兩種全自動化學發光免疫分析儀在梅毒檢測中的價值

高欣 程靜

梅毒是一種常見的傳染病，一般通過母嬰傳播和性傳播，傳染性較強。在生活中，梅毒主要被稱為變態梅毒，梅毒是指人體內發生梅毒時，會出現早產、流產或死產等情況，即使正確分娩，嬰兒也有出現先天性梅毒的危險[1-2]，對孕婦和家庭生活都有影響。當患者發展成梅毒時，體內的梅毒螺旋周期會干擾中樞神經系統，導致患心血管疾病的風險提高，在嚴重情況下甚至會導致患者死亡和癡呆。梅毒是一種危害性很強的疾病，臨床上對梅毒的篩查和診斷迫在眉睫。梅毒特異性抗體的產生和消退要早于非特異性抗體，有的患者在整個生命過程中都會產生特異性的抗體，因而特異性抗體的檢測對于梅毒的診斷具有重要的意義，是一種很好的輔助診斷方法。因為不同的檢驗手段，其誤檢率和錯誤率也會存在差異[3-4]，本研究結合筆者多年的實際工作和現階段的臨床需要，運用多種方法對梅毒進行聯合檢驗，建立一套合理的檢驗流程，目的是對梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）進行檢測[5]，對比i2000全自動化學發光免疫微粒子分析儀的化學發光性能試驗（chemiluminescencemicroparticle immunoassays，CMIA）和CentaurXP全自動化學發光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA），降低臨床中出現漏診和誤診幾率。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取南京醫科大學友誼整形外科醫院2020年1月—2021年12月疑似梅毒患者90例，作為本次研究對象，對90例患者分別使用i2000自動化學發光免疫分析（CMIA）和Centaur XP自動化學發光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）對TPPA抗體進行血清學檢測。樣品吸光度與臨界值之比（S/CO）≥1.0為陽性，并將結果與梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）結果進行比較。其中患者男43例，女47例，平均年齡（58.21±11.29）歲，90例患者中有90份血清標本。納入標準：患者無其他性疾病；I2000型全自動分析儀對患者的首次陽性樣品進行分析；Centaur XP全自動化學發光免疫分析儀對患者的首次陽性樣品進行分析。排除標準：言語溝通障礙者；患有傳染性性疾病者。本研究經醫院醫學倫理員會批準。

1.2 方法

本次儀器除了要采用Architect I2000自動化學發光免疫分析儀與匹配的TPPA抗體診斷試劑盒。Centaur XP全自動化學發光免疫分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司）和TPPA抗體檢測試劑盒；TPPA梅毒抗體檢測試劑（日本富士日立株式會社）。對90例梅毒患者的血清標本分別進行CMIA、CLIA和TPPA并行梅毒血清學檢測。嚴格按照套件說明書和儀器工作說明書 [標準操作流程（standard operating procedure，SOP）]進行操作，并進行內部質量控制和積極的室內控制，操作方法按照《梅毒非特異性抗體檢測操作指南》[6]中的標準執行。

1.3 觀察指標

（1）結果評估標準：CMIA、CLIA儀器測試以S/CO值≥1.0為陽性，S/CO＜1.0為陰性；如果敏感顆粒的孔隙呈不規則的集合，說明TPPA檢測是陽性的。3種測試方法的結果應該嚴格記錄。

（2）為了計算TPPA的正確性，將CMIA與CLIA按不同的S/CO進行比較，結果以CMIA與CLIA的S/CO值為1.00～2.99，3.00～4.99，5.00～6.99，7.00～8.99，9.00～10.99，＞10.99為界定，以計算TPPA的陽性符合率。陽性符合率計算公式為：陽性符合率=[陽性例數/（陽性+陰性）例數]，比較兩種方法的靈敏度、特異度和準確度。靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%;特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%。準確度=(真陽性+真陰性)/總病例數×100%。分別用CMIA和CLIA的S/CO值繪制受試者的工作特性曲線（receiver operating characteristic curve，ROC），計算（ROC）曲線下面積（area under curve，AUC），確定兩種方法診斷梅毒的最佳截斷值。

1.4 統計學方法

研究數據運用SPSS 20.0軟件進行處理，計數資料以n（%）表示，行χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 比較患者TPPA、CMIA、CLIA的檢測結果

90例患者中，77例（85.56%）CMIA陽性；78例CLIA陽性，陽性率為86.67%；87例TPPA陽性率為96.67%。以TPPA作為確診方法，CMIA和TPPA的陽性率相比較后，差異有統計學意義（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的陽性率相比較后，差異有統計學意義（χ2=5.891，P＜0.05）。見表1。

