茶葉基質對膽堿酯酶活性干擾水平的研究進展

鄭芹芹 金莉莉 吳正浩 陳紅平 郝振霞 魯成銀

摘要：基于酶抑制法的農藥殘留快速檢測技術具有簡單、快速、易操作、成本低等優(yōu)點，在基質成分較為簡單的蔬菜、水果樣品的質量安全快速篩查和監(jiān)管中發(fā)揮了重要作用。然而，在對茶葉樣品的檢測中，該方法的速測結果普遍呈強（假）陽性，且檢測結果與實際農藥含量水平無關，嚴重阻礙了其在茶葉樣品檢測中的應用。明確茶葉樣品中基質對膽堿酯酶干擾的來源、水平與機理是解決這一難題的理論基礎。文章綜述了茶葉基質成分對膽堿酯酶活性干擾水平的研究進展，同時包含了近年來茶葉功能性成分通過抑制膽堿酯酶活性在阿爾茨海默癥（AD）治療中應用的研究內容。

關鍵詞：酶抑制法;茶葉;基質干擾;膽堿酯酶;農藥殘留;快速檢測

Research Progress on the Interference Level of

Tea Matrix on Cholinesterase Activity

ZHENG Qinqin1， JIN Lili2， WU Zhenghao1，3， CHEN Hongping1，4， HAO Zhenxia1，4*， LU Chengyin1，4*

1. Tea Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Hangzhou 310008， China;

2. Changzhou Industrial and Consumer Goods Inspection Co.， Ltd.， Changzhou 213000， China;

3. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100081; 4. Quality and Safety

Risk Assessment Laboratory of Tea Products， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Hangzhou 310008， China

Abstract： The rapid detection of pesticide residues based on enzyme inhibition assay presents the merits of simplicity， rapidity， easy-operation and low cost. It has played an important role in screening and supervision of the quality and safety of vegetable and fruit samples. However， when applied on tea sample detections， false positive results are easily obtained and the results have nothing to do with the actual pesticide residue level， which prevents the application in real samples. Identification of the source， level and mechanism of matrix interferences with cholinesterase in the tea samples is the theoretical basis for solving this problem. This article reviewed the research progress of tea matrix components on the interference of cholinesterase activity， as well as recent researches on the application of tea functional components in the treatment of Alzheimer's disease （AD） through inhibiting cholinesterase activity.

Keywords： enzyme inhibition assay， tea， matrix interference， cholinesterase， pesticide residues， rapid detection

茶葉被譽為“世界三大飲料”之一，具有較高的經濟和健康價值。近年來，茶葉中的農藥殘留問題引起越來越多的關注。對消費者而言，盡管茶葉例行監(jiān)測的平均合格率已達到98%[1]，但2%的不合格率依然是痛點問題;在企業(yè)層面，由于常規(guī)儀器檢測無法及時動態(tài)追蹤茶鮮葉的農藥殘留水平[2]，導致對生產原料的監(jiān)控困難，產品質量難以有效保證。農藥殘留快速檢測技術對于保障茶葉質量安全及茶產業(yè)健康發(fā)展有著重要意義。酶抑制法是目前為止發(fā)展最為成熟、應用最為廣泛的農殘速測技術，其利用有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶（以乙酰膽堿酯酶AChE和丁酰膽堿酯酶BChE為主）的抑制作用進行定性和定量檢測，當樣品中不含有這兩類農藥成分時，膽堿酯酶可以正常催化、水解底物生成一定量的產物，顯現出顏色信號[3]或電化學信號[4];而當待測樣品中含有農藥時，膽堿酯酶活性受到農藥的抑制而難以正常催化、水解底物，致使相應的檢測信號減弱甚至消失。酶抑制法通過直觀的信號變化即可判斷樣品中的農藥殘留水平，由此減少了常規(guī)農殘檢測方法中對儀器、場地和專業(yè)檢測人員的硬性需求，展現出了較強的靈活性和巨大的應用潛力，檢測時間和成本大幅降低[5]，該方法在蔬菜、水果等簡單基質樣品中已廣泛應用[6-8]。

