肽類制劑預實驗結果Tab.3 Pre-test result of osteopeptide preparations

參照《注射劑安全性檢查法應用指導原則》[7]，分析骨肽類制劑降壓物質檢查的預實驗結果，為實施正式實驗擬定骨肽類制劑各品種的降壓物質檢查限值。

注射液制劑中，骨肽注射液在大、中、小劑量下均無降壓反應，在正式實驗中擬采用劑量2.5 mg·kg-1。復方骨肽注射液樣品在劑量4.5 mg·kg-1時，有明顯降壓作用，正式實驗中擬采用劑量1.5 mg·kg-1即臨床劑量的3/5。骨肽氯化鈉注射液預實驗中均未產生降壓反應，則在正式實驗中擬采用1 mg·kg-1。骨瓜提取物注射液在劑量3 mg·kg-1下有明顯的降壓作用，并不符合規定，故正式實驗擬采用劑量1 mg·kg-1即臨床劑量的3/5。

注射用制劑中，注射用骨肽在大、中、小劑量下均無降壓反應，在正式實驗中采用劑量2.5 mg·kg-1。注射用復方骨肽在大、中、小劑量下均符合規定，大劑量時有明顯降壓作用，正式實驗擬采用與復方骨肽注射液的同等劑量1.5 mg·kg-1。注射用骨瓜提取物在中、大劑量時降壓幅度相近，在正式實驗中擬和骨瓜提取物注射液采用同等劑量1 mg·kg-1。注射用鹿瓜多肽大劑量有降壓作用，在正式實驗中擬采用劑量0.72 mg·kg-1。具體見表4。

表4 降壓物質檢查正式實驗給藥劑量Tab.4 Dosage in formal depressor substance test

2.4降壓物質檢查正式實驗 按各制劑初步擬定的限值，對22批骨肽類制劑進行降壓物質檢查，結果見表5。

表5 降壓物質檢查正式實驗結果Tab.5 Result of depressor substance test in formal experiment

2.5原液降壓物質研究 預實驗結果表明，B企業的復方骨肽注射液與D企業的骨瓜提取物注射液均在其大劑量下產生一定程度的降壓作用?？紤]到骨肽類制劑的制備工藝，一種制劑的處方中采用一種或多種原液進行制備，為探究制劑產生的降壓作用與其原液的相關性，因此選擇了上述兩家企業的骨肽類原液進行降壓物質檢查，以判斷制劑的降壓物質主要源于哪一種原液。

根據B企業和D企業提供的處方比例分別進行計算，選擇制劑同等劑量(大劑量)下對應的原液組分含量進行降壓物質檢查，結果見表6。

表6 骨肽類原液降壓物質檢查結果Tab.6 Result of depressor substance test in original solution of osteopeptide preparations

B企業的復方骨肽注射液，在預實驗大劑量下有降壓作用(ds/2

D企業的骨瓜提取液、豬四肢骨提取液、甜瓜子提取液在同等劑量下均有降壓作用，與制劑一致，幾種原液所致的降壓作用可能影響制劑質量。

2.6骨肽類制劑降壓物質檢查限值擬定 課題組擬定的降壓物質限度表見表7。由于骨肽類制劑在藥效中無降壓作用[8]，因此本實驗在臨床劑量的1/5～5倍范圍內擬取貓最大無降壓反應劑量為限值[7]，通過比較不同劑量的供試品與組胺對照品(0.10 μg·kg-1)所引起麻醉貓血壓下降的程度，判定骨肽類制劑在擬定的限值下是否符合規定，結果表明在擬定限值下，22批骨肽類制劑均符合規定。

表7 骨肽類制劑降壓物質限值Tab.7 Depressor substance limits of osteopeptide preparations

3 討論

多組分生化藥因來源復雜、組分不明確等問題備受關注[9]。骨肽類制劑是以動物骨為原料，經提取制成的傳統生化藥。研究表明[10]，生化制藥用原材料具有被污染的可能性。組胺、類組胺等小分子物質可能混入提取或制備工藝中，引起不良反應影響臨床療效。因此，對骨肽類制劑及原液的降壓物質研究以提高其質量標準具有必要性。

由降壓物質檢查結果可見，骨肽類制劑在預實驗中，復方骨肽注射液、注射用復方骨肽、注射用鹿瓜多肽在大劑量下均有降壓作用；骨瓜提取物注射液則在中劑量時就出現了降壓作用；中劑量與大劑量的注射用骨瓜提取物均有降壓作用，根據上述預實驗結果及降壓物質檢查的限值規定[8]，課題組為正式實驗預設了限值。根據擬定限值，正式實驗結果表明22批骨肽類制劑均符合規定，方法可行。也發現個別批次的樣品使用不同貓時降壓反應不同，考慮可能是由于貓的質量控制存在問題所致，不同性別、年齡、生理條件、不同環境對實驗的影響因素較大，造成不同的貓對降壓的敏感性不同。

在研究同企業原液與制劑所引起降壓作用的相關性時，發現B企業的產品批間差異較大，在與制劑引起降壓作用的同等劑量下，骨肽類原液并未引起降壓作用，用原液實驗時則存在不同程度的降壓作用；而D企業的骨肽類原液在其制劑引起降壓作用的同等劑量下即產生降壓作用，認為骨肽類制劑的降壓作用可能與其原液自身所引起的降壓作用相關，因此骨肽類原液的降壓物質檢查也應受到重視。

現行的質量標準中，大部分臨床常用的骨肽類制劑如骨肽注射液等并未設置降壓物質檢查項?？紤]到骨肽類制劑的不良反應報道中降壓反應、變態反應等皆與組胺、類組胺等物質相關，提高骨肽類制劑與原液的質量標準，增加降壓物質檢查項，控制組胺及類組胺等物質在制劑與原液中的含量，對保障患者用藥安全具有重大意義。