2018—2021年山東省血液中心單采血小板和獻血者乙肝表面抗原ELISA復檢陽性情況分析

于媛 陳劍鋒 陳元鋒

血小板在生理性止血、維持血管壁完整性等過程中起著重要作用，單采血小板是臨床常用的血液成分之一。單采血小板具有純度高、受血者機體不易產生針對人類白細胞抗原、人類血小板抗原的抗體等優點[1]，在搶救患者生命中具有不可替代的作用，臨床需求量不斷增加。但由于單采血小板采集過程較全血復雜，需要一個相對固定獻血場所，獻血者采集時間更長，獻血過程中更易出現獻血反應。單采血小板獻血者需要對血液安全和無償獻血的意識相對較高，且其招募要求比全血獻血者更加嚴格等多種原因增加了獻血者的招募難度[2]，因此單采血小板供應常常不能滿足臨床需要。所以采供血機構非常關注血液質量，單采前的篩查工作尤顯重要，以期減少血液的報廢。現對山東省血液中心2018—2021年單采血小板和單采獻血者乙肝表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）復檢陽性情況進行回顧性分析，探討提高初篩單采獻血者HBsAg的檢出能力，對避免血小板復檢出現陽性報廢率以及降低血液資源浪費率的相關影響意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2018—2021年在山東省血液中心捐獻單采血小板的無償獻血者，需符合國家《中華人民共和國獻血法》[3]《獻血者健康檢查要求（GB 18467—2011）》[4]《血站技術操作規程》[5]等相關規定要求，并根據知情同意原則在唐山啟奧科技SHINOW 9.5系統中登記相關信息。

1.2 方法

獻血者采前需做健康征詢、一般檢查合格后進行血液初篩檢測，檢測項目包括血型、丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、血液細胞計數、HBsAg。檢測結果合格后即可進行單采。單采獻血者HBsAg初篩均采用英科新創乙肝膠體金試紙條法，按試劑說明書要求檢測標本。2018—2020年采用全血檢測，2021年采用全血離心后血漿檢測。

1.3 觀察指標

試紙條上檢測區和對照區各出現1條紅色印線為HBsAg快速檢測法陽性。ELISA復檢不合格定義如下：用2種不同廠家的試劑進行檢測，2種試劑均陽性判為陽性；1種試劑陽性再用2種試劑對原管進行雙孔檢測，至少1孔陽性亦判為陽性。對2種試劑均判為陰性的標本再進行核酸檢測，核酸實驗反應性標本判定為核酸反應陽性不合格。

1.4 統計學方法

用唐山啟奧科技SHINOW 9.5系統中統計功能模塊分析，SPSS 26.0（IBM公司）進行數據分析，計數資料表示為n（%），采用χ2檢驗。兩兩間的比較采用Bonferroni調整法進行調整，P＜0.008 3為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 單采獻血者情況

2018—2021年，山東省血液中心共采集單采血小板獻血者15 495人，因為有獻血者多次參加獻血，共采集51 129人次。ELISA復檢HBsAg陽性人次數33人次，約占總人次的0.6‰。ELISA復檢HBsAg陽性人數33人，約占總人數的2.1‰。各年情況見表1。2021年與2018、2019年、2020年相比及各年間比較復檢HBsAg（+）單采血小板獻血者人次比差異無統計學意義，獻血者人數比差異無統計學意義。

表1 2018—2021年山東省血液中心乙肝表面抗原ELISA復檢陽性單采血小板獻血者數據

表1 （續）

2.2 單采血小板情況

2018—2021年，山東省血液中心單采血小板共采集86 364份，ELISA復檢HBsAg陽性51份，約占采集總份數的0.6‰。各年份情況見表2。2021年與2018、2020年相比，復檢HBsAg（+）單采血小板比例顯著下降，差異有統計學意義。

表2 2018—2021年山東省血液中心乙肝表面抗原ELISA復檢陽性單采血小板數據

3 討論

在獻血過程當中，為保障獻血者機體健康以及避免在輸血過程當中出現傳染病等相關性問題。我國血站技術操作規程當中，對于上述問題有所明確。首先，供血機構應當對獻血者機體健康進行初篩及復檢，在初篩當中，內容應當包含血紅蛋白檢測，同時，血小板獻血者應當對獻血人員血小板計數以及紅細胞比容等相關數據進行綜合評判。此外，各地區應當根據自身條件以及疾病流行史，對血型、ALT等檢測項目有所增加。各采供血機構在對單采獻血者進行初篩檢測項目設計選擇時結合了自身的實際情況，比如新疆[6]、廣州[7]及鄭州[8]等地單采初篩檢測項目均包括血型、ALT、血液細胞計數、HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV，所有檢測結果合格后進行單采。東莞市[9]初篩項目包括ALT、血常規、HBsAg、抗-TP。唐山市[10]經血傳播疾病初篩項目包括ALT、HBsAg、抗-TP、抗-HIV。本中心多年來初篩檢測項目均是血型、ALT、血液細胞計數、HBsAg，與成都[11]、深圳[12-13]等地區相同。

