卡貝縮宮素注射液容器密封性方法學(xué)驗證

姚 振，盧志明，余濤濤，楊 靖

（杭州澳亞生物技術(shù)股份有限公司，浙江 杭州 310018）

卡貝縮宮素是一種合成的具有激動劑性質(zhì)的長效九肽類似物，通過與子宮平滑肌的催產(chǎn)素受體結(jié)合，促使子宮平滑肌收縮壓迫子宮肌層血管，從而達(dá)到止血目的，臨床用于子宮收縮乏力和產(chǎn)后出血［1?2］。無菌產(chǎn)品的容器密封系統(tǒng)須能防止微生物侵入，但目前國內(nèi)鮮有報道注射劑容器密封性的研究。2020年10月21日，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心發(fā)布了《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南（試行）》（簡稱《指南》），要求注射劑應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點開展包裝系統(tǒng)密封性研究，且其密封性測試方法應(yīng)經(jīng)過驗證［3］。由于無菌檢查不足以說明注射劑包裝系統(tǒng)密封的完整性，應(yīng)進(jìn)行容器密封性驗證，并需對方法的靈敏度加以考察。本研究中參考文獻(xiàn)［3?4］，采用色水法（亞甲基藍(lán)溶液法）對卡貝縮宮素注射液容器的密封性進(jìn)行方法學(xué)驗證。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XSE205DU型電子天平（梅特勒?托利多儀器<上海>有限公司，精度為0.01 mg）；MFY?05S型密封性測試儀（濟(jì)南三泉中石實驗儀器有限公司）；YB?2型澄明度檢測儀（天大天發(fā)科技有限公司）；UV?2600型紫外可見分光光度計（島津儀器<蘇州>有限公司）。

1.2 試藥

卡貝縮宮素注射液（杭州澳亞生物技術(shù)股份有限公司，批號為19060211，規(guī)格為每支1 mL∶100 μg）；亞甲基藍(lán)三水合物（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為20190625，生物染色劑級別）。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 目視觀察法比較溶液顏色

溶液制備：取亞甲基藍(lán)三水合物10 g，加100 mL水溶解，混勻，即得10%亞甲基藍(lán)溶液。取樣品10支，倒置，放入含有10%亞甲基藍(lán)溶液的容器中，置密封性測試儀中，抽真空至真空度為25 kPa，維持30 min，將真空裝置恢復(fù)至常壓，再放置30 min，取出，用水沖洗瓶外壁，即得供試品溶液。取亞甲基藍(lán)三水合物適量，精密稱定，用水溶解并稀釋成每1 mL中含有0.5μg的溶液，即得亞甲基藍(lán)對照溶液（相當(dāng)于每支樣品能檢測到0.005μL泄漏體積的10%亞甲基藍(lán)溶液）。

方法：取供試品溶液與亞甲基藍(lán)對照溶液，在澄明度檢測儀下觀察，供試品溶液顏色均不得比亞甲基藍(lán)對照溶液更深。

2.1.2 紫外?可見分光光度（UV?Vis）法測定吸光度

溶液制備：操作同2.1.1項下“取亞甲基藍(lán)三水合物10 g……用水沖洗瓶外壁”，開啟西林瓶，移取0.5 mL，置20 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得供試品溶液。取亞甲基藍(lán)三水合物20 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL的亞甲基藍(lán)貯備液。取樣品1支，加入亞甲基藍(lán)貯備液50μL，混勻，取0.5 mL，置20 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得陽性對照溶液（相當(dāng)于每支樣品能檢測到0.1μL泄漏體積的10%亞甲基藍(lán)溶液）。

方法：以水作為空白溶劑，取供試品溶液和陽性對照溶液各適量，照UV?Vis法［5］，于最大波長處測定吸光度，供試品溶液測定的吸光度值應(yīng)不大于陽性對照溶液的吸光度值。

2.2 方法學(xué)驗證

2.2.1 最大吸收波長選擇

取亞甲基藍(lán)三水合物50.45 mg，精密稱定，逐級稀釋，即得質(zhì)量濃度為0.005 mg/mL的亞甲基藍(lán)溶液。以水作為空白溶劑，將上述亞甲基藍(lán)溶液置400～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果見圖1。可見，亞甲基藍(lán)于663.8 nm波長處有明顯吸收峰，吸光度為0.940。故選擇664 nm作為測定波長。

圖1 亞甲基藍(lán)溶液UV-Vis法掃描圖譜（400～700 nm）Fig.1 UV-Vis spectrogram of methylene blue solution（400-700 nm）

2.2.2 線性關(guān)系考察

取亞甲基藍(lán)三水合物50.45 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的亞甲基藍(lán)貯備液。精密量取亞甲基藍(lán)貯備液5 mL，置100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL的線性母液。將線性母液用水稀釋為質(zhì)量濃度分別為0.126 1，0.252 3，0.504 5，0.630 6，1.261 0，2.523 0，5.045 0μg/mL的系列溶液，作為線性溶液。分別吸取線性溶液，以水作為空白對照，于664 nm波長處測定吸光度，以線性溶液的質(zhì)量濃度（X，mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程Y=0.189 3X?0.007（r=0.999 6，n=7），同時記錄各線性溶液的顏色。詳見表1?？梢?，亞甲基藍(lán)質(zhì)量濃度在0.126 1～5.045 0μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好；各線性溶液的顏色隨質(zhì)量濃度的增加由淺藍(lán)色變至深藍(lán)色，其中線性溶液1的顏色不易觀察（藍(lán)色極淺），故最終選擇線性溶液3作為對照溶液。

