高效液相色譜法同時測定復方酚咖偽麻膠囊中5種成分溶出度

陳 嵐，魏長勇，李 根，高 羽，李 莉，江永賢

（1.電子科技大學醫學院附屬婦女兒童醫院·四川省成都市婦女兒童中心醫院，四川 成都 611731；2.四川省樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川 樂山 614000）

復方酚咖偽麻膠囊為抗感冒藥［1-2］，處方含鹽酸偽麻黃堿、對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏和鹽酸氯哌丁。文獻［2-3］和現行標準［4］均采用紫外分光光度法測定復方酚咖偽麻膠囊中對乙酰氨基酚的溶出度，對其他有效成分的溶出度無相關研究，藥物有效成分不足將影響治療效果［5］，若不控制其溶出度，將很難保證藥品的安全性和有效性。本研究中采用籃法，轉速為100 r/min，溶出介質為0.1 mol/L鹽酸溶液500 mL，并以高效液相色譜（HPLC）法同時測定5種成分的溶出度，擬為復方酚咖偽麻膠囊的質量控制提供依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PerkinElmer A-10型高效液相色譜儀（美國珀金埃爾默有限公司）；RCZ-8M型溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）；Mettler-Toledo XS205型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司，精度為0.01 mg）。

1.2 試藥

鹽酸偽麻黃堿對照品（批號為171237-201208，含量為99.9%），對乙酰氨基酚對照品（批號為100018-201409，含量為99.9%），咖啡因對照品（批號為171215-201010，含量為100.0%），馬來酸氯苯那敏對照品（批號為100047-200606，含量為99.7%），鹽酸氯哌丁對照品（批號為100529-201001，含量為100.0%），均購自中國食品藥品檢定研究院；復方酚咖偽麻膠囊（四川楊天生物藥業股份有限公司，批號分別為150109，151023，151229）；甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、三乙胺均為分析純，試驗用水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Waters XTerra C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：A為0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（100∶0.02，V/V），B為甲醇，梯度洗脫（0～5 min時85%A，5～15 min時85%A→25%A，15～24 min時25%A，24～25 min時25%A→85%A，25～30 min時85%A）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：215 nm；進樣量：20μL。理論板數按各組分峰計均大于5 000，分離度均大于2.0。在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

2.2 溶液制備

供試品溶液：取樣品6粒，按2015年版《中國藥典（四部）》通則0931溶出度與釋放度測定法第一法，轉速為100 r/min，分別于10，20，30，40，50，60 min時取溶出液5 mL，每次取樣后補充37℃0.1 mol/L鹽酸溶液5 mL，過濾，取續濾液，即得。

對照品溶液：取鹽酸偽麻黃堿對照品15.37 mg、對乙酰氨基酚對照品151.71 mg、咖啡因對照品13.20 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶A中，用適量0.1 mol/L鹽酸溶液溶解；取馬來酸氯苯那敏對照品13.06 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置容量瓶A中；取鹽酸氯哌丁對照品12.34 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置容量瓶A中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。精密量取對照品貯備液2 mL，置10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

混合對照品貯備液：取鹽酸偽麻黃堿對照品75.09mg、對乙酰氨基酚對照品764.40 mg、咖啡因對照品62.59 mg、鹽酸氯哌丁對照品30.37 mg，精密稱定，置同一25 mL容量瓶中，用適量0.1 mol/L鹽酸溶液溶解；取馬來酸氯苯那敏對照品12.92 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置上述25 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取2.2項下對照品貯備液1，2，4，6，8，10 mL，分別置25 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取各溶液20μL，分別注入液相色譜儀測定，記錄色譜圖。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得各被測成分的回歸方程及線性范圍。詳見表1。

表1 5種成分線性關系考察結果（n=5）Tab.1 Results of linear relation test of five components（n=5）

