低農殘高品質三七花總皂苷生產工藝研究

孫道磊，李紹才，陶 濤，張 輝，臧 皓

（1.云南白藥集團中藥資源有限公司，云南 昆明 650502；2.云南白藥集團股份有限公司，云南 昆明 650500；3.長春中醫藥大學，長春 130117；4.通化師范學院醫藥學院，吉林 通化 134002）

為解決中藥提取物中重金屬、農藥殘留超標的問題，本研究以三七花為原料，以人參皂苷Rb3、115項農藥殘留、四項重金屬為檢測指標，通過前期小試正交實驗篩選出的最佳工藝條件進行三批中試放大，探索一條制備低農殘高品質三七花總皂苷的生產工藝，為市場上開發利用三七花提供參考和依據的同時，尋求探索有效脫除提取物中農殘、重金屬的方法，填補該方向應用型研究空白。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

旋轉蒸發儀（德國IKA RV8）；分析天平（十萬分之一）；真空干燥箱；高效液相色譜儀（Agilent-1260）；水浴鍋。

1.2 藥品與試劑

三七花（云南白藥集團中藥資源有限公司），人參皂苷Rb3（中國食品藥品檢定研究院），D101大孔吸附樹脂（艾美科?。ㄖ袊┥镝t藥有限公司），LK30脫色樹脂（艾美科健（中國）生物醫藥有限公司），乙腈（色譜純），甲醇（分析純），純化水，乙醇（工業級），飲用水，鹽酸（工業級），氫氧化鈉（工業級），針狀活性炭（工業級），115項農藥殘標準品（混標，分析純，Merck-Millipore）。

2 方法與結果

2.1 主要成分測定方法[1]

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫；檢測波長203 nm；流速為1 mL·min-1；進樣量為 20 μL。

表1 梯度洗脫條件

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品25 mg，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 標準溶液的制備 精密稱取對照品人參皂苷Rb3適量，加入甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rb31 mg的溶液，為人參皂苷Rb3對照品溶液。將對照品溶液用甲醇稀釋成濃度分別為1 mg·mL-1、0.5 mg·mL-1、0.1 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1、0.005 mg·mL-1的對照品溶液，用于液相檢測。以樣品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。

2.2 三七花總皂苷分離純化

2.2.1 樹脂預處理 將新購入的D101大孔吸附樹脂、LK30脫色樹脂各用樹脂4倍量的丙酮回流2 h，濾出樹脂，溶液回收丙酮。D101大孔吸附樹脂和LK30脫色樹脂均先用4%的鹽酸水溶液浸泡6 h，水洗至中性后，再用4%的氫氧化鈉水溶液浸泡6 h，水洗至中性備用。

2.2.2 三七花總皂苷的分離純化

2.2.2.1 三七花的提取 將50 kg三七花投入提取罐中，用飲用水煮提2次，加入的水倍量分別為藥材量的5倍、4倍，煮提時間分別為2 h、1.5 h，合并提取液備用。

2.2.2.2 三七花總皂苷的分離純化 將100 kg吸附樹脂、150 kg脫色樹脂分別裝入樹脂柱中，三七花水提液通過吸附樹脂進行吸附，控制流速以270～300 mL·min-1進行吸附，吸附完畢后用5倍柱體積飲用水沖洗樹脂柱至洗柱液澄清，開始用15倍柱體積的80%乙醇洗脫，洗脫液過LK30樹脂進行脫色，收集脫色液，減壓濃縮至藥材量2倍體積，放出藥液，加入藥材重量0.5%的活性炭，加熱煮沸30 min，鈦棒抽濾，濾液減壓濃縮至浸膏比重1.10～1.15，放出浸膏，利用浸膏重量3倍量丙酮對三七花總皂苷進行結晶，靜置6 h，濾出沉淀，沉淀用適量丙酮洗滌后減壓干燥粉碎得白色粉末狀三七花總皂苷。三批中試數據見表2和表3，總皂苷除農殘前后對比圖見圖1、圖2和圖3。

圖1 三七花總皂苷除農殘前后農殘含量對比（批號：20201220）

圖2 三七花總皂苷除農殘前后農殘含量對比（批號：20201221）

圖3 三七花總皂苷除農殘前后農殘含量對比（批號：20201222）

表2 人參皂苷Rb3及重金屬含量

表3 三七花總皂苷除農殘前后農殘含量 mg·kg-1

3 討論

2016年5月云南省衛生計生委正式批復同意將三七花作為普通地方特色食品原料進行管理[2]，同年10月云南省政府發布了《云南省三七產業“十三五”發展規劃》[3]以促進三七產業持續、快速、健康發展。研究[4-5]表明，三七花總皂苷具有清除活性氧化自由基、抗脂質過氧化和促進皮膚創傷修復作用。因此，國內一些企業開始以三七花總皂苷為原料研制護膚類日化產品，但這些產品對原料農殘重金屬等有害元素限量要求極高，而三七在生長過程中，花已富集了農戶噴灑的農藥和土壤中的重金屬，直接使用則會將這些有害元素帶入到產品中進入人體危害健康。本研究利用吸附樹脂選擇吸附皂苷而對重金屬無吸附、農殘易溶于有機溶劑而皂苷難溶于丙酮的特性，將三七花提取后通過樹脂吸附、水洗、活性炭吸附除雜質、丙酮結晶處理，能有效脫除三七花帶來的農殘和重金屬，再以純化后的三七花總皂苷為原料做成的產品則更加綠色安全。