隨著研究深入，酶抑制法也被嘗試應用于茶葉樣品的速測中。但茶葉中含有較多生物活性成分，如茶多酚、咖啡堿等[9]，具有抗氧化、抑菌抑酶等生理活性[10-12]，對酶反應干擾嚴重，檢測結果可靠性差[13-14]。因此，探究茶葉速測中基質干擾的具體來源及干擾機制是解決茶葉基質對酶抑制法速測產生干擾問題、實現可靠速測的研究基礎。本文綜述了不同茶葉基質成分對膽堿酶活性干擾的研究進展，以期為酶抑制法對茶葉樣品的抗干擾速測研究提供理論參考，進一步為酶抑制法速測在復雜基質樣品中的應用提供研究思路。

1? 茶葉樣品在酶抑制法農藥殘留速測中的基質干擾

茶葉樣品在基于酶抑制法的農殘速測中的假陽性現象近年來引起研究者的關注。趙超群[13]采用酶抑制法對比了茶鮮葉和成品茶的農殘速測檢測效果，結果顯示茶鮮葉和成品茶的檢測中均存在明顯假陽性，并且茶鮮葉中敵敵畏、敵百蟲的檢出限（分別為0.07 mg/kg、0.32 mg/kg）低于成品茶（分別為0.28 mg/kg、1.26 mg/kg）。金莉莉[14]探究了不同茶葉基質成分對酶檢測體系的具體影響，結果顯示咖啡堿和（-）-表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）對AChE活性呈現出明顯的抑制作用，從原理上證實了這兩種茶葉基質成分均會導致檢測結果呈現假陽性。

為了減少基質成分對酶反應體系的干擾，提高酶抑制法在茶葉中檢測的準確度，有研究者在將現有酶抑制法用于茶葉樣品中的農殘速測時，增加了溶劑置換、酸堿調節(jié)、脫色處理等較為繁復的樣品前處理步驟[15-18]。在《茶中有機磷及氨基甲酸酯農藥殘留量的簡易檢驗方法? 酶抑制法》（GB/T 18625—2002）速測標準中[15]，茶葉樣品也需經過有機溶劑提取、緩沖液復溶及提取液氧化、還原等步驟后才可以展開酶反應進行檢測。黃敏[16]設計開發(fā)的茶葉中農藥殘留酶抑制速測卡，采用酸度調節(jié)劑使茶葉提取液pH值調節(jié)至4～5范圍內，再用小柱層析后將收集到的濾液進行測試。針對茶葉色素的干擾，李彥杰[18]在基于單酯酶比色陣列系統(tǒng)檢測茶葉農藥殘留的研究中提出了要對茶葉進行脫色處理。額外的前處理操作，在改善茶葉樣品檢測基質干擾的同時，也大大增加了操作的復雜性和專業(yè)程度，提高了方法及產品的使用門檻，無形中背離了快速檢測的初衷。

目前，茶葉基質干擾是阻礙酶抑制法農殘速測技術有效應用于茶葉檢測的主要因素，探究茶葉中對酶反應干擾的具體基質成分及干擾原理對進一步解決酶抑制法農殘速測應用中茶葉基質的干擾問題，實現可靠速測具有重要指導意義。

2? 茶葉基質成分與膽堿酯酶的相互作用

膽堿酯酶主要分為AChE和BChE。其中AChE主要存在于動物的神經系統(tǒng)中，通過水解乙酰膽堿來終止神經遞質對突觸后膜的興奮作用，保證神經信號在生物體內的正常傳遞。有機磷（OP）和氨基甲酸酯（CM）類殺蟲劑通過抑制昆蟲體內的AChE活性造成神經毒性，實現殺蟲的目的。因而通過測定樣品對膽堿酯酶的活性抑制程度，可以快速篩查樣品中的農藥水平。AChE是目前市面上絕大多數酶抑制法農殘速測中所采用的生物酶，對其活性抑制水平的準確測定是該速測方法的關鍵。

