基于多元統計分析的酒制前后女貞子成分差異分析

李煥茹，馮志毅，趙 迪，胡雁萍，李 柯，馮素香

1河南中醫藥大學；2呼吸疾病中醫藥防治省部共建協同創新中心；3鄭州市中藥質量控制與評價重點實驗室，鄭州 450046

女貞子為木犀科植物女貞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果實，女貞子的炮制基本繼承了古代炮制方法，以凈制后生用、酒蒸和酒燉為主[1]。生女貞子在補肝腎的同時更傾向于清肝明目、滋陰潤燥，而酒制不僅緩解了女貞子的涼滑之性，還增強了女貞子補肝腎的作用。女貞子功效發生變化的根本原因可能是女貞子酒制過程中化學成分的變化。女貞子的質量控制和評價大多基于指紋圖譜[2-4]、集中于幾個已知的成分的變化[5-8]、對炮制品進行化學成分的鑒別[9]、采用成分鑒別結合多變量統計分析女貞子化學成分[10-12]。缺乏一種全面、快速的分析方法對女貞子酒制前后的化學成分進行系統分析。

基于質譜的分子網絡是一種新的可用于鑒別中藥的化學成分的方法。化學結構相似的化合物具有相似的質譜碎片，在GNPS中通過數據處理這些質譜碎片可以自動聚集成分子網絡，以快速識別化合物的不同類別。并且，通過設置組別，產地、藥用部位及炮制方法不同的中藥樣品間的化學成分特征可以在分子網絡的餅圖上可視化。因此，該技術可用于鑒別中藥不同炮制品的化學成分[13,14]。多元統計分析是一種廣泛應用于中藥差異化學成分識別的分析方法[15]。多元統計分析與分子網絡聯合應用來鑒別中藥化學成分，篩選差異性化學成分，可以得到更直觀和準確的結果。

本研究綜合了UPLC-Orbitrap-MS技術、分子網絡技術并結合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對女貞子酒制前后的化學成分進行分析，探究酒制對女貞子化學成分的影響，是鑒別生女貞子、酒女貞子中化學成分和篩選差異性化學成分的一種新的合理策略，為女貞子及其炮制品的物質基礎研究提供了參考。

1 材料

Vanquish高效液相色譜儀(Accucore C18(2.1 mm×100 mm，2.6 μm)色譜柱，Thermo Scientific)；Orbitrap Fusion超高分辨質譜儀(Thermo Scientific)；ME204E分析天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)；KQ-700DE超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司) ；Milli-QPOD超純水儀(德國Merck公司)。

羥基酪醇(批號MUST-15040805，純度≥98%)、紅景天苷(批號MUST-16041802，純度98.96%)、蕓香苷(批號MUST-16031712，純度98.87%)、木犀草苷(批號MUST-14060918，純度≥98%)、特女貞苷(批號MUST-16021904，純度98.01%)、橄欖苦苷(批號MUST-16052512，純度99.72%)、松果菊苷(批號MUST-17030701，純度98.88%)均購于成都曼思特生物科技有限公司。甲醇、乙腈(美國TEDIA公司)；甲酸為質譜純，購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；超純水(自制)。女貞子樣品經河南中醫藥大學陳隨清教授鑒定為木犀科植物女貞(LigustrumlucidumAit.)的干燥成熟果實(見表1)。

表1 女貞子樣品信息

2 方法

2.1 酒女貞子的制備

取女貞子飲片，按《中國藥典》2020年版通則0213燉法進行酒女貞子的炮制，按女貞子-黃酒5∶1比例混入黃酒中，拌勻，密閉悶潤4 h，在悶潤過程中，每隔0.5 h攪拌1次，置于蒸鍋中水蒸汽燉4 h，至女貞子呈黑褐色，取出，晾干備用，得到酒女貞子。

2.2 混合對照品溶液的制備

分別取羥基酪醇、紅景天苷、蕓香苷、木犀草苷、特女貞苷、橄欖苦苷、松果菊苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成一定質量濃度的混合對照品儲備液。置4 ℃冰箱保存備用。

2.3 供試品溶液的制備

取女貞子粉末約2 g，精密稱定，分別置于50 mL具塞錐形瓶中，加入80%的甲醇25 mL，稱定重量，超聲提取(功率：700 W，頻率：40 kHz)1 h，放冷，用80%的甲醇補足減失重量，搖勻，過濾，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