通過分析我國流行病史可發現，在我國，乙型肝炎發病幾率較高，對我國民眾身心健康造成嚴重損害。引起患者出現乙型肝炎原因，與患者感染乙肝病毒有直接關聯。在我國基礎民眾當中，大約有10%人群均攜帶乙型肝炎病毒[14]。乙型肝炎具有較長的潛伏期，當前對于該疾病的診斷主要依賴于血清標志物檢測[15]，目前廣大供血機構對于獻血者在血液檢測復檢當中，必檢指標為HBsAg。由于乙型肝炎在發病初期時無顯著臨床癥狀，因此，在血液檢測過程當中，檢測乙肝病毒標志物具有顯著影響意義。同時，在進行檢測過程當中，應當選取具有較高的靈敏度及特異性手段[16-17]，最常用的檢測方法有酶聯免疫法ELISA法與膠體金法[14-18]。ELISA法與膠體金免疫層析法在乙肝表面抗原檢測方面，具有顯著應用意義，同時，還可發揮無放射性污染等相關性優點[14]。面對HBsAg使用膠體金試紙法檢測方法，可全面發揮檢測結果直觀快速、操作過程簡單以及無需特殊設備等多方面優點，因此，膠體金試紙檢測手段，在廣大采供血機構血液采集篩查方面，得到廣泛應用。ELISA通過采用抗原抗體結合的專一性，對免疫反應進行定量及定性檢測，上述手段不會對血液樣本中抗體及抗原免疫學特性有所改變。通過保留酶活性物質標記的抗體或抗原與吸附在載體上的已知抗原或抗體結合，并加入底物產生化學反應。可對抗體抗原是否出現特異性反應有所認知并對底物顏色深淺進行綜合評判，用來分析抗體水平。同時，該檢測手段在檢測當中，具有操作較為便捷、結果清晰易判讀、成本較低以及資料易儲存整理等相關性優點，因此，應用價值較為積極。此外，在檢測過程當中，由于加入酶物質，對反應效果有極大增強，使得ELISA發揮較高靈敏度及特異性等相關性優點[19]。在進行大批量血液標本檢測時，更加快捷及迅速。因此，目前各地區實驗室當中常廣泛應用HBsAg檢測方法[14]。但ELISA方法也存在操作方法較復雜等缺點[20]，所以廣泛應用于采供血機構HBsAg的血液檢測復檢中。

經統計，本中心2018—2021年單采獻血者HBsAg ELISA復檢陽性人數比例和人次比例均較低，陽性人數比例在0.9‰～2.4‰，陽性人次比例在0.3‰～0.9‰。2021年中心共采集了16 774人次單采血小板，復檢陽性人次降至最低5例。胡靜[21]統計了廣州惠州市2016年1月—2019年12月單采血小板獻血者7 865人，ELISA復查HBsAg陽性率為1.72%，中心低于相關數據。李仲平等[7]統計了廣州血液中心2014年1月—2018年3月單采血小板共157 692人次，復檢HBsAg雙試劑陽性人次數比例約2.1‰。2016—2020年重慶地區[22]單采血小板獻血者共采集68 755人次，復檢HBsAg陽性為133例，比例約為1.9‰。2021年中心ELISA復檢陽性人次比例0.3‰均低于相關報導。因為單項核酸HBV-DNA（+）的單采獻血者人次比例，中心2018—2021年在0～0.4‰之間，重慶地區統計約為0.45‰。2021年中心的比例約為0.2‰，與報導相比也處于較低水平。

2018—2021年中心單采血小板HBsAg ELISA復檢陽性報廢率在0.2‰～0.9‰，2021年比例降至最低約0.2‰，與2018年和2020年0.9‰相比均明顯降低，考慮與2021年改用離心后血漿檢測方法有關。2021年和2019年相比沒有顯著差異的原因考慮與2019年8名陽性獻血者捐獻雙份血小板比率較低有關。2018—2021年復檢HBsAg陽性的獻血者雙份捐獻率分別是66.7%、25.0%、72.7%、40%，可以看出2019年比例為4年內最低。