表1 亞甲基藍(lán)線性溶液吸光度與溶液顏色Tab.1 Absorbance of methylene blue linear solution and the solution color

2.2.3 檢測限確定

以線性溶液1的吸光度為指標(biāo)進(jìn)行考察，推測最低檢測限，配制相應(yīng)溶液并檢測。根據(jù)最終確定的最低檢測限，按公式［能被檢測到的最低泄漏量（μL）=（C檢測限×V稀釋倍數(shù)）/C亞甲藍(lán)×1 000］推算出能被檢測到的最低泄漏量。采用UV?Vis法，根據(jù)線性最低濃度，結(jié)合樣品配制方法，計算得到能被檢測到的最低泄漏量為相當(dāng)于每支樣品能檢測到0.05 μL泄漏體積的10%亞甲基藍(lán)溶液。采用目視觀察法確定能被檢測到的最低泄露量相當(dāng)于每支樣品能檢測到0.005μL泄漏體積的10%亞甲基藍(lán)溶液。

2.2.4 專屬性試驗

目視觀察法比較溶液顏色：以水作為稀釋劑（空白溶劑）。取亞甲基藍(lán)三水合物100.012 3 g，精密稱定，置1 000 mL容量瓶中，用水溶解并定容，混勻，即得10%亞甲基藍(lán)溶液。取樣品1支，移取0.5 mL，置20 mL容量瓶中，用水定容，搖勻，即得供試品溶液。取亞甲基藍(lán)三水合物20.1 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用水溶解并定容，搖勻，即得亞甲基藍(lán)貯備液a。精密量取亞甲基藍(lán)貯備液a 5 mL，置100 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得亞甲基藍(lán)貯備液b。精密量取亞甲基藍(lán)貯備液b 0.5 mL，置100 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得亞甲基藍(lán)對照溶液。取樣品1支，加入亞甲基藍(lán)貯備液b 50μL，混勻，即得加樣供試品溶液。分別吸取上述3種溶液，按2.1.1項下目視觀察法觀察顏色，結(jié)果供試品溶液無色，亞甲基藍(lán)對照溶液可見藍(lán)色，加樣供試品溶液顏色不淺于亞甲基藍(lán)對照溶液，表明方法專屬性良好。

UV?Vis法：取樣品1支，加入目視觀察法中亞甲基藍(lán)貯備液a 50 μL，混勻，移取0.5 mL，置20 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，搖勻，即得陽性對照溶液（相當(dāng)于每支樣品能檢測到0.1μL泄漏體積的10%亞甲基藍(lán)溶液）。分別吸取目視觀察法中供試品溶液、陽性對照溶液，以水作為空白溶劑，于664 nm波長處測定吸光度，結(jié)果供試品溶液吸光度為?0.001，無紫外吸收；陽性對照溶液吸光度為0.030，高于線性溶液最低質(zhì)量濃度的吸光度0.020。表明方法專屬性良好。

3 討論

紫外?可見分光光度計測定供試品溶液的吸光度時，供試品需稀釋40倍，而目視觀察法不經(jīng)稀釋，直接目視觀察，操作簡便，專屬性和靈敏度均符合檢測要求，故最終選用目視觀察法比較溶液顏色，以判斷亞甲基藍(lán)溶液是否泄漏到樣品瓶。

化學(xué)藥品注射劑密封性檢查方法分為確定性方法和概率性方法兩大類，確定性方法是基于系列可預(yù)見的泄漏現(xiàn)象［6］。常用方法包括高壓放電法、質(zhì)量提取法、壓力衰減法、真空衰減法［7?8］等；概率性方法包括微生物挑戰(zhàn)法、色水法、氣泡釋放法等，以及激光透射法［9］、近紅外光譜法［10］等。色水法要求供試品必須能承受浸沒，一般適用于液體制劑，常用的示蹤劑為10%亞甲基藍(lán)溶液，操作更簡單，成本更低廉，檢測周期更短［11］?？ㄘ惪s宮素注射液為小容量注射液，其密封組件包括西林瓶、膠塞、鋁蓋，能耐受一定負(fù)壓，適合采用色水法檢測其密封性。但為滿足環(huán)保需求，色水法測試所用染色溶液須經(jīng)適當(dāng)處理后再排放，為可靠地清除染色物的殘留，還須不斷優(yōu)化清潔方式［4］。容器密封系統(tǒng)和軋蓋參數(shù)會影響產(chǎn)品質(zhì)量和容器密封性［12］，企業(yè)應(yīng)根據(jù)注射劑自身特點和包裝特性，同時結(jié)合檢查方法的適用性和靈敏度，選擇適宜的密封性檢查方法［3］。