取黃酒2 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，離心，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 色譜、質譜條件

Accucore C18(2.1 mm×100 mm，2.6 μm)色譜柱；流動相為乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)；梯度洗脫(0～8 min，20%A→30%A；8～18 min，30%A→37%A；18～22 min，37%A→38%A；22～24 min，38%A→79%A；24～37 min，79%A→100%A；37～39 min，100%A→5%A；39～42 min，5%A→20%A)；流速0.2 mL/min，進樣量5 μL，柱溫25 ℃。

電噴霧離子化源(ESI)，正、負離子掃描；噴霧電壓+3.50、-2.50 kV，毛細管溫度300 ℃，載氣為氮氣，鞘氣壓力3.5 Mpa，輔助氣壓力1.0 Mpa，輔助器加熱溫度275 ℃，分辨率120 000，掃描范圍m/z150～1500。

2.5 數據處理與統計分析

Compound Discoverer 3.1、Cytoscape 3.8.0、GNPS(http://gnps.ucsd.edu)和SIMCA 14.1均用于數據分析。

GNPS參數如下：質量誤差小于0.2 Da，匹配峰大于6，余弦得分大于0.50。形成生女貞子及酒女貞子的分子網絡，下載可視化集群網絡圖，以便基于Cytoscape 3.8.0進行進一步分析。

采用Compound Discoverer 3.1軟件對LC/MS檢測數據進行提取和預處理，并在Excel 2019中對數據進行編輯，最后整理成二維數據矩陣形式，包含保留時間、分子量、峰強度等信息。將編輯后的數據矩陣導入SIMCA 14.1軟件進行多元統計分析。采用PCA分析初步觀察各樣品的聚集情況；隨后，采用OPLS-DA進一步對樣品進行分類，其中判別模型質量好壞的主要參數為R2Y(該值為模型的解釋率)及Q2值(該值為模型的預測率)，R2Y越接近1，表示模型越穩定，Q2>0.5表示預測率高。根據OPLS-DA模型得到的變量權重值(VIP>1)尋找潛在的化學標志物。

式中，NL為離子強度。

3 結果與分析

3.1 生女貞子及酒女貞子提取物的分子網絡

同一類的化合物更容易聚集在同一分子網絡中，因為化學結構相似的化合物也具有相似的二級質譜片段。因此，在本研究中，基于它們的質譜相似性，獲得了生女貞子和酒女貞子提取物的分子網絡，局部見圖1。分子網絡中共包含12 450個前體離子，包括1 323個簇(節點≥ 2)和5 448個單節點。更多詳細信息可以在公開網站GNPS上獲得(https://gnps.ucsd.edu/ProteoSAFe/result.jsp?task=404f44ed69a04c5cabd803b452f28c43&view=view_all_clusters_withID_beta)。另外，由于處理方法相同，分子網絡中每個餅點的面積可以代表女貞子酒制前后相對含量的變化。

從圖1可以明顯觀察到炮制前后女貞子的化學成分在種類和含量上發生了很大變化。通過生女貞子、酒女貞子在圓中的占比，餅圖中，紅色部分占比大于藍色部分，表明炮制后化學成分含量降低；反之，表明炮制后化學成分含量升高。圓全部為紅色，表明該成分為生女貞子中含有的成分，而酒女貞子中未檢測到該成分。圓全部為藍色，表明該成分為炮制后新增成分，生女貞子中未檢測到該成分。

圖1 生女貞子和酒女貞子的分子網絡Fig.1 Molecular network of RLLF and WLLF

3.2 總離子流色譜圖

生女貞子和酒女貞子的正、負離子模式下的總離子流圖見圖2。黃酒中未檢測出與女貞子中相同的化學成分。

圖2 總離子流圖Fig.2 Total ion chromatograms注：a、b為正離子模式；c、d為負離子模式；a、c為生女貞子；b、d為酒女貞子。Note:a and b represent the positive mode;c and d represent the negative mode;a and c represent raw Ligustri Lucidi Fructus (RLLF);c and d represent and wine-processed Ligustri Lucidi Fructus(WLLF).