表1 比較患者TPPA、CMIA、CLIA的檢測結果（%）

2.2 患者不同S/CO值分段CMIA和TPPA陽性符合率

當S/CO值為1.00～8.99時，CMIA和TPPA均有陰性的結果。當S/CO值為≥9.00時，所有CMIA組的TPPA均呈陽性，見表2。

表2 不同S/CO值分段CMIA和TPPA陽性符合率

2.3 90例患者不同S/CO值分段CLIA和TPPA陽性符合率

當S/CO值為1.00～4.99時，CLIA和TPPA均有陰性的結果。當S/CO值＞5.00時，所有CLIA組的TPPA均為陽性，見表3。

表3 不同S/CO值分段CLIA和TPPA陽性符合率

3 討論

梅毒是一種由梅毒螺旋引起的慢性疾病，近年來有向系統系疾病蔓延的趨勢，梅毒可以通過性傳播、母嬰傳播或者通過侵襲子宮黏膜危及孕婦健康。此外，通過輸血可能會引發一定程度細菌感染，對疾病的恢復極其不利。患有梅毒的孕婦通過胎盤將先天性梅毒傳播給胎兒。一般來說，在懷孕的前四個月，滋養層起到保護作用，使梅毒不易侵入，所以在妊娠的前4個月內不能感染胎兒[7-8]，但4個月后滋養層萎縮，導致梅毒螺旋體侵入后，感染胎兒，因此，快速準確的診斷非常重要。

早期梅毒的體液及細胞免疫反應對梅毒的清除有一定的影響，但后期的細胞免疫應答可能造成組織損害。患者螺旋中的表面蛋白抗原可分為不同類型的抗原，具有稱為特殊抗原的特定特征，致病性螺旋體也有非特異性的脂質抗原，當螺旋藻進入體內時，會產生許多抗體，這些抗體可能對梅毒螺旋體的各種成分具有特殊性質，細胞免疫和體液免疫在梅毒螺旋感染在不同時期發生作用[9-10]。兩種免疫的協同效應使人體免于再次感染，但與梅毒的臨床表現相關聯，血清學通過檢查血液中是否存在特殊試劑和抗體來檢測梅毒，信任度測試是一種檢測抗脂蛋白的非特異性測試，稱為初級篩選測試，CCIA和CLIA是對梅毒抗體的直接檢測[11-12]，因此可用于試驗。

人是TP存在的唯一載體。梅毒患者未接受任何治療，一年之內是最具傳染力的。因此，梅毒的血清學檢測在臨床上是非常有價值的。目前，臨床中主要采用血清學對梅毒進行診斷。TP抗原會在被TP病毒感染時，激活機體的免疫應答。導致身體產生梅毒相關抗體。化學發光法是近幾年在臨床上廣泛使用的一種簡便、自動化程度高、成批檢驗的新技術，已廣泛用于TP檢測。TPPA將TP菌株的菌體組成明膠微粒[13]，使其與血漿中TP特異性的結合，具有較高的敏感性和特異性。本研究采用CMIA法和CLIA法對所有患者進行檢測，然后使用TPPA方法驗證檢測結果，以評估血清學診斷技術的準確性。統計數據顯示，CMIA和CLIA在診斷方面具有高度的準確性。在本次研究過程中，為了體現CMIA和CLIA血清學檢測中的準確度，先將TPPA診斷作為“金標準”，再與CMLA核CLIA血清學進行比較。 90例患者中，77例（85.56%）CMIA陽性；78例CLIA陽性，陽性率為86.67%；87例TPPA陽性率為96.67%。以TPPA作為確診方法，CMIA和TPPA的陽性率相比較后，差異有統計學意義（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的陽性率相比較后，差異有統計學意義（χ2=5.891，P＜0.05）。當S/CO值為1.00～8.99時，CMIA和TPPA均有陰性的結果。當S/CO值為≥9.00時，所有CMIA組的TPPA均呈陽性。當S/CO值為1.00～4.99時，CLIA和TPPA均有陰性的結果。當S/CO值＞5.00時，所有CLIA組的TPPA均為陽性。有研究表示[14-15]，因為TPPA較為麻煩，而且不能實現自動化，所以會給工作人員帶來更大的壓力，而且在某種程度上延長了報告的周期。本研究結果表明，CMIA和CLIA都是理想的篩查方法。當儀器制造商提供的S/CO值為1.00作為臨界值時，CMIA和CLIA的陽性符合率分別為57.14%和66.67%。當S/CO值為10.00時，兩者的陽性符合率可達100%，當S/CO值＞10.00時，無需重新檢查[16-19]。

綜上所述，當梅毒的S/CO值＞10.00時，兩種自動免疫化學發光分析顯示出敏感性和特異性。當CMIA的S/CO值介于1.00至10.00之間，建議使用CLIA技術縮短樣品的持續時間，并添加TPPA系統，以確保CLIA的S/CO值小于4.70時結果的準確性。