海珠喘息定片質量標準研究*

江 勛

（湖南省衡陽市市場監督檢驗檢測中心，湖南 衡陽 421001）

海珠喘息定片由珍珠層粉、胡頹子葉、天花粉、蟬蛻、防風、冰片、甘草、鹽酸氯丙那林、鹽酸去氯羥嗪制成，具有平喘、祛痰、鎮靜、止咳功效，常用于治療支氣管哮喘和慢性氣管炎［1］，對改善慢性喘息性支氣管炎平穩期患者的咳喘癥狀，提高其生活質量，減少住院次數效果良好［2］。現行標準收載于1993年版《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑（第九冊）》，與國家食品藥品監督管理局標準YBZ02382007內容一致，但僅有顯微鑒別1項及化學鑒別2項，專屬性低，無指標性功效成分的定性、定量鑒別，無法有效控制藥品的質量。目前，多針對方中化學藥成分鹽酸氯丙那林和鹽酸去氯羥嗪的定量研究，對中藥成分的研究很少［3］。中藥依靠其含有的多種成分協同發揮作用而體現藥效，僅以1種或2種成分很難評價中藥的真偽優劣。薄層色譜（TLC）技術用于中藥材和中成藥的質量控制具有快速、簡便、直觀等特點，可同時反映多種化學成分的信息，為常用檢測方法［4］。化學反應法用于定性鑒別，雖專屬性有限，但操作簡便，靈敏度高，分析速度快，樣品用量少，成本低。課題組前期已完成方中2種化藥成分及君藥胡頹子葉功效成分的定量測定和評價。本研究中采用化學反應法和TLC法對方中珍珠層粉、防風、冰片3味藥材開展定性鑒別，為海珠喘息定片的質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240S型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多集團公司，精度為十萬分之一）；DK-615HT型超聲波清洗儀（深圳市得康洗凈電器有限公司，功率為360 W，頻率為40 kHz）；ZF-20C型暗箱式自動紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）；DZKW-D-4型電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器有限公司）；GZXDH.500BS型電熱恒溫干燥箱（上海躍進醫療器械有限公司）；硅膠GF254薄層板（批號為HX02816915，規格為20 cm×20 cm），硅膠G薄層板（批號為HX69481826，規格為10 cm×20 cm），均購自德國Merck公司。

1.2 試藥

海珠喘息定片（沈陽紅藥集團股份有限公司，批號分別為190201，190501，180701；洛陽天生藥業有限責任公司，批號分別為190102，190402；廈門中藥廠有限公司，批號分別為190601，191017，191106；江西南昌桑海制藥有限責任公司，批號分別為190359，181106）；升麻素苷對照品（批號為111522-201913，純度為94.6%），5-О-甲基維斯阿米醇苷對照品（批號為111523-201811，純度為97.4%），右旋龍腦對照品（批號為111688-201602，純度為99.6%），冰片對照品（批號為110743-201706，純度為97.6%），均購自中國食品藥品檢定研究院；水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 化學反應鑒別珍珠層粉

取樣品粉末0.5 g，置錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，超聲提取15 min，濾過，取濾液3 mL，加甲基紅指示液2滴，用濃氨水中和，滴加鹽酸，使其呈酸性，加草酸銨試液即生成白色沉淀，分離，沉淀不溶于醋酸，可溶于鹽酸［5］。結果顯示，10批樣品均呈明顯正反應。同法制備缺珍珠層粉的陰性對照品溶液，加草酸銨試液后不產生沉淀，表明陰性對照無干擾。

2.2 TLC鑒別

防風：取樣品粉末2 g，置錐形瓶中，加乙醇25 mL，超聲提取30 min，濾過，取濾液，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，棄去乙酸乙酯液，再用水飽和的正丁醇液提取2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加乙醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液［6］。同法制備缺防風的陰性對照品溶液。取升麻素苷和5-О-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加乙醇，制成質量濃度為1 mg/mL的對照品溶液。采用2020年版《中國藥典（四部）》通則0502 TLC法試驗，精密吸取上述對照品溶液各2μL、供試品溶液各5μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇溶液（4∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（254 nm）下檢視［7］149-150，結果供試品溶液色譜中檢出升麻素苷和5-О-甲基維斯阿米醇苷，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同的藍色斑點（圖1 A）；置紫外光燈（365 nm）下檢視［8-9］，結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同的藍綠色熒光斑點，且陰性對照無干擾（圖1 B）。