3.2.1 環烯醚萜苷類

女貞子中的環烯醚萜苷類成分從結構上可以分為環烯醚萜類和裂環烯醚萜類兩種，該類化合物母核中具有半縮醛結構，較為活潑，易導致母核發生斷裂，形成一些特征離子碎片，從女貞子中共鑒定出10個環烯醚萜苷成分(見表2)。

表2 化合物的二級質譜信息及特征碎片離子

續表2(Continued Tab.2)

續表2(Continued Tab.2)

化合物1和2在正離子模式下準分子離子峰分別為m/z377.144 52[M+H]+、391.160 11[M+H]+，丟失一分子葡萄糖形成碎片m/z197.080 46、211.096 24，該碎片繼續丟失一分子水后形成的碎片m/z179.069 82、193.080 52。化合物2碎片m/z211.096 24丟失一分子甲氧基后形成碎片m/z179.069 95，該碎片繼續脫水后形成碎片m/z161.059 55，見圖3、4，該裂解特征與文獻[16]基本一致，推測化合物2為馬錢苷。化合物1比化合物2少一分子CH2，推測化合物1為馬錢苷酸，在女貞子中已有報道[10]。化合物3在正離子模式下的準分子離子峰為m/z229.107 11[M+H]+，丟失一分子甲氧基形成碎片m/z197.080 35，繼續丟失一分子CO形成碎片m/z169.085 74，再丟失一分子水形成碎片m/z151.075 12。此外，還檢測到母離子丟失兩分子水形成的碎片m/z193.080 52，初步推測化合物3為馬錢苷元。

圖3 馬錢苷主要碎片離子裂解途徑Fig.3 Ion cleavage pathway of main fragment of loganin

圖4 馬錢苷二級質譜圖Fig.4 Secondary mass spectrometry of loganin

化合物4～10為裂環環烯醚萜苷，除化合物5、6外，均檢測到m/z225的特征碎片離子。化合物4和10為一對同分異構體，化合物10通過與標準品的保留時間進行比較，鑒定為橄欖苦苷。已有報道女貞子中含有橄欖苦苷和10-羥基女貞苷[17]，化合物4初步推測為10-羥基女貞苷。化合物5比化合物10多一個羥基，初步推測為10-羥基橄欖苦苷，在女貞子中已有報道[20]。化合物6初步推測為橄欖苦苷酸，在女貞子中已有報道[9]。化合物7在正離子模式下的準分子離子峰為m/z525.197 14[M+H]+，初步推測為女貞苷，在女貞子中已有報道[19]。化合物8在正離子模式下準分子離子峰為m/z687.250 04[M+H]+，其二級碎片離子主要有酯苷鍵斷裂并丟失葡萄糖殘基形成的碎片m/z285.096 07[M+H-C4H8O4-C14H18O6]+及該碎片繼續丟失甲氧基和糖苷鍵斷裂形成的碎片m/z211.060 07，繼續丟失一分子水形成的碎片m/z193.049 06，還檢測到酯苷鍵斷裂與糖苷鍵斷裂并丟失紅景天苷片段及一分子葡萄糖形成的特征碎片離子m/z225.074 92、苯乙醇苷元特征離子碎片m/z137.059 43和糖裂解碎片m/z145.048 71等，該裂解特征與文獻[9]基本一致，通過與標準品保留時間進行對比，確定化合物8為特女貞苷。化合物9推測為oleonuezhenide，在女貞子中已經有報道[21]。

馬錢苷元為酒制后女貞子中新增成分，可能是由于炮制過程中，馬錢苷酸與馬錢苷丟失葡萄糖基轉化為馬錢苷元。一般認為特女貞苷酒制后含量降低，紅景天苷含量升高，并且認為這與酒制過程中特女貞苷轉化為紅景天苷有關。然而，本實驗中特女貞苷酒制后含量升高，推測是由于炮制過程中，oleonuezhenide及其異構體分解造成的。

3.2.2 苯乙醇類

女貞子中苯乙醇類成分通常與環烯醚萜類共同存在。在質譜條件下經過能量碰撞，容易丟失中性碎片(咖啡酰基)和分子中的端基糖，或苯乙醇苷元等，這些特征離子碎片的丟失為有效鑒別苯乙醇苷類化合物提供了重要的結構信息，從女貞子中共鑒定出6個苯乙醇類成分(見表2)。