目前關于茶葉基質對酶抑制法基質干擾的直接研究較少，文獻檢索發(fā)現，茶葉中所含的多種活性成分均可通過抑制AChE活性、降低神經遞質乙酰膽堿的分解來治療阿爾茲海默癥（AD），因而科學家們進行了大量關于茶葉中活性成分與膽堿酯酶相互作用的研究，這些研究結果在解決AD治療難題的同時，也為我們探究茶葉基質對酶抑制法檢測干擾的原因提供了可靠數據[19-20]。

2.1? 茶多酚對膽堿酯酶活性的影響

茶多酚是一類存在于茶樹中的多元酚混合物，占茶葉干物質質量的18%～36%，是茶葉中重要的生物活性成分[9]。茶葉中的多酚類物質包括兒茶素、黃酮和黃酮醇類、花色素類、酚酸及縮酚酸類等，前3類化合物均具有2-苯基苯并吡喃的基本結構，統(tǒng)稱為類黃酮化合物[21]。

茶多酚對膽堿酯酶表現出顯著的抑制作用，且抑制水平與茶多酚濃度呈正相關。Kim等[22]發(fā)現茶多酚對失憶小鼠大腦中AChE活性具有明顯的抑制作用，且茶多酚濃度越高，其對酶活性的抑制率也越大，酶活性被抑制一半時所需底物濃度（IC50）為248 μg/mL。Chung等[23]研究發(fā)現，茶多酚對人體神經母細胞瘤細胞中AChE的活性具有相似的抑制效果。

進一步研究中，研究者們運用Ellman方法篩選出對膽堿酯酶有抑制作用的具體多酚類化合物，同時進一步結合分子對接模擬實驗、酶動力學、熒光滴定法等手段，從茶多酚類物質與酶的結合能值（Ea）、米氏常數（Km）、親和力等角度研究茶多酚對膽堿酯酶的影響，證實了不同的多酚成分對膽堿酯酶的抑制作用。

2.1.1? 兒茶素對酶活性的影響

兒茶素類物質是茶多酚的主體成分，占茶多酚總量的70%～80%，是茶葉的主要功能性成分[9]。根據分子結構的不同，茶葉中的兒茶素類化合物可以分為多種類型。其中EGCG、（-）-表沒食子兒茶素（EGC）、（-）-表兒茶素-沒食子酸酯（ECG）和（-）-表兒茶素（EC）為含量最高的4種兒茶素，分別約占兒茶素總量的59%、19%、13.6%和6.4%[24]。

在典型兒茶素對膽堿酯酶抑制作用的研究中，酯型兒茶素（如EGCG、ECG等）對AChE的抑制作用高于非酯型兒茶素（如EGC、EC等），其中EGCG呈現出最明顯的抑制作用[25]。Meng等[26]基于Ellman方法篩查了13種茶葉成分對酶活性的影響，發(fā)現EGCG和ECG（來源于白毛茶）可明顯抑制AChE活性，相應IC50值分別為0.124 μmol/L和0.102 μmol/L。Ali等[27]利用AutoDock 4.2軟件進行了分子模擬實驗，認為4種兒茶素單體（EGCG、EGC、ECG、C）均可抑制AChE 和BChE的活性。其中，EGCG與AChE、BChE結合所需的能量值最低（分別為-60.49 kJ/mol和-55.67 kJ/mol），ECG與兩種酶的結合能值（分別為-59.77 kJ/mol和-50.15 kJ/mol）水平與EGCG相當，表明EGCG和ECG抑制兩種酶活性的能力相近。Srividhya等[28]將EGCG與AChE進行分子對接計算，發(fā)現兩者的結合自由能僅為28.17 kJ/mol，表明EGCG易與AChE結合，能夠明顯抑制AChE的活性。據Salazar等[29]報道，EGCG對人體紅細胞膜上AChE活性的抑制作用較強，其IC50值為18.5 μmol/L。同時，酶反應動力學數據顯示EGCG與AChE反應的Km值最低為3.707，與實驗所測的IC50水平相符合。