冰片：取樣品粉末2 g，置錐形瓶中，加三氯甲烷25 mL，超聲提取20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，即得供試品溶液［10］。同法制備缺冰片的陰性對照品溶液。分別取右旋龍腦和冰片對照品適量，精密稱定，加三氯甲烷制成質量濃度為2 mg/mL的對照品溶液。照2020年版《中國藥典（四部）》通則0502 TLC法試驗，吸取上述對照品溶液和供試品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯溶液（17∶3，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視［7］61，90-91，152-153。結果供試品溶液色譜中檢出右旋龍腦和冰片，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同的玫瑰紅色斑點，且陰性對照無干擾。色譜圖見圖1 C。

圖1 薄層色譜圖Fig.1 TLC chromatograms

3 討論

海珠喘息定片中，珍珠層粉為由蚌科動物三角帆蚌Hyriopsis cumingii（Lea）、褶紋冠蚌Cristaria plicata（Leach）或珍珠貝科動物馬氏珍珠貝Pteria martensii（Dunker）的貝殼［11］內層部分加工而成的粉末，由蛋白質等有機成分及碳酸鈣、微量元素等無機成分組成，具有安神、鎮靜定痙、明目袪翳、收斂生肌、緩解支氣管痙攣［12-13］等功效，為君藥；防風為傘形科植物防風Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.未抽花莖植株的干燥根，味辛、微甘，性溫，歸肝、膀胱、脾經，具有祛風、解表、勝濕、止痙功效［7］，主治外感風寒、頭痛目眩、周身疼痛、骨節疼痛、風寒濕痹等證［14-15］，為臣藥；2020年版《中國藥典（一部）》中收載了冰片的3個品種，分別為天然冰片［樟科植物樟Cinnamomumcamphora（L.）Presl新鮮枝、葉經提取加工制成的結晶］、艾片［菊科植物艾納香Blumea balsamifera（L.）DC新鮮葉經提取加工制成的結晶］、合成冰片（合成龍腦），性微寒、涼，味辛、苦，歸心、脾、肺經，具有明心鎮靜、開竅醒神、清熱止痛、散郁火功效［7］，常以引藥上行，芳香走竄，能開啟閉阻心竅，用于治療喉痹、腦痛、鼻瘜、齒痛、傷寒舌出、小兒痘陷，具有抗炎、鎮痛、促透、保護循環系統等藥理學作用［16-18］，為佐藥。

珍珠層粉主要無機成分為碳酸鈣，參考2020年版《中國藥典（四部）》鈣鹽化學鑒別試驗建立定性鑒別方法。防風藥材含有揮發油［19］、色原酮類、香豆素類［20］、多糖類等成分［21］，參考2020年版《中國藥典（一部）》對防風鑒別方法進行TLC鑒別試驗。由于處方藥味多、成分復雜，導致干擾嚴重，結合文獻［6-9］，改進提取方法，增加萃取步驟，較好地除去各種雜質成分的干擾，特征性指標成分升麻素苷、5-О-甲基維斯阿米醇苷，所得TLC斑點分別在紫外光燈（254 nm和365 nm）下顯色清晰。冰片又稱龍腦，屬雙環單萜類仲醇，有正龍腦和異龍腦2個差向異構體，天然龍腦按旋光性的不同分為右旋龍腦和左旋龍腦，右旋龍腦的藥用價值更大［22-23］，臨床常用合成冰片，以樟腦、松節油等為原料經化學反應人工合成，除含有不低于55%的消旋龍腦外，還含有約35%的異龍腦及其他成分［24］。本研究中結合2020年版《中國藥典（一部）》中天然冰片（右旋龍腦）和艾片（左旋龍腦）及文獻［11］的方法進行TLC鑒別，其色譜圖清晰，分離效果良好。

本研究中建立的方法操作簡便，重復性好，分析速度快，可更全面地控制海珠喘息定片的質量。