化合物12在負離子模式下準分子離子峰為m/z299.113 78[M-H]-，二級質譜碎片離子主要有丟失葡萄糖殘基形成的碎片m/z137.060 04[M-H-C6H10O5]-、及糖裂解碎片m/z113.024 42，通過與標準品保留時間進行比對，確認化合物12為紅景天苷。化合物14在負離子模式下準分子離子峰為m/z153.055 37[M-H]-，二級質譜碎片離子主要有m/z123.045 06[M-H-CH2OH]-的碎片離子，通過與標準品保留時間進行比對，確認化合物14為羥基酪醇。

化合物11與化合物13為同分異構體，化合物13可以通過與標準品的保留時間進行比較，準確地鑒定為松果菊苷。化合物13在正離子模式下準分子離子峰為m/z787.264 85[M+H]+，二級質譜碎片離子主要有m/z325.091 28[M+H-C20H30O12]+、181.049 54[caffeic acid+H]+，咖啡酸部分脫水形成的碎片m/z163.038 97[caffeic acid-H2O]+，以及糖苷鍵斷裂形成的苯乙醇苷碎片m/z155.070 27、153.054 62、151.039 08等，見圖5、6。化合物15在正離子模式下準分子離子峰為m/z625.212 30[M+H]+，二級質譜信息與化合物13相似，主要有m/z325、181、163的特征碎片離子，與文獻[9]基本一致，推測化合物15為毛蕊花糖苷。化合物16在正離子模式下準分子離子峰為m/z479.154 93 [M+H]+，二級質譜主要有m/z181、163的特征碎片離子，與文獻[22]基本一致，推測化合物16為木通苯乙醇苷B。

圖5 松果菊苷主要碎片離子裂解途徑Fig.5 Ion cleavage pathway of main fragment of of echinacoside

酒制后，紅景天苷、羥基酪醇含量升高，推測是由于炮制過程中，含有紅景天苷片段及羥基酪醇片段的苯乙醇苷類及環烯醚萜苷類成分分解造成的。

圖6顯示，化合物13、15、16聚集在同一分子網絡中，這可能是由于它們具有相同的質譜碎片m/z325、163，該碎片為苯乙醇苷特征離子。化合物13圓中紅色占比明顯多于藍色，表明炮制后含量明顯減少，與變化指數0.43相對應。

圖6 松果菊苷所在分子網絡Fig.6 Molecular network of echinacoside

3.2.3 黃酮類

黃酮苷類化合物主要的裂解方式是糖苷鍵斷裂，產生糖基碎片及黃酮苷元；黃酮類化合物主要裂解方式是C環的RDA裂解，從而產生兩個碎片離子，在質譜條件下經能量碰撞會失去H2O、CO2、CO等一系列中性小分子。從女貞子中共鑒定出18個黃酮類成分(見表2)。女貞子中黃酮類化合物分子網絡見圖7。

圖7 黃酮類化合物分子網絡 Fig.7 Molecular network of flavonoids

化合物17在正離子模式下的準分子離子峰為m/z305.065 51[M+H]+，二級質譜碎片離子主要有丟失一分子水形成的碎片m/z287.054 35[M+H-H2O]+、繼續丟失CO形成的碎片m/z259.059 54[M+H-H2O-CO]+、231.064 65[M+H-H2O-2CO]+，推測化合物17為花旗松素，花旗松素在女貞子中已有報道。女貞子酒制后，花旗松素含量明顯降低。

化合物18在負離子模式下準分子離子峰為m/z609.146 33[M-H]-，二級質譜碎片離子主要有m/z301.035 40、300.027 86，該裂解特征與文獻[9]基本一致，通過與標準品的保留時間進行比較，推測化合物18為蕓香苷。化合物20、21為一對同分異構體，化合物20在負離子模式下的準分子離子峰m/z463.088 63[M-H]-，二級質譜檢測到m/z301.035 25、300.027 86的碎片離子，初步推測化合物20為金絲桃苷。化合物21在正離子模式下的準分子離子峰為m/z465.103 25[M+H]+， 并且檢測到m/z303的離子峰對應槲皮素，初步推測化合物21為異槲皮苷，在女貞子中已有報道可能含有金絲桃苷及其異構體[12]，尚需進一步采用對照品進行比對。化合物22在正離子模式下的準分子離子峰m/z303.049 80[M+H]+，推測為槲皮素，在女貞子中已有報道[9]。化合物23在正離子模式下的準分子離子峰為m/z449.107 93[M+H]+，檢測到m/z303的離子峰對應槲皮素，推測化合物23為槲皮苷，在女貞子中已有報道[9]。