劉艷芳等[23]統計玉溪市中心血站2015—2017年共采集1 913份單采血小板，HBsAg復檢陽性報廢率約為0.5‰。王珺等[8]統計了鄭州市2013—2017年采集單采血小板，ELISA復檢HBsAg陽性率為1‰。可以看出中心2021年的陽性報廢比例約為0.2‰，與其他采供血機構相比處于較低水平。

膠體金法試劑靈敏度較ELISA低是引起HBsAg漏檢的主要原因之一[18，24]。賀生梅[25]將獻血者ELISA法和核酸檢測HBsAg陽性的樣本171例再次采用膠體金法復檢，檢出陽性47例。李昶[18]檢測HBsAg指標時，通過采取膠體金法及酶聯免疫法，對送檢4 500例血液樣本進行綜合評判，其中通過采用酶聯免疫法檢測后，檢出陽性標本305例，陽性率為6.78%；而使用膠體金法，樣本檢測后檢出陽性標本298例，陽性率為6.62%。而分析2種檢測方法，共同檢測時檢出陽性血液標本共295例。酶聯免疫法與膠體金法相對比檢出結果，陽性率有明顯增加。同時，存在3例樣本通過膠體金法檢測后，出現結果陽性，而酶聯免疫法檢出陰性。楊俊鴻等[26]對31例單采獻血者進行ELISA檢測HBsAg，當檢測結果為陽性時，再次使用膠體金法進行再次檢測發現，存在15例陽性及16例陰性問題。總的一致性為48.4%。ELISA陽性標本中S/CO值小于10，而面對漏檢標本，通過采取膠體金法進行檢測后發現，陰性結果是4例，陽性結果3例，一致性為9.7%；S/CO 值在10～30時用膠體金法檢測為陽性的標本總共有14例，陰性為2例，一致性為45.2%；S/CO值大于30的9例標本再次用膠體金法檢測全部檢出，一致性為100%。何衛社等[27]通過對319例陽性標本采取ELISA檢測HBsAg，發現6例S/CO值在29以上標本膠體金法復檢仍為陰性。而分析膠體金法漏檢因素包含少量標本存在HBV變異或亞型，以及試劑包被片段不同有直接關聯。此外，部分陽性標本由于水平過高，與抗原抗體結合最大比例不適宜，也會出現假陰性結果[28]。

乙肝膠體金試紙條法說明書要求檢測標本全血（指血或耳血）、血漿、血清均可選用。在實際工作中，全血加樣易出現混有氣泡、加樣量不足、全血過于粘稠輔助液添加不準確等情況。另外主要是工作人員因素[27]，如責任心不夠、培訓不到位、觀察時間不夠、試劑貯存不當、獻血者人數較多時未做標記等原因影響結果的正確判定導致漏檢。通過對多方面因素進行綜合評判后，血液檢驗中心應當在實際工作當中，采取適宜解決措施，以此對初篩HBsAg遺漏問題有所解決。（1）首先，應當對血液樣本檢驗操作人員進行綜合培訓，以此提升操作人員及技術能力，尤其面對新入職員工。（2）明確了使用離心后血漿檢測，不用輔助液。乙肝試紙條滲透速度及自身快慢，與檢測結果準確性有直接關聯[29]。當乙肝試紙條滲透速度太快或太慢時，均會引起檢測結果出現假陰性現象。從而保證加樣量穩定，規范工作人員的操作。（3）獻血者初篩檢測時制定好先做乙肝試紙條檢測再做轉氨酶檢測的步驟流程，這樣減少獻血者等待時間，優化采血流程，提高獻血者的獻血體驗和滿意度。（4）標記每一位獻血者的條碼，防止獻血者過多時出現誤判、漏判，保證結果的準確性。（5）試驗操作嚴格遵循說明書，規范加樣，記錄實驗開始和結束時間，保證試紙條判讀時間至少為10 min后。（6）做好試劑的質控把關。試劑貯存得當，防止受潮，開蓋時準確標識開啟時間及失效時間，開蓋后盡快使用。（7）保證篩查標本離心后無溶血、脂肪血等情況。（8）保證單采初篩實驗環境穩定。（9）制定量化考核目標，質管科加強考核監督，獎懲并進。

本中心采取了上述綜合措施，2021年ELISA復檢的HBsAg陽性單采血小板報廢率降至近年來最低約0.2‰。單采獻血者初篩時采用全血離心后血漿進行HBsAg的膠體金試紙條檢測方法降低了單采血小板的報廢，該方法適用于單采獻血者的初篩。血液質量和輸血安全是采供血機構的重心，今后中心將繼續積累數據，持續觀察，不斷摸索改進，減少寶貴的血小板資源浪費。