除上述幾種主要的兒茶素成分外，其他兒茶素成分對膽堿酯酶活性也具有一定的抑制作用。Mazumder等[30]通過計算模擬分子對接的方法研究了（+）-C、EC、EGC、EGCG 4種兒茶素分別與AChE、BChE的結合能力，并綜合MolDoc和氫鍵兩種效果評價，發(fā)現除EGCG表現為最強抑制效果外，其余3種兒茶素對AChE和BChE也有較強的抑制能力。Wang等[31]發(fā)現紫娟茶中3種羥基肉桂酰化的新型兒茶素（HCCs）對AChE具有較強的抑制作用，這3種新型兒茶素為表兒茶素3-O-咖啡酸酯（ECC）、表沒食子兒茶素3-O-P-對香豆酸酯和表沒食子兒茶素-3-O-阿魏酸酯，其抑制AChE的IC50值分別為2.49 μmol/L、11.41 μmol/L、62.26 μmol/L;分子模擬結果顯示，ECC具有最低的結合常數（Ki）和結合能（Ea），抑制能力在這3種兒茶素中最強。

綜合以上文獻報道，酶反應動力學測定數據和分子對接模擬計算結果均顯示，EGCG是兒茶素類物質中最強的膽堿酯酶抑制劑，其抑制酶活性的IC50值在0.124～18.5 μmol/L之間[26，29]（表1）;同時，EGCG也是茶葉中含量最高的兒茶素成分。所以，在酶抑制法測定茶葉中農藥殘留的研究和應用中，應首先考慮EGCG的干擾作用。此外，ECG（IC50=0.102 μmol/L）[26]對酶活性的影響也需納入研究中，其他兒茶素類由于在茶葉中含量較少，抑制酶的能力相對較弱，在酶抑制法干擾研究中可作為次要考察因素。

2.1.2? 黃酮及黃酮苷類對酶活性的影響

茶葉中的黃酮及黃酮苷類物質按化學結構可分為黃酮、黃酮醇和黃酮苷3類。黃酮在干茶中的含量約為0.7 mg/g，主要包括芹菜素和木犀草素[32];黃酮醇在干茶中的含量約為4 mg/g，主要有槲皮素（含量最高可達2.1 mg/g）、山奈素和楊梅素[32];黃酮苷類物質（由黃酮醇與糖結合形成）約占茶葉干重的0.8%[33]，主要有槲皮苷、山奈苷、蘆丁等，其中槲皮苷含量最高[9]。

研究發(fā)現，黃酮及其苷類物質對膽堿酯酶表現出不同程度的活性抑制作用，其中槲皮素是黃酮類物質中最有效的膽堿酯酶抑制劑。Orhan等[34]通過Ellman方法測定目標物對酶的抑制率數據，發(fā)現槲皮素在1 mg/mL質量濃度下對AChE和BChE的抑制率分別為76.2%和46.8%。與膽堿酯酶標準抑制劑加蘭他敏在相同濃度下對兩種酶的作用效果（抑制率分別為99.8%和80.3%）相比較，認為槲皮素是AChE的有效抑制劑。另外，該研究中用同樣的方法測定膽堿酯酶活性變化，發(fā)現茶葉中其他黃酮類物質對兩種酶均無抑制作用。Ademosun等[35]在體外研究中觀察到槲皮素和蘆丁對AChE、BChE活性均顯示出濃度相關的抑制作用。基于Ellman方法的改良分光光度法測定酶活性，研究了槲皮素和蘆丁分別對AChE和BChE活性的影響水平，槲皮素對兩種酶抑制的IC50值分別為0.181 mmol/L、0.203 mmol/L，蘆丁的相應IC50值分別為0.219 mmol/L、0.288 mmol/L，兩者對AChE和BChE活性均有明顯的抑制作用，且槲皮素的酶抑制作用稍高于蘆丁。Khan等[36]研究了4種黃酮類物質分別對AChE、BChE活性的影響，槲皮素抑制兩種酶的IC50值分別為353.86 μmol/L、420.76 μmol/L，與前述報道結果相當;但蘆丁對兩種酶無明顯抑制作用（在高濃度下對酶的抑制率低于50%）;酶反應動力學研究顯示槲皮素對兩種酶均表現出競爭性的抑制作用，槲皮素在AChE和BChE活性位點的對接計算中顯示出較低的對接能值（-268.48 kJ/mol、