化合物24在負離子模式下的準分子離子峰為m/z449.109 578[M-H]-，并且檢測到m/z287的離子峰對應圣草酚，推測化合物24為圣草酚-7-O-葡萄糖苷。化合物25在正離子模式下的準分子離子峰m/z289.070 69[M+H]+，二級質譜檢測到m/z153.017 99、135.044 14的離子峰，這是典型的RDA裂解的過程，推測化合物25為圣草酚，女貞子中已有報道[9]。化合物26在正離子模式下的準分子離子峰為m/z597.180 82[M+H]+，推測化合物26為圣草次苷。

化合物29在正離子模式下的準分子離子峰為m/z463.124 04[M+H]+，并且檢測到丟失葡萄糖基形成的m/z301.069 82的離子峰，推測化合物29為高車前苷。

化合物30在正、負離子模式下的準分子離子峰為m/z435.128 54[M+H]+、m/z433.114 49[M-H]-，正、負離子下分別檢測到m/z273、271的離子峰對應柚皮素，推測化合物30為柚皮素-7-O-葡萄糖苷。化合物31檢測到m/z273.075 90[M+H]+的準分子離子峰和m/z153.018 02、121.064 30的離子峰，這是典型的RDA裂解的過程，推測化合物31為柚皮素。

化合物33通過與標準品保留時間進行對比，鑒定為木犀草素。化合物19、32的二級質譜中檢測到m/z287的離子峰對應木犀草素，推測化合物19、32分別為木犀草素-7-O-蕓香糖苷、木犀草苷，女貞子中已有報道含有這三種化合物[20]。

化合物34在正離子模式下準分子離子峰為m/z271.060 21[M+H]+，在質譜能量碰撞下，化合物34發生了C環的RDA裂解得到特征離子碎片m/z153.017 91、145.02829、119.048 97，該裂解特征與文獻[9]基本一致，推測化合物34為芹菜素。化合物27、28的二級質譜中檢測到m/z271的離子峰對應芹菜素，推測化合物27、28分別為芹菜素-7-O-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷。女貞子已有報道含有這三種化合物[20]。

圖7顯示，化合物18、20、21、30、32聚集在同一分子網絡中，這可能是由于它們具有相同的質譜碎片m/z153或m/z151，該碎片為黃酮苷元發生RDA裂解形成的特征碎片離子。其中，化合物18、20兩者均含有m/z301、300的碎片離子，且兩者結構極為相似，化合物18僅比化合物20多一分子鼠李糖。化合物a、b為生女貞子中獨有成分，化合物a可能為槲皮素-3-O丙二酰葡萄糖苷，化合物b可能為槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷，與蕓香苷、金絲桃苷在具有相同的黃酮苷元。化合物c 可能為山奈酚-7-O-葡萄糖苷，經鑒定化合物c的保留時間處為木犀草苷，提示分子網絡存在一定的假陽性結果，應與質譜數據處理軟件相結合，綜合鑒別中藥含有的化合物。化合物18、30、32圓中紅色占比明顯多于藍色，表明炮制后含量明顯降低，與變化指數相對應。

3.2.4 三萜類

三萜類化合物在質譜條件下經過能量碰撞，當環內具有雙鍵時一般都有較特征的RDA裂解；如果無環內雙鍵，常從C環斷裂為兩個碎片，有時也會同時發生上述兩種裂解，女貞子中鑒定出8個三萜皂苷類成分(見表2)。

化合物37在正離子模式下一級質譜提供的準分子離子峰為m/z457.367 98[M+H]+，二級質譜碎片離子主要有丟失一分子水形成的碎片m/z439.356 84[M+H-H2O]+、丟失一分子COOH形成的碎片m/z411.362 30[M+H-COOH]+及再丟失一分子水形成的碎片m/z393.351 59[M+H-COOH-H2O]+，熊果酸中環內含有雙鍵，經過質譜能量的碰撞，發生較為特征的RDA裂解，C環發生斷裂，形成具有共軛雙烯或烯烴的特征離子碎片m/z257.168 88、217.194 31、163.147 83等，見圖8、9，推測化合物37為熊果酸。化合物36與化合物37為同分異構體，文獻報道齊墩果酸和熊果酸為女貞子中含有的兩個同分異構體，推測化合物36為齊墩果酸。化合物35和39初步鑒定為委陵菜酸和2α-羥基熊果酸，這兩種三萜皂苷在女貞子中已有報道[20]。