精密度試驗：精密量取對照品溶液20μL，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄色譜圖。結果鹽酸偽麻黃堿、對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏和鹽酸氯哌丁峰面積的RSD分別為0.21%，0.54%，0.34%，0.65%，0.76%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一批（批號為151229）樣品，依法制備供試品溶液，取溶出40 min時的供試品溶液，在室溫下放置，分別于0，2，4，6，12，24 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果鹽酸偽麻黃堿、對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏和鹽酸氯哌丁峰面積的RSD分別為0.72%，0.54%，1.16%，0.56%，0.53%（n=6），表明常溫下供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為150109，平均裝量為0.198 5 g，每粒含鹽酸偽麻黃堿14.46 mg、對乙酰氨基酚148.48 mg、咖啡因12.14 mg、馬來酸氯苯那敏1.19 mg、鹽酸氯哌丁5.64 mg）內容物，混勻，取0.1 g，精密稱定，共9份，分別置500 mL容量瓶中，分為3組，各3份；每組分別精密加入2.2項下混合對照品貯備液2.0，2.5，3.0 mL，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率［6-9］。結果見表2。

2.4 溶出曲線繪制

精密量取2.2項下供試品溶液和對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法、以峰面積計算各個時間點的平均累積溶出度。以溶出時間（t，min）為橫坐標、各組分在各個時間點的平均累積溶出度（Y，%）為縱坐標繪制溶出曲線。3個不同批次樣品測定結果見圖2。

圖2 3批樣品中5種成分溶出度曲線Fig.2 Dissolution profiles of five components in three batches of samples

2.5 溶出度測定

取40 min時溶出液適量，過濾，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖；另精密量取2.2項下對照品溶液，同法測定。按外標法、以峰面積計算溶出量，3批樣品的溶出度測定結果見表3。

表3 3批樣品中5種成分溶出度測定試驗結果（n=6）Tab.3 Results of dissolution test of five components in three batches of samples（n=6）

3 討論

3.1 溶出介質選擇

溶出介質直接影響藥物的溶出，對于不同藥物要根據其性質、檢測方法和檢測結果選擇合適的介質；一般以水、0.1 mol/L鹽酸溶液（人工胃液）和緩沖液（人工腸液）為溶出介質［10-11］，復方酚咖偽麻膠囊中5種成分在此3種溶出介質中均可溶解；考慮到復方酚咖偽麻膠囊為胃溶性制劑，0.1 mol/L鹽酸為國內外藥典中胃溶性制劑的常用溶出介質［12］，故選擇0.1 mol/L鹽酸溶液作為溶出介質?；@法使用的溶出介質體積一般為500～1 000 mL，試驗表明，當選用500 mL或1 000 mL溶出介質體積時各成分在溶出介質中的濃度遠低于其飽和濃度，但該制劑中馬來酸氯苯那敏含量較小，選用溶出介質體積為1 000 mL時將導致其濃度偏低，故溶出介質體積采用500 mL。

3.2 溶出度方法選擇

2015年版《中國藥典（四部）》通則中收載的溶出度與釋放度測定法有籃法、槳法、小杯法、槳碟法、轉筒法［13］。復方酚咖偽麻膠囊中馬來酸氯苯那敏的規格雖小，但對乙酰氨基酚規格較大，不宜采用小杯法；槳法和籃法均可用于膠囊劑，采用槳法溶出時樣品懸浮于溶出介質表面，應將膠囊劑裝入規定的沉降籃內，但膠囊存在少量堆積現象，影響藥物溶出，故采用籃法。

3.3 時間和限度確定

試驗表明，復方酚咖偽麻膠囊經過40 min時溶出基本趨于恒定，考察3批樣品的累積溶出度，在40 min時各成分的累積溶出度均在80%以上，故確定溶出時限為40 min，限度為標示量的80%。

3.4 色譜條件選擇

文獻［14-15］中對色譜條件的選擇已作詳細報道，方法學驗證結果表明，建立的HPLC法能同時測定復方酚咖偽麻膠囊中5種成分的溶出度，結果準確，方法可靠，且樣品溶出后不需稀釋，取樣濾過后可直接測定，簡化了操作過程。

3.5 馬來酸氯苯那敏有效成分選擇

馬來酸氯苯那敏在擬訂色譜條件下測得馬來酸和氯苯那敏2個峰，氯苯那敏是有效成分，故選擇氯苯那敏進行分析。