吉首地區1 316例女性HPV分型及病毒載量結果分析

陳滔 張紹花

子宮頸癌是嚴重威脅婦女健康的惡性腫瘤。2020全球癌癥統計報告[1]顯示，2020年全球女性子宮頸癌新發病例604 127例，其中109 741例來自中國，子宮頸癌位于女性惡性腫瘤的第四位，發展中國家的發病率和死亡率遠高于發達國家。1976年，Harald zur Hausen發現了人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）與子宮頸癌的因果關系，高危型人乳頭瘤病毒持續感染是宮頸癌及癌前病變的致病因素[2]。為了優化診斷工具與篩查選擇，促進宮頸癌預防并挽救更多生命，發布了第二版《宮頸癌前病變篩查和治療指南》[3]，其強烈推薦將HPV-DNA檢測作為首選的篩查方式，取代了至今沿用的醋酸染色目視觀察（visual observation of acetic acid staining，VIA）或細胞學檢查。從敏感性和特異性方面考慮，具有更高的性價比。HPV具體型別的感染和感染持續時間是宮頸病變發生及發展的2個關鍵因素，而HPV病毒的載量及病毒清除與預后關系的研究存在爭議[4-6]。不同型別的HPV病毒載量與宮頸病變間的風險關系仍然需要大量細致的研究工作方得以探明。本研究采用對21種HPV病毒亞型進行分型并同時進行標準化定量檢測，文章的研究結果為吉首地區女性HPV的主要感染類型為單一型感染，最易感亞型并非HPV16、18型，隨著年齡的增長女性更易感HPV，需在防控工作中要引起重視。不同亞型感染與其病毒載量的關系有待進一步探究，為后期標準制訂了借鑒內容，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集整理2020年6月—2021年5月來吉首市人民醫院婦科門診接受同步HPV分型定量檢測的14～79歲女性共1 316例，平均年齡（39.91±3.18）歲。同時追蹤HPV檢測結果為陽性的病例的TCT及在陰道鏡下做多點活檢的病理檢查結果。本次研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 同步HPV分型定量檢測 本研究采用江蘇碩世生物科技股份有限公司生產的HPV分型及定量檢測試劑盒，利用多重實時熒光定量PCR檢測技術實現了同步HPV分型與定量的檢測。在短時間內準確地區分檢驗標本中21種HPV基因亞型（包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82、73及HPV 6、11和81亞型），并通過單拷貝基因（管家基因）與待測細胞之間的線性關系獲得單位細胞內HPV病毒亞型的載量——HPV基因拷貝數/每10萬細胞。細胞單拷貝基因數測算樣本中細胞數，獲得同等細胞數中HPV的病毒量，進而同步對這21種HPV亞型病毒載量進行定量檢測。

1.2.2 樣本的采集 采樣前，用棉拭子輕輕擦拭宮頸口過多的分泌物，將宮頸采樣刷伸入宮頸口鱗柱上皮交界處，順時針或逆時針旋轉3～5圈采集宮頸脫落細胞，將其放入標有患者編號的取樣管中，密閉送檢。樣本采集后及時檢測，2～8℃保存3 d內完成檢測，-20℃保存不超過12個月。樣本避免反復凍融，凍融次數不能超過5次，采用冰袋低溫運輸不能超過3 d。

1.2.3 儀器及試劑 使用的主要檢測設備為美國伯樂公司生產的CFX-96實時熒光定量聚合酶鏈式反應儀（polymerase chain reaction，PCR），檢測試劑為江蘇碩世生物科技股份有限公司生產的人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒（熒光PCR法），分析軟件為江蘇碩世生物科技股份有限公司自研的HPV核酸分型定量分析軟件V1.0進行分型定量分析。將檢出的HPV亞型對應的循環閾值（cycle threshold，CT值）及內參基因的CT值分別輸入分析軟件對應位置中，由軟件自動分析計算出單位細胞內對應型別HPV感染的標準病毒載量。設備及試劑嚴格按照各自操作說明書使用，讀取每次有效實驗的分型及定量拷貝數結果。

1.3 統計學方法

采用SPSS 10.0統計軟件進行數據分析，計數資料的表達方式為n（%），比較用χ2檢驗，計量資料的表達方式為（x-±s），比較用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

本研究共對1 316例標本進行21種HPV基因分型定量情況進行檢測。其中發現有HPV感染者254例，感染率為19.30%。其中單一型別HPV感染人數190例，感染率為14.44%，感染人次數占總感染者74.8%，為主要感染方式。含至少16型HPV感染人數26例，感染率1.98%；含至少18型HPV感染人數6例，感染率0.46%。感染人次數最多的亞型為HPV52型，感染人次76例，感染率5.78%，占總感染者比例29.92%。吉首地區女性HPV感染總體分布情況見表1。

