HCV-RNA和抗HCV在丙肝病毒感染檢測中的臨床應用

鐘志輝，鄧波，張岳漢，林牧

廣東省高州市人民醫院 檢驗科，廣東 高州 525200

0 引言

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是引起肝癌和肝硬化的重要致病原因，全球丙肝患者高達1.8億人，不同地區HCV發病率有顯著差異，發展中國家的感染率明顯高于發達國家，如埃及等地的發病率可高達15%～20%，北歐地區不超過1%[1]。我國相關流行病學數據顯示，HCV發病率與人群和地區差異性相關，不超過60歲的普通群體中流行率為0.43%，屬于低流行區域，但存在顯著的區域差異，東南地區的感染率較低[2]。研究顯示抗HCV陽性率在腎透析、靜脈給藥和HIV感染的患者中顯著升高，隨著近年來檢測技術的不斷發展，通過流行病學和細胞分子生物學等方面的調查和檢測對HCV的發現和預防產生重要的積極影響[3]。本研究以2019年6月-2020年11月在本院就診496例門診和住院患者為研究對象，分析HCV-RNA和抗HCV抗體在HCV感染檢測中的應用價值，為丙肝患者的臨床發現及HCV傳播的預防提供支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以在本院進行檢查的患者496例為研究對象，年齡18～59歲，平均（33.85±19.37）歲。納入標準：①確診HCV感染患者符合診斷標準[4]；②對研究內容知情同意且能夠配合完成。排除標準：①并發甲型或乙型感染病毒感染的患者；②肝硬化患者；③自身免疫性肝炎患者；④寄生蟲感染引發的肝病患者。所有入選對象均同意此項研究，醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

取患者靜脈血4mL，無菌環境下離心分離得血清，-20℃保存。使用丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（免疫熒光法，蘇州新波生物技術有限公司）檢測血清中抗-HCV抗體，操作嚴格按照說明書步驟進行；使用核酸（RNA）提取試劑盒（磁珠法）進行RNA提取，丙型肝炎病毒（HCV）核酸測定試劑盒（PCR熒光探針法，中山大學達安基因股份有限公司）對樣本中的HCV-RNA進行定量，操作嚴格按照試劑和儀器說明書步驟進行。

1.3 統計分析

使用SPSS 20.0軟件進行所有數據的統計分析。計數資料以頻數或百分率表示，進行卡方檢驗；計量資料以均數±標準差表示，進行student'st檢驗。P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCV-RNA和抗HCV對HCV感染患者的檢出情況

對496份樣品進行檢測，HCV-RNA結果顯示陽性73例，陰性423例，對HCV感染患者的檢測敏感性為88.75%，特異性為99.52%；抗HCV結果顯示陽性96例，陰性400例，對HCV感染患者的檢測敏感性為90.00%，特異性為94.23%；二者聯合檢測陽性122例，陰性374例，對HCV感染患者的檢測敏感性為97.50%，特異性為89.42%。HCVRNA和抗HCV聯合檢測的敏感性高于HCV-RNA檢測，特異性低于HCV-RNA檢測，差異均有統計學意義（P＜0.05）；抗HCV檢測的敏感性和HCV-RNA檢測的敏感性間的差異無統計學意義（P＞0.05）；抗HCV檢測的特異性低于HCV-RNA檢測，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 HCV-RNA 和抗HCV 對HCV 感染患者篩查的敏感度和特異度比較

2.2 HCV-RNA和抗HCV的檢測結果比較

80例HCV感染患者中，HCV-RNA和抗HCV檢出情況間的差異有統計學意義（χ2=7.469，P＜0.05），見表2。

表2 HCV-RNA 和抗HCV 的檢測結果比較

3 討論

HCV感染可引發慢性丙型感染，前期無明顯臨床表現，不易被察覺，多數患者發展為慢性感染，慢性HCV感染可進展為肝細胞癌或肝硬化，給患者和家庭帶來極大的經濟和生活負擔。HCV流行暴發的主要因素有不安全的血液制品、醫源性傳播和吸毒等，研究顯示，全球2015年HCV慢性感染患者約7100萬，每年新發感染者約175萬，死于感染或相關疾病的約40萬，世界衛生組織于2016年提出消除HCV危害行動以應對全球面臨的這一挑戰[5]。王耀等[6]研究顯示二級醫院等醫療機構的HCV-RNA陽性檢出率仍在較低水平，強化丙肝病毒感染檢測能力，提升報告數量和質量，能夠為相關衛生部門提供信息以制定合理有效的防治政策。

實驗室檢查結果是HCV感染的重要診斷依據，抗HCV和HCV-RNA檢測是為常規的檢測技術，根據國家對于丙肝篩查的相關規定，應為生化指標異常和易感者提供常規篩查服務，對抗HCV陽性患者提供HCV-RNA檢查。HCV抗體可通過時間分辨免疫熒光法（TRIFMA）、酶聯免疫吸附法（ELISA）、化學發光法和膠體金快速試驗法進行檢測，其中TRIFMA法特異度和靈敏度較好，操作便捷，被用作常規篩查，但是由于患者一般在HCV感染后數月內才可以產生抗HCV，且免疫抑制或透析患者體內抗HCV產生障礙，因此抗HCV檢測陰性并不能排除感染的可能[7]。HCV-RNA檢測陽性是病毒復制的直接指標，RNA檢測對實驗室環境和設備要求較高，受到操作人員技術影響，在基層醫療機構難以大范圍推廣普及。

本研究對在本院進行血液檢查的496例患者為研究對象，HCV-RNA陽性檢出率為14.72%（73/496），抗HCV陽性檢出率為19.35%，HCVRNA的檢測敏感性（88.75%）高于抗HCV檢測（90.00%），但差異無統計學意義（P＞0.05），HCV-RNA的檢測特異性顯著性高于抗HCV檢測，與之前的報道相一致。二者聯合檢測的陽性檢出率為24.60%，敏感性為97.50%，顯著高于單一方法檢測，特異性為89.42%，低于HCV-RNA檢測，有研究顯示患者HCV-RNA載量和抗HCV含量呈正相關的線性關系，說明抗體和病毒載量間的相對同步性變化，提示臨床上應對上述兩種指標進行雙重監測[8]。

在80例經臨床診斷確診為HCV感染的患者中，HCV-RNA和抗HCV雙陽性患者67例，兩種檢測間的差異有顯著性意義（P＜0.05），HCVRNA檢測的特異性更高，顯示出更好的診斷效能，提示核酸檢測技術推廣應用存在重要的臨床價值[9-10]。盡管PCR檢測技術已得到極大的自動化提升，但是對樣本保存的高要求，檢測的時間和經濟成本，假陽性或假陰性等因素限制其在初診篩查中的臨床應用[11-12]。除上述兩種指標，近年來HCV核心抗原檢測成為重要的實驗室補充診斷的指標，HCV核心抗原與HCV-RNA存在良好相關性，檢測窗口期相對于抗HCV顯著縮短，對于基層醫療機構不能進行HCV-RNA檢測時可考慮開展抗原檢測[13]。

綜上所述，對HCV病毒感染的有效篩查診斷是減少丙肝病毒流行的重要手段，HCV-RNA檢測相對于抗HCV檢測的特異性更高，二者聯合檢測的敏感性得到顯著提升，能夠更好檢測HCV感染情況，有利于丙肝流行的防治。