化合物38在正離子模式下準分子離子峰為m/z471.346 67[M+H]+，二級質譜碎片離子主要有丟失一分子水形成的碎片m/z453.336 46[M+H-H2O]+，丟失一分子COOH形成的碎片m/z425.340 58[M+H-COOH]+及再丟失一分子水形成的碎片m/z407.330 36[M+H-COOH-H2O]+，推測化合物38為18-β-甘草次酸。化合物40、41為一對同分異構體，初步鑒定為3β-O-反式-對香豆酰基山楂酸、3β-O-順式-對香豆酰基山楂酸，在女貞子中已有報道[20]。化合物42初步鑒定為白樺酯醇，在女貞子中已有報道[4]。

圖8 熊果酸主要碎片離子裂解途徑Fig.8 Ion cleavage pathway of main fragment of ursolic acid

圖9 熊果酸二級質譜圖Fig.9 Secondary mass spectrometry of ursolic acid

3.3 主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)

為進一步分析驗證分子網絡分析生女貞子及酒女貞子差異性化學成分的準確性，使用SIMCA 14.1軟件進行多元統計分析。采用的PCA多變量模式識別方法對生女貞子、酒女貞子進行降維分析，圖10為其PCA得分散點圖(R2X=0.982，Q2=0.763)。生女貞子、酒女貞子可以明顯分開，并各自聚為一類，說明女貞子酒制前后的化學成分存在差異。進一步采用OPLS-DA研究女貞子酒制前后的差異化學成分，其得分圖見圖11，結果發現生女貞子與酒女貞子可明顯分開，模型驗證結果(R2Y=0.999，Q2=0.968)表明，該模型有效可靠。采用常用的變量重要性投影(VIP)值對組間質量差異標志物進行篩選，共有22個特征峰的VIP值大于1，分別為特女貞苷、女貞苷、紅景天苷、毛蕊花糖苷、橄欖苦苷、蕓香苷、柚皮素-7-O-葡萄糖苷、2α-羥基熊果酸、圣草酚、柚皮素、羥基酪醇、木犀草苷、馬錢苷、馬錢苷酸、木通苯乙醇苷B、10-羥基女貞苷、oleonuezhenide、槲皮苷、芹菜素、圣草次苷、松果菊苷、槲皮素、10-羥基橄欖苦苷(見圖12)。

圖10 生女貞子、酒女貞子數據的PCA得分圖Fig.10 PCA score chart of RLLF and WLLF data

圖11 生女貞子、酒女貞子數據的OPLS-DA得分圖Fig.11 OPLS-DA score chart of RLLF and WLLF data

圖12 VIP值圖 Fig.12 VIP value diagram

4 討論與結論

本研究建立了一種基于UPLC-Orbitrap-MS技術、質譜分子網絡技術結合多元統計分析技術的綜合分析方法，用于鑒別生女貞子、酒女貞子的化學成分，尋找差異性化學成分，探究女貞子酒制前后物質基礎的改變。共鑒定出42種化學成分，包括環烯醚萜苷、苯乙醇苷、黃酮、三萜類化合物。經分子網絡結合多元統計分析發現生女貞子、酒女貞子樣品中化學成分存在明顯差異，篩選出的差異性成分有特女貞苷、女貞苷、紅景天苷、蕓香苷、橄欖苦苷等。

分子網絡技術與高分辨質譜定性分析相結合與傳統單一質譜定性方法相比，具有一定的優勢。傳統的定性分析只能與數據庫中已知的化合物的信息進行比對，給出可能的質譜信息，得到單一的化合物的信息，難以對未知化合物進行分析。分子網絡技術可以根據質譜信息，將具有相同碎片的可能的同一類型類化合物聚集到同一網絡中，并且根據分子網絡中的餅圖的占比可以直觀地顯示出中藥生品與炮制品之間的化學成分的差別。將分子網絡技術與多元統計分析技術相結合，可以準確篩選生制品之間的化學標記物。

本研究的結果為中藥女貞子生品和炮制品的質量評價和質量控制提供理論依據，并為明確女貞子酒制前后藥效發生變化的物質基礎提供參考。此外，本研究建立的研究女貞子化學成分的綜合分析方法，可為快速鑒別其他炮制品及中藥復方的化學成分的提供一種新的分析策略。