-281.92 kJ/mol）和結合能值（-1.59 kJ/mol、

-1.98 kJ/mol），此結果與酶活性測定結果相吻合。

黃酮類物質對酶的抑制作用與分子結構中的羥基數量有關，研究者們將分子對接結果與其結構相聯系，總結了可能的構效關系。Katalini?等[37]使用分子對接模擬軟件計算確定8種黃酮類化合物對BChE存在可逆抑制作用，抑制能力由大到小順序為高良姜素（6.9 μmol/L）、芹菜素（37.4 μmol/L）、山奈素（43.1 μmol/L）、槲皮素（68.0 μmol/L）、楊梅素（71.0 μmol/L）、漆黃素（90.0 μmol/L）、木犀草素（166.1 μmol/L）、蘆丁（501.2 μmol/L），由此推測類黃酮物質分子中側苯基環(huán)上的-OH數量越少對BChE抑制作用越強。Xie等[38]用Ellman方法測定黃酮類物質抑制酶活性的水平，并通過熒光滴定法測定其與酶結合的親和力，從分子結構角度解釋了其對AChE的活性抑制能力。如表2所示，漆黃素5'（A環(huán)）位置上的羥基化使其抑制AChE活性作用增大了20.4倍，山奈素3'（B環(huán)）位置的羥基化使其對酶活性的抑制作用增大了6.3倍。黃酮類化合物A環(huán)和B環(huán)中的羥基增加了其與AChE的親和力，使得其對AChE活性的抑制作用增強。

整體看來，雖然不同實驗方法所得出的黃酮及其苷類對膽堿酯酶的抑制作用不同，槲皮素對AChE和BChE的抑制作用最強，IC50值分別為0.181～15.7 mmol/L和0.203～0.421 mmol/L。從構效關系上看，黃酮及其苷類物質B環(huán)上的羥基對其抑制AChE和BChE活性影響效果相反，以山奈素和槲皮素為例（山奈素比槲皮素在B環(huán)少1個羥基），山奈素對AChE抑制能力低于槲皮素，而對BChE抑制能力高于槲皮素[38]。

綜合以上研究報道，在酶抑制法應用于茶葉中農殘速測的研究中，黃酮類物質對結果的干擾情況應根據具體的酶反應體系加以判斷;考慮到槲皮素是茶葉中含量最高的黃酮醇，可以選擇受槲皮素影響小的酶體系，或者優(yōu)先考慮選擇性去除槲皮素成分以降低基質對檢測結果的干擾。當綜合考慮茶葉中的實際含量時，黃酮類物質對酶活性的影響應遠小于兒茶素類成分。

2.1.3? 酚酸和縮酚酸類對酶活性的影響

酚酸屬于芳香族化合物，其分子中含有羧基和羥基，兩分子的酚酸通過羧基與羧基之間的相互作用縮合形成縮酚酸[9]。茶葉中的酚酸類含量較少，主要包括沒食子酸（含量0.5%～4.0%）、鞣花酸（含量0.1%～3.2%）、綠原酸（含量0.1%～0.4%）、咖啡酸和對香豆酸（含量均不超過0.02%），這5種酚酸類物質的總量在0.8%～5.0%之間[39]。酚酸類化合物具有茶多酚物質共有的生理功能，對茶葉品質也有重要的影響，如沒食子酸可以參與兒茶素的氧化而形成茶黃素類物質[40]。

