靈芝孢子油摻偽其他常見食用油的快速檢測方法研究

李常康 朱忠敏 吳長輝 李 曄 陳若蕓* 康 潔*

（1. 晶型藥物研究北京市重點實驗室，中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所，北京 100050；2. 福建仙芝樓生物科技有限公司，福建 福州 350002）

靈芝孢子油為靈芝科真菌赤芝（Ganoderma lucidum）的孢子粉經(jīng)破壁后以CO2超臨界萃取所得的油，其中主要含不飽和脂肪酸類、甾醇類化學成分[1,2]，具有抗腫瘤，提高免疫功能，保肝、護肝，抗氧化，抗衰老及治療神經(jīng)疾病等作用[3,4]。由于靈芝孢子油價格昂貴，且產(chǎn)品缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標準[5]，一些不法商家利用當前的檢測技術(shù)尚不易檢出的漏洞，在靈芝孢子油中摻入低價的食用油脂類物質(zhì)，欺騙消費者。此種行為不僅損害消費者的利益，而且干擾靈芝孢子油的開發(fā)應(yīng)用[4,6]及其產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

本文收集靈芝孢子油及市場上常見的玉米油、大豆油、菜籽油等8種食用油，采用4種不同的方法鑒別靈芝孢子油中是否摻入食用油，取得成功。

1 材料與方法

1.1 材料

靈芝孢子油由福建仙芝樓生物科技有限公司提供；芝麻油、花生油、玉米油、橄欖油、菜籽油、大豆油、棉籽油、菜籽油購于北京市場；花生酸對照品、棉酚對照品、芝麻酚對照品購于上海源葉生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

儀器采用超高效液相色譜儀Waters ACQUITY H-Class。試劑（分析純）糠醛、氫氧化鉀、乙醇、濃鹽酸，為北京通廣精細化工公司生產(chǎn)。

1.3 芝麻油的檢測方法

取不同比例、混合均勻的油樣和濃鹽酸各5 mL于比色管中，搖勻后加2%的糠醛-乙醇溶液0.1 mL，劇烈搖動30 s，靜置10 min，溶液分層后觀察其顏色，如溶液無色，則表示無芝麻油的存在[7]。

1.4 花生油的檢測方法

用移液槍吸取1 mL混入不同比例花生油的靈芝孢子油于錐形瓶中，加5 mL的KOH-EtOH溶液（8.0 g KOH溶于8.4 mL蒸餾水中，再加90%的乙醇稀釋至100 mL），接上回流冷凝管，在95 ℃水浴中皂化8 min。取下錐形瓶，待皂液冷卻至20 ℃，用移液槍加鹽酸0.8 mL和70%乙醇溶液50 mL，振蕩，加熱使其澄清為止。將錐形瓶置于冷水中冷卻，同時插入溫度計，輕輕搖晃，當溶液出現(xiàn)渾濁時，讀取此時的溫度[7]。

1.5 芝麻酚和棉酚的檢測方法

芝麻酚和棉酚采用超高效液相色譜法（UPLC），用供試品與標準品對比保留時間的方法進行測定。

UPLC色譜條件。色譜柱：C18柱，2.7 mm ×100 mm，3.0μm；流動相：乙腈-水梯度洗脫，0～10 min（20%乙腈-水），11～15 min（50%乙腈-水），16～30 min（80%乙腈-水），35～40 min（20%乙腈-水）；進樣量：5μL。芝麻酚標準品的UPLC保留時間為6.7 min，棉酚標準品的UPLC保留時間為18.9 min。

溶液的制備。稱取各種油的樣品100 mg，加入5 mL乙腈，劇烈振搖10 min后在2 000 r/min下離心20 min。取上清液0.5 mL，加入1%磷酸溶液0.5 mL，混勻后進樣分析。