表1 吉首地區女性HPV感染亞型分布情況

根據年齡的不同，將受檢的吉首地區女性分為低齡至老齡5個組別，分別與平均對照組進行比較，發現老齡組的HPV陽性率較平均對照組有顯著提高，差異有統計學意義（P＜0.05）。吉首地區女性不同年齡組別HPV感染分布情況見表2。

表2 吉首地區女性不同年齡組別HPV感染分布情況

本研究對1 316例標本進行21種HPV基因分型定量檢測。包含復合感染情況下，所有21種型別總感染頻率為342次。選取同期10次實驗室質控作為本次研究的質控對照組和感染頻率超過10次的HPV亞型作為亞型測試組（它們感染頻次由高至低依次為：HPV52、58、16、81、68、53、51、39、6。將各亞型依次分為亞型檢測組1、2、3、4、5、6、7、8、9）進行比較分析。發現各亞型檢測組的病毒載量均值較質控對照組差異無統計學意義（P＞0.05）。吉首地區女性不同HPV亞型感染病毒載量情況見表3。

表3 吉首地區女性不同HPV亞型感染病毒載量情況

3 討論

大量研究已經表明，高危型HPV的持續感染是宮頸癌發生的必要條件[7-9]。本研究發現吉首地區女性HPV感染主要為單一亞型感染，單一亞型的HPV感染使人們更容易對HPV的感染進行準確的處置，同時人們也需要對復合型HPV感染者引起足夠的重視，復合型HPV感染情況相對復雜，需要更多的研究對其進行探索。

本研究顯示吉首地區HPV感染人群中，HPV52、58型感染人數最多，成為最易感亞型，甚至超過16、18型感染人數，這在全國范圍均具有普遍性，因此52型的HPV感染值得人們更加深入關注。

宮頸癌的癌前病變與年齡密切相關，本研究顯示吉首地區女性受檢者中≥60歲的老齡組HPV檢測陽性率顯著高于平均水平，差異有統計學意義（P＜0.05）。這可能受限于當地群眾對于宮頸癌防治政策的認知程度，老年人更少接收到相關的政策信息，對于HPV檢測不了解，一般待有了臨床癥狀才去就診，進而導致受檢者陽性率較高[10]。另一方面，由于絕大多數HPV感染都是一過性的，機體能夠對大部分的HPV自動清除[11]，老年人的機體免疫能力降低，對HPV清除能力下降也是導致老年人HPV感染率增加的重要原因。這表明在宮頸癌防治方面，人們需要更加關注老年人群體，做好政策宣傳和定期篩查與回訪。

HPV分型定量檢測，其標本為受檢者的宮頸脫落細胞，由于取樣及送檢保存的耗材相同，采樣人員相對固定，且均經過標準的宮頸采樣培訓。因此固定人群使用固定耗材對HPV的定量檢測結果的影響可忽略[12]。對所有陽性標本進行分析，發現此次吉首地區女性HPV感染亞型最多的為52型和58型，占所有陽性比例為22.22%和10.53%。52、58型同樣有著較高的致癌風險，需及時有效篩查，可根據研究結果，按照不同亞型的易感程度進行進一步細化管理風險人群[13-14]。所有亞型的病毒載量值與試劑盒本身質控定量值相比或各亞型檢測組之間相比差異無統計學意義（P＞0.05）。表明不同HPV亞型的感染所產生的病毒載量高低無顯著差別。病毒載量的高低與不同HPV亞型感染及宮頸癌癌變的關系還有待更加深入研究。

高危型HPV的檢測已被學術界認可為子宮頸癌防治最有利武器。2014年WHO 宮頸癌綜合防治基本實踐指南（第二版）指出，普及利用HPV檢測篩查女性預防子宮頸癌，將大大節約醫療衛生系統的成本。同時近年來國際上有相關學者提出HPV的病毒載量是子宮頸癌發病的獨立致癌因素[15]，盡早準確地進行HPV分型檢測篩查，對宮頸癌的防治有著非常重要的意義[16-17]。雖然此次研究未發現不同亞型的感染與其載量間的直接差異關系，但隨著研究的進一步深入，HPV感染期的病毒載量仍將成為子宮頸癌防治的重點關注要素之一。

綜上所述，吉首地區女性HPV的感染以單一型感染為主，以HPV52型為最易感的亞型，且隨著年齡的增長女性感染HPV的風險升高，因此在防控工作中需引起重視，不同亞型感染與其病毒載量的關系有待進一步探究。