有研究報道指出，沒食子酸可以中度抑制AChE的水解活性，IC50值為2.99 μmol/mL，其熱水解產物鄰苯三酚表現出更強的酶抑制作用，IC50值為0.18 μmol/mL，是沒食子酸的抑制能力的16倍[25]。Akomolafe等[41]篩選了3種酚酸類物質，研究其對膽堿酯酶活性的影響，發(fā)現沒食子酸對AChE幾乎無抑制作用，在1 mg/mL質量濃度下對BChE有中度抑制作用，抑制率為48.8%;綠原酸和咖啡酸對AChE和BChE均無抑制作用;作者以咖啡酸飼喂大鼠后，測定大鼠大腦勻漿和大腦皮層中的AChE活性，試驗結果證實咖啡酸單獨給藥對酶的活性無影響（與對照組相比）。

沒食子酸是茶葉中含量最高的酚酸類物質，且目前的研究中，只有它表現出了對AChE和BChE活性的抑制作用。因此，在茶葉快速檢測中只需排除沒食子酸單一酚酸類干擾物質的影響。另外，酚酸類物質在茶葉中總體含量較低，而且整體對酶的抑制活性不明顯，也可忽略其對檢測體系中的酶干擾作用。

2.2? 咖啡堿對酶活性的影響

咖啡堿又名1，3，7-三甲基黃嘌呤，屬于嘌呤堿（即由1個嘧啶環(huán)和1個咪唑環(huán)稠合而成），是茶葉中含量最高的生物堿類化合物，占茶葉干重的2%～4%[9]。咖啡堿呈苦味，是影響茶葉滋味的重要理化成分之一，多存在于茶樹的幼嫩芽葉中，其含量常被人們作為評判真假茶葉的重要指標之一[42]。

Fabiani等[43]研究發(fā)現紅茶的甲醇提取物對AChE活性抑制的IC50值可達0.043 mg/mL，后用二氯甲烷萃取提取物，經色譜分離后組分3對酶活性的抑制作用最強，經鑒定該組分為咖啡堿。Okello等[25]試驗測定咖啡堿體外抑制AChE（電鰻提取）的IC50為0.25 μmol/ml。Akomolafe等[41]給大鼠飼喂50 mg/kg咖啡堿，7 d后大鼠腦勻漿和大腦皮層中AChE活性分別被抑制16%、13%。

除了通過測定咖啡堿的膽堿酯酶活性抑制水平外，研究者們對咖啡堿的抑制機理也進行了探索，但不同實驗室所得出的結論具有較大差異。Pohanka等[44]根據Dixon圖判斷咖啡堿是AChE和BChE的非競爭性抑制劑，其對AChE的Ki值是BChE近8萬分之一（對兩種酶的Ki分別為：175 μmol/L ± 9 μmol/L、13.9 mol/L ± 7.4 mol/L）;分子對接計算顯示咖啡堿對AChE具有較低的結合能（?28.05 kJ/mol），因而咖啡堿可以有效抑制AChE的活性。Stoytcheva等[45]將牛紅細胞中AChE固定在電化學生物傳感器上，采用電化學方法分析抑制劑對酶的影響，其結果顯示咖啡堿是AChE的有效競爭性抑制劑，Ki為0.75 μmol/L，約是標準抑制劑加蘭它敏的2倍。

咖啡堿是AChE的有效抑制劑，但對BChE幾乎無抑制作用。因而，在酶抑制法應用中可以通過酶源的篩選排除或降低檢測樣品中咖啡堿的基質干擾。另外，目前已有的文獻報道中咖啡堿對AChE的抑制機理并無一致的結論，需要進一步研究探索。