1.6 花生酸和芥酸的檢測方法

花生酸和芥酸采用氣相色譜法（GC），用供試品與標準品對比保留時間的方法進行測定。

（1）GC色譜條件。色譜柱：HP-5MS（30 m×0.25 mm × 0.25μm）；進樣口溫度：250 ℃；FID檢測器溫度：330 ℃；流速：4 mL/min；分流比：10∶1；升溫程序：180 ℃保持2 min，以10 ℃/min升溫至300 ℃，保持5 min；進樣量：1μL。芥酸標準品GC的保留時間為7.8 min，花生酸標準品GC的保留時間為6.4 min。

（2）溶液的制備。稱取各種油的樣品100 mg，加入正己烷（3 mL），1%硫酸-甲醇溶液（2 mL），劇烈振搖10 min后，于40 ℃加熱10 min，取出后在4 000 r/min下離心10 min，取上清液進樣分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 芝麻油的區(qū)分

采用濃鹽酸、糠醛-乙醇顯色反應(yīng)檢測法，純芝麻油顯色最深，為血紅色，純靈芝孢子油則不顯色，為白色。靈芝孢子油中芝麻油含量在0.25%以上時，用此方法會顯現(xiàn)淡紅色，隨著芝麻油的比例增加，顯色愈加明顯（圖1）。

圖1 靈芝孢子油添加不同比例芝麻油的糠醛顯色實驗結(jié)果

2.2 花生油的區(qū)分

由于花生油中含有花生酸，在較高溫度下會產(chǎn)生渾濁現(xiàn)象，39.3 ℃下可見明顯渾濁；而靈芝孢子油產(chǎn)生渾濁的溫度較低，在20.6 ℃下才可見輕微渾濁。靈芝孢子油中混入少量的花生油，會提高產(chǎn)生渾濁的溫度。如產(chǎn)生渾濁的溫度高于23 ℃，可推測靈芝孢子油中摻有花生油（表1）。

表1 靈芝孢子油混入不同比例花生油的渾濁溫度

2.3 芝麻酚和棉酚及花生酸和芥酸的區(qū)分

芝麻酚和棉酚用UPLC測定結(jié)果（表2）：除芝麻油含有0.058%芝麻酚外，其他8種油品均不含芝麻酚；除花生油、靈芝孢子油、棉籽油含有小于定量限的棉酚外，其他5種油品均不含棉酚。

花生酸和芥酸用GC測定結(jié)果（表2）：除玉米油、葵花籽油、靈芝孢子油、棉籽油外，其他5種油品均含有花生酸；除菜籽油外，其他8種油品均不含芥酸。

表2 各供試油中芝麻酚、棉酚、花生酸、芥酸的UPLC和GC檢測結(jié)果

3 討 論

從以上檢測結(jié)果看，靈芝孢子油與玉米油、葵花籽油、棉籽油這3種常見食用油不太容易區(qū)分，從文獻[8，9]可知，靈芝孢子油在成分上與食用植物油不僅所含成分的種類有差別，而且相同成分在含量上也有很大差異。通過測定脂肪酸甘油酯可以區(qū)分。玉米油、葵花籽油、棉籽油的脂肪酸甘油酯主要由三亞油酸甘油酯（LLL）、二亞油酸油酸甘油酯（LLO）和二亞油酸棕櫚酸油酸甘油酯（PLL）組成，三者分別占總脂肪酸甘油酯的78%～89%，而靈芝孢子油這三種脂肪酸甘油酯只占12%。靈芝孢子油主要由亞油酸二油酸甘油酯（LOO）、三油酸甘油酯（OOO）和二油酸棕櫚酸甘油酯（OOP）組成，三者占總脂肪酸甘油酯的74.3%，而玉米油、葵花籽油、棉籽油的這3種脂肪酸甘油酯只占總脂肪酸甘油酯的2%～10%。

通過本試驗，我們建立了靈芝孢子油與其他8種食用油的4種鑒別方法，找到了區(qū)分純靈芝孢子油與其他8種食用油的特征，通過檢測可快速準確地辨識靈芝孢子油的純度，方法簡單、可靠，為靈芝孢子油快速鑒別提供依據(jù)，也可為其他食用油的快速鑒別研究提供參考。