2.3? 茶葉提取物對酶活性的影響

茶葉提取物一般是由茶葉經過提取、過濾、濃縮、萃取、干燥、粉碎、過篩等制備工序而獲得，主要成分包括茶多酚（EGCG、ECG、EC等）、少量的咖啡堿和沒食子酸等[46]。

不同種類的茶葉提取物對膽堿酯酶均具有一定的抑制作用并呈現出濃度依賴性的抑制關系。Min等[47]通過Ellman方法實驗測定，明確綠茶提取物（GTE）是酶的潛在抑制劑，在質量濃度為0.6 mg/mL時，其對固定化AChE的抑制率為54.6%。Mathiyazahan等[48]用基于ELISA方法測定大鼠的海馬體和大腦皮層中AChE活性，與AlCl3處理的大鼠相比，紅茶提取物（BTE）聯合給藥顯著且劑量依賴性地抑制AChE活性。當實驗組大鼠飲水中BTE添加量為3%時，大鼠海馬體和大腦皮層中AChE活性最低。Okello等[25]采用Ellman比色法在96平底孔板上測定酶活性，結果顯示GTE和白茶提取物（WTE）對AChE均有濃度相關的抑制作用，兩者在實驗最高質量濃度28.4 μg /mL時對AChE抑制率分別為80.4%、85.7%，IC50值分別為8.06 μg / mL和7.20 μg / mL。作者指出，GTE 和WTE本身含有相似水平的EGCG、ECG、可可堿和咖啡堿，但同時GTE含有較高水平的黃酮醇衍生物而WTE含有較高水平的葡萄糖衍生物。但它們化學成分的差異部分并沒有顯著影響其對AChE抑制。Okello等[49]還發(fā)現GTE和BTE對AChE和BChE活性的抑制效果與濃度水平正相關，且同濃度下抑制水平幾乎相同，具體表現在兩者對AChE和BChE抑制的IC50值相近。劉德等[50]研究了6種茶葉提取物對AChE的抑制作用，認為綠茶、紅茶、烏龍茶、白茶等4種茶葉提取物對AChE的抑制率存在顯著差異，結論與Okello等的研究結果不同。推測這兩個實驗室研究結果的差異可能由茶葉提取中所用溶劑不同，造成了實際獲得的提取物成分組成具有較大差異。

3? 總結與展望

基質干擾是目前茶葉樣品農藥殘留速測中存在的主要問題，基質成分對膽堿酯酶活性的影響是造成這一問題的最重要的原因之一。茶多酚、咖啡堿等茶葉功能性成分與膽堿酯酶的相互作用在醫(yī)學領域有比較深入的研究，值得在茶葉速測方法的研究中加以借鑒和應用。

茶葉基質成分組成復雜，茶多酚、生物堿等不同基質對膽堿酯酶活性具有不同的影響水平。其中，含量高且種類多的是多酚類物質。EGCG是茶葉多酚類物質的典型代表，其對膽堿酯酶（AChE、BChE）均具有顯著的抑制作用。以咖啡堿為代表的生物堿類成分含量水平雖不及茶多酚，但是膽堿酯酶對其響應非常靈敏。咖啡堿能夠有效抑制AChE的活性，而幾乎對BChE無影響，且其抑制AChE活性的機理目前文獻中尚無一致結論。因而，在解決茶葉樣品酶抑制法農殘速測中的基質干擾問題時，首先應考慮降低茶多酚（特別是EGCG）和咖啡堿的干擾作用，可在前處理中利用特定吸附劑選擇性去除這兩類基質成分。同時，也可考慮選擇BChE體系檢測以減少咖啡堿對檢測體系的干擾。另外，已有研究中明確了茶葉基質與膽堿酯酶的分子結合位點，在具體的結合位點對酶進行一定的修飾，改變結合位點的氨基酸殘基結構，也是抗干擾檢測可嘗試的研